Hepatitis adalah penyakit serius yang memiliki banyak penyebab. Dasar perkembangannya adalah kerusakan langsung atau tidak langsung pada hati. Mengingat pentingnya bagi seluruh organisme, kita hanya bisa menebak betapa sulitnya patologi itu. Pada artikel ini kita akan memeriksa secara lebih rinci fitur kursus dan diagnosis laboratorium hepatitis C.
Penyebab penyakit ini adalah agen virus yang merujuk pada patogen yang mengandung RNA. Ini memiliki fitur khas - kemampuan untuk bermutasi, yaitu mengubah strukturnya. Karena ini, infeksi lolos dari serangan sistem kekebalan tubuh dan dalam kebanyakan kasus menyebabkan peradangan kronis di hati.
Mengingat adanya subtipe virus yang berbeda, pemilihan obat harus didasarkan pada hasil genotipe. Meskipun penelitian yang panjang tentang penyakit dan fitur struktur HCV, belum dimungkinkan untuk mengembangkan vaksin spesifik untuk penyakit ini.
Kesulitan diagnosis dini terletak pada perjalanan hepatitis yang asimptomatik, sebagai akibatnya seseorang mengunjungi dokter pada tahap sirosis. Untuk mendeteksi suatu penyakit pada waktunya, diperlukan pemeriksaan medis berkala. Hanya dengan tes darah di laboratorium dimungkinkan untuk mendeteksi HCV dan mencegah infeksi orang-orang di sekitar Anda. Faktanya adalah bahwa pembawa infeksi untuk waktu yang lama tidak dapat menebak tentang patologi dan terus menularkan virus ke orang sehat.
Cara Penularan
Dalam kebanyakan kasus, virus menyebar melalui darah, karena mengandung konsentrasi agen patogen tertinggi. Dengan demikian, infeksi ditularkan:
- dengan hemodialisis;
- dengan jarum yang terinfeksi;
- dalam proses pertempuran, ketika kulit terluka, dan terjadi kontak darah;
- dengan transfusi darah (transfusi darah).
Kemungkinan infeksi selama keintiman tidak signifikan, karena ada sejumlah kecil patogen dalam air mani dan keputihan. Risiko infeksi meningkat secara signifikan karena melanggar integritas selaput lendir alat kelamin. Ini diamati dengan seks agresif dan anal.
Adapun mode transmisi vertikal, itu dilakukan dalam proses persalinan. Pada masa kehamilan janin, patogen tidak dapat menembus plasenta menuju embrio. Pada persalinan alami, agen patogen ditransmisikan ke anak dengan trauma kulitnya, ketika kontak dengan darah ibu diamati.
Setelah penetrasi patogen ke dalam organisme yang sehat, sintesis antibodi dimulai, yang merupakan perlindungan dari infeksi dan milik struktur kekebalan tubuh. Mereka ditemukan dalam studi awal seseorang menggunakan ELISA.
Untuk mengkonfirmasi diagnosis, pasien mengalami reaksi berantai polimerase. Ini adalah analisis materi genetik dari agen patogen dan penentuan viral load.
Diagnosis laboratorium hepatitis C
Diagnosis laboratorium dimulai dengan immunoassay enzim. Tugas utamanya adalah untuk mendeteksi antibodi yang dihasilkan terhadap patogen. Efisiensinya hampir 95%. Berkat penelitian ini, dimungkinkan untuk mengidentifikasi pembawa virus pada tahap praklinis dan mengirimkannya untuk pemeriksaan lebih lanjut.
Analisis kualitatif ELISA menunjukkan ada atau tidak adanya imunoglobulin dalam darah pasien. Hasilnya mungkin "positif" atau "negatif." Setelah menerima jawaban pertama, orang tersebut dikirim untuk pemeriksaan berikutnya - PCR. Harganya tergantung pada kualitas reagen dan laboratorium. Biaya reaksi berantai polimerase dapat mencapai 4 ribu rubel.
Fitur PCR
Menggunakan reaksi berantai polimerase, bahkan sejumlah kecil bahan biologis memungkinkan kita untuk memperkirakan viral load dalam darah, yaitu, untuk menghitung konsentrasi patogen dalam satu mililiter cairan.
Dengan munculnya PCR, diagnosis hepatitis menjadi lebih mudah. Analisis ini memungkinkan untuk mengidentifikasi RNA HCV, untuk menetapkan tahap proses infeksi dan infeksi dari pembawa virus.
Ada beberapa jenis diagnosis genetik:
- Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C - mengkonfirmasi ada atau tidak adanya HCV dalam darah subjek:
- kuantitatif, yang melaluinya Anda dapat menghitung konsentrasi virus dan menentukan stadium penyakit. Hasilnya diberikan dalam IU / ml atau salinan / ml (tergantung pada laboratorium);
- genotyping - diperlukan untuk menentukan genotipe HCV. Ini diperlukan untuk pemilihan obat yang akurat yang akan paling efektif dalam kasus ini. Analisis secara tidak langsung menunjukkan tingkat keparahan proses patologis di hati. Jadi, pada genotipe ketiga patogen, steatosis paling sering diamati, yang dasarnya adalah penumpukan lemak pada hepatosit (sel-selnya). Selain itu, jenis virus mempengaruhi hasil dan lamanya kursus terapi.
Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C
Pertama-tama, bahan biologis diperiksa di laboratorium untuk keberadaan RNA HCV. Penting untuk diingat bahwa analisis kualitatif hepatitis C memiliki tingkat sensitivitas tertentu, dan karena itu mungkin tidak selalu memberikan jawaban yang benar. Dalam hal ini, disarankan untuk melakukan kembali diagnosa laboratorium menggunakan reagen lain.
Untuk mendapatkan hasil yang andal, sistem uji dengan sensitivitas minimal 50 IU / ml harus digunakan.
Hasil diagnostik dapat berupa "positif" atau "negatif". Jika patogen tidak ditemukan dalam darah, penelitian selesai. Jika agen patogen terdeteksi dalam sampel, maka viral load dikuantifikasi.
Respons negatif palsu diperoleh ketika proses dilanggar, misalnya, komponen aktif yang menekan konstruksi salinan patogen memasuki media. Dengan demikian, tidak mungkin untuk menampilkan gambaran darah yang sebenarnya, itulah sebabnya infeksi seseorang tidak didiagnosis.
Hasil positif palsu dapat diperoleh jika tabung untuk pengumpulan bahan biologis, serta lingkungan untuk penelitian terkontaminasi. Selain itu, tanggapan analisis semacam itu dimungkinkan dengan infeksi campuran, ketika hati dipengaruhi oleh beberapa virus, misalnya, hepatitis C dan D.
Indikasi untuk penelitian kualitatif
Dokter mungkin meresepkan pasien studi kualitatif tentang identifikasi RNA virus hepatitis C:
- setelah menerima tanggapan immunoassay enzim positif atau meragukan;
- untuk verifikasi diagnosis;
- menentukan viral load;
- pengaturan stadium penyakit;
- diagnosis infeksi campuran. Hepatitis C sering menginfeksi hati bersamaan dengan virus "D";
- penentuan taktik terapi dengan mempertimbangkan genotip agen penyebab;
- menilai dinamika perubahan selama pengobatan dengan obat antivirus.
Keuntungan dari reaksi berantai polimerase meliputi:
- sensitivitas teknik yang tinggi, yang memungkinkan untuk menetapkan fakta infeksi pada tahap praklinis;
- identifikasi bahan genetik patogen, dan bukan antibodinya;
- kemungkinan membangun subtipe agen patogen;
- tingkat diagnostik yang tinggi, karena tidak diperlukan penyemaian bahan pada media nutrisi, dan cukup untuk menggunakan sistem pengujian khusus. Seseorang mendapatkan hasilnya setelah 5 jam;
- keserbagunaan. Analisis ini memungkinkan untuk mengidentifikasi bahan genetik apa pun (RNA, DNA). Berkat ini, dokter dapat mengonfirmasi hepatitis C dan jenis penyakit lainnya (B);
- kemampuan untuk mendeteksi infeksi laten.
Penelitian kuantitatif
Dalam studi darah menggunakan reaksi berantai polimerase dapat menghitung jumlah patogen dalam volume tetap bahan biologis. Indikator disajikan dalam IU / ml. Melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan tingkat penularan pasien, menentukan tahap proses infeksi, dan juga mengevaluasi efektivitas terapi obat.
Atas dasar PCR, spesialis memutuskan dosis obat mana yang dapat menghalangi reproduksi patogen. Selain itu, durasi pengobatan antivirus dan prognosis seumur hidup ditentukan. Penting untuk diingat bahwa sistem pengujian memiliki sensitivitas tinggi, oleh karena itu, metode ini memungkinkan untuk mengkonfirmasi infeksi seseorang pada tahap praklinis.
Genotipe
Mengingat kemampuan patogen untuk bermutasi, genotipnya diperlukan untuk menentukan taktik pengobatan dan pilihan obat antivirus. Misalnya, pengobatan HCV 1 berlangsung selama 48 minggu, dengan tren positif diamati hanya pada 60% kasus. Genotipe 2 dan 3 memiliki prognosis yang lebih baik. Obat antivirus diresepkan selama 8 bulan, dan efektivitasnya mencapai 85%.
Menurut statistik, dalam kebanyakan kasus, HCV 1, 2 dan 3 terdaftar di Federasi Rusia.
Saat menguraikan tes laboratorium, jawaban ini dapat ditunjukkan - "tidak diketik". Ini berarti bahwa virus beredar di sistem peredaran darah pasien dan tidak dapat dikenali oleh sistem tes. Hasil analisis dalam kasus ini menunjukkan bahwa patogen tidak khas untuk wilayah geografis tertentu.
Bagaimana cara mendapatkan hasil yang andal?
Agar penelitian kualitatif PCR untuk mendeteksi RNA dari agen penyebab hepatitis C menunjukkan hasil yang benar, perlu untuk mengamati persyaratan untuk mempersiapkan diagnosa laboratorium:
- pengambilan sampel darah dilakukan dengan perut kosong, dan celah "lapar" tidak boleh lebih pendek dari 8 jam;
- dua hari sebelum penelitian, disarankan untuk berhenti minum minuman beralkohol dan meninggalkan hidangan pedas, berlemak dan merokok;
- membatalkan pengenalan obat yang mengurangi pembekuan darah, misalnya, heparin. Jika obat ini diresepkan untuk alasan kesehatan, Anda harus memberi tahu dokter. Selain itu, spesialis harus mewaspadai masuknya obat lain yang dapat memengaruhi hasil penelitian laboratorium;
- Pada malam pengumpulan bahan biologis, prosedur fisioterapi tidak boleh dilakukan dan harus dikerahkan tenaga fisik yang berat.
Hasil analisis dapat dipengaruhi tidak hanya oleh orang yang mendonorkan darah, tetapi juga oleh faktor-faktor lain, yaitu:
- pengambilan sampel darah berkualitas buruk;
- ketidakpatuhan dengan rekomendasi tentang pengangkutan material biologis;
- pelatihan pekerja laboratorium yang tidak memadai;
- ketidakpatuhan dengan teknik penelitian;
- pengenalan antikoagulan (heparin) pada malam pengambilan sampel darah. Kelompok obat ini mengurangi pembekuan, sehingga memperlambat kerja reagen.
Di laboratorium yang berbeda, respons diagnostik mungkin sedikit berbeda, tetapi kesalahan ini tidak mempengaruhi hasil akhir penelitian.
Perhatian khusus diberikan pada jenis sistem pengujian yang digunakan di laboratorium. Seringkali preferensi diberikan kepada reagen dengan sensitivitas tinggi. Ini penting untuk pasien dengan viral load rendah karena sulit dideteksi.
Seberapa sering tes laboratorium dilakukan?
Reaksi rantai polimerase primer dilakukan pada orang yang telah terdeteksi oleh immunoassay untuk antibodi terhadap patogen hepatitis. Dalam hal ini, ditugaskan untuk mengkonfirmasi fakta infeksi seseorang dan menentukan stadium penyakit. Selain itu, analisis ini memungkinkan untuk menentukan subtipe virus, yang sangat penting untuk pemilihan obat.
Periode berikutnya untuk pengujian laboratorium wajib adalah 3 bulan sejak dimulainya terapi antivirus. Diagnosis memungkinkan untuk mengevaluasi efektivitas obat-obatan, menyesuaikan dosis atau menggantinya.
Selain tes dasar, PCR juga dapat dilakukan pada 4 dan 24 minggu dari awal pengobatan. Prognosis positif dari penyakit ini dikonfirmasi oleh penurunan viral load setelah tiga bulan terapi. Sebagai contoh, seharusnya turun dari 1 juta IU / ml menjadi beberapa ratus ribu.
Jika konsentrasi agen patogen dalam darah tetap pada tingkat yang sama atau sedikit meningkat, ini menunjukkan ketidakefektifan agen antivirus dan memerlukan penggantian mereka. Menggunakan PCR pada akhir perawatan, adalah mungkin untuk mengkonfirmasi pemulihan pasien.
Untuk menginterpretasikan hasil diagnosa laboratorium dengan benar, diperlukan konsultasi dengan spesialis hepatologis atau penyakit menular. Mengingat tingginya frekuensi tanggapan salah dalam ELISA, analisis ini digunakan secara eksklusif untuk penyaringan primer. Untuk pemeriksaan pasien yang lebih menyeluruh digunakan reaksi berantai polimerase.
Analisis pro PCR untuk virus hepatitis C
Hepatitis C adalah penyakit hati serius bagi siapa saja. Patologi ini disebabkan oleh flavivirus HCV, dalam struktur di mana molekul RNA hadir, yang menyandang kode genetik umum virus.
Patologi dapat dari berbagai bentuk, semuanya secara langsung tergantung pada kondisi umum orang tersebut dan karakteristik masing-masing organisme.
Struktur ini memungkinkan untuk menganalisis PCR untuk keberadaan di dalam tubuh virus dari kategori hepatitis C.
Ini memungkinkan Anda mengidentifikasi virus yang berbahaya bagi manusia, menjalani pengobatan, memulihkan kesehatan, melindungi tubuh dari kehancuran hati.
Virus HCV dapat memanifestasikan dirinya, baik dalam bentuk akut - berbahaya, maupun kronis. Jika seseorang pada suatu waktu mendeteksi virus ini, ia harus ditugaskan untuk analisis PCR.
Mengapa analisis PCR dilakukan?
Berdasarkan hasil analisis, dokter akan dapat menyusun rejimen pengobatan.
Analisis medis laboratorium PCR untuk hepatitis C adalah studi tentang bahan biologis yang diambil untuk menentukan flavavirus. Penelitian ini merupakan singkatan dari reaksi berantai polimerase.
Ini menunjukkan nilai kuantitatif total lesi virus, sifat kualitatifnya, dan juga dimungkinkan untuk menentukan genotipe virus yang mengandung RNA.
Itu penting! Berdasarkan analisis ini, dokter menentukan metode, jenis terapi dan durasinya. Juga, melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan faktor epidemiologis keseluruhan, yaitu, tingkat risiko penularan penyakit ke pembawa lain.
Analisis dalam kedokteran modern juga disebut analisis RNA. Alasannya adalah bahwa yang melekat pada flavavirus hepatitis C terdiri dari partikel RNA, yang ukurannya sekitar 30-60 nm. Salah satu ciri khas virus ini adalah kecenderungan mutasi tertentu.
Setiap subspesies atau genotipe yang ada memiliki beragam resistensi. Keadaan ini menjadi dasar untuk berbagai metode penelitian dan pengobatan penyakit, serta prognosis lebih lanjut dengan terapi yang dilakukan dengan baik.
Bagaimana bisa
Analisis dilakukan secara ketat pada perut kosong, yaitu, darah vena diberikan sebelum sarapan. Metode pengujian dilakukan dengan PCR Real-Time atau sangat sensitif dengan diagnostik standar modern, yang dilakukan secara real time.
Batas deteksi terendah dalam kasus ini adalah 15 IU / ml. Analisis dilakukan secara ketat menggunakan sistem otomatis tertutup. Hepatitis C dapat ditentukan dengan menggunakan tes seperti COBAS AMPLICOR dengan tingkat sensitivitas keseluruhan 50-100 IU / ml.
Itu penting! Semua jenis penelitian laboratorium modern serupa dilakukan berdasarkan pertimbangan ambang batas sensitivitas tertentu.
Kita berbicara tentang kemampuan reagen yang digunakan untuk mendeteksi tingkat minimum dari kemampuan reagen untuk menentukan virus dalam bahan biologis yang diteliti. Jika tidak ada penyakit dalam tubuh, hasil penelitian akan terlihat seperti "tidak ditemukan".
Gambar menunjukkan rangkaian analisis PCR:
Jenis analisis PCR dan hasilnya
Jika Anda memiliki penyakit dan rasa sakit yang paling kecil di bidang kue, Anda harus segera berkonsultasi dengan dokter yang akan melakukan penelitian menyeluruh. Analisis PCR untuk hepatitis C didasarkan pada tiga poin utama:
- Analisis kuantitatif.
- Analisis kualitatif.
- Genotipe
Tes yang dilakukan memberikan kesempatan untuk menentukan dan mengidentifikasi sifat viremia yang tepat dan gejala rencana genetik yang berbeda dari keberadaan patogen. Dalam proporsi langsung ke sensitivitas, dari sistem diagnostik yang dilakukan, penelitian medis dapat dilakukan sekali, serta beberapa konfirmasi.
Ini harus dilakukan untuk mengklarifikasi hasil yang diperoleh sebelumnya, dan digunakan dalam kasus ini oleh pereaksi yang lebih sensitif.
PCR berkualitas tinggi
Analisis kualitatif untuk PCR adalah nama lain untuk penelitian seperti reaksi berantai polimerase. Dengan sensitivitas standar tes, yang memungkinkan untuk menentukan keberadaan mikroba virus, indikator akan berada di kisaran 10-500 IU / ml.
Dengan analisis negatif penyakit, analisis akan menunjukkan bahwa tingkat konsentrasi total dalam darah pasien akan menjadi urutan lebih rendah dari ambang kerentanan umum untuk sistem diagnostik.
Jika respons "tidak terdeteksi" diperoleh selama PCR berkualitas, untuk perawatan selanjutnya, Anda harus mengetahui ambang batas sensitivitas total reagen. Adapun tanggapan positif, selama analisis PCR, dapat diperoleh sudah pada hari ke-4 setelah infeksi. Fraksi protein standar untuk flavavirus yang mapan mungkin muncul jauh di kemudian hari.
Skema umum analisis PCR dapat digambarkan sebagai berikut:
PCR kuantitatif
PCR kuantitatif adalah indikator khusus dari viral load yang dihasilkan, mencerminkan tingkat konsentrasi RNA virus secara keseluruhan dalam tubuh manusia. Indikator ini menunjukkan jumlah enzim RNA virus yang ada per sentimeter kubik yang diambil dari pembuluh darah.
Hasil penelitian ini dalam sistem penelitian medis dilambangkan dalam satuan satu mililiter. Pada sertifikat yang dikeluarkan di tangan, indikator ini mungkin terlihat seperti 1,7 juta atau 1.700.000 IU / ml.
Analisis kuantitatif PCR ditugaskan untuk pasien tersebut sebelum melakukan terapi anti-virus. Kali kedua diadakan pada minggu ke-12 pengobatan, yang memungkinkan Anda untuk mengevaluasi dengan benar hasil terapi dengan hepatitis C. Dengan kata lain, analisis memungkinkan untuk menentukan parameter penting seperti:
- Tingkat infektivitas, yaitu, tingkat risiko penularan mikroba dari orang yang terinfeksi ke orang sehat ditentukan. Semakin tinggi konsentrasi flavavirus RNA, semakin tinggi kemungkinan infeksi pada orang lain, yang penting dalam hubungan seksual.
- Tingkat keseluruhan efektivitas dan metode perawatan yang dipilih.
- Ini adalah peluang ideal untuk menentukan durasi dan prognosis terapi antivirus. Sebagai aturan, semakin tinggi beban, semakin lama perawatan akan berlangsung.
Perlu diketahui bahwa PCR kuantitatif tergantung pada jenis tes laboratorium tertentu dan ambang sensitivitas. Batas terendah dari standar yang ditetapkan adalah indikator tidak mencapai 600.000 IU / ml.
Rata-rata berada di kisaran 600.000 hingga 700.000 IU / ml. Jika hasilnya diperoleh di atas 800.000 IU / ml, dokter segera menentukan tingkat konsentrasi zat yang tinggi seperti RNA dengan virus yang ada dalam komposisi.
Itu penting! Hubungan langsung antara tingkat RNA HCV dan tingkat keparahan penyakit menunjukkan bahwa virus ini hadir dalam komposisi darah secara keseluruhan, dan juga mencatat kompleksitas patologi. Pasien mungkin memiliki viral load yang cukup tinggi. Selain itu, hubungan ini menunjukkan bahwa ada kerusakan yang cukup serius pada sel.
Genotipe
Karena aktivitas mutasi HCV yang relatif tinggi di alam, dalam perjalanan pengujian yang dilakukan, adalah mungkin untuk menentukan bagaimana jenis virus hadir dalam darah orang yang sakit. Dalam kedokteran modern, 11 genotipe virus seperti hepatitis C diketahui, termasuk sejumlah besar subspesies atau subtipe yang berbeda.
Tipe 1,2 dan 3 dikenal dan umum di Rusia. Secara umum, genotyping adalah elemen yang sangat penting dari analisis yang dilakukan. Dengan itu, dokter memahami tingkat resistensi atau ketahanan patologi terhadap obat yang dipilih.
Hampir selalu, berdasarkan analisis ini, perawatan di masa depan dibangun. Ini penting karena ada aturan perawatan seperti:
Analisis kualitatif untuk hepatitis C
8 Maret 2017, 12:29 Artikel pakar: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547
Analisis kualitatif reaksi rantai polimerase - PCR untuk hepatitis C menentukan ada atau tidaknya HCV dalam tubuh. Dalam kondisi laboratorium, struktur RNA diselidiki, yang akan mencakup virus. Dalam hal deteksi virus C, perlu menjalani pengobatan, karena keadaan hati yang terabaikan akan mengakibatkan konsekuensi yang serius. PCR berkualitas tinggi dilakukan setelah pemulihan untuk memastikan tidak adanya antibodi. Diangkat dan untuk inspeksi rutin. Dengan konsentrasi rendah agen penyebab dalam darah, PCR (kualitatif) tidak dapat mendeteksi apa pun, karena sistem diagnostik memiliki ambang sensitivitasnya sendiri. Dalam kasus tahap awal penyakit atau bentuk ringan, PCR dilakukan oleh ultradiagnostik pada peralatan ultra-sensitif.
Apa itu virus RNA?
Istilah RNA dari virus hepatitis C (atau RNA virus hepatitis C) adalah penyakit hati itu sendiri. Virus C berikatan dengan sel tubuh yang sehat dengan cara menembus ke dalam. Seiring waktu, menyebar ke seluruh tubuh, perlu hanya untuk masuk ke dalam darah. Akibatnya, patogen menembus hati, menyatu dengan sel-selnya dan bekerja keras. Sel-sel hati (hepatosit) bekerja di bawah pengaruhnya, mengalami perubahan, dan dari sini mereka mati. Semakin lama virus C ada di hati, semakin besar jumlah sel yang mati. Seiring waktu, penyakit berbahaya berkembang, yang mengarah ke degenerasi dan kematian ganas.
Infeksi hati dengan jenis virus ini mungkin tidak memanifestasikan dirinya secara eksternal. Selama bertahun-tahun atau beberapa dekade, orang yang terinfeksi merasa benar-benar sehat, dan hanya pemeriksaan acak yang paling sering mengungkapkan patologi. Ketika mendonorkan darah untuk hepatitis, sebagian dari rantai RNA (asam ribonukleat), yang merupakan bagian dari gen manusia (DNA), diperiksa. Hasil tes laboratorium tidak boleh digunakan untuk pengobatan sendiri, karena ini hanya indikator. Gambaran yang tepat dan diagnosis lebih lanjut lebih baik ditentukan oleh dokter.
Ketika dilakukan: indikasi untuk penelitian
Dalam konfirmasi HCV, analisis PCR dilakukan (reaksi berantai polimerase). Studi PCR membantu menemukan agen penyebab dalam struktur RNA dan meresepkan terapi yang efektif. Diangkat dalam kasus berikut:
- deteksi tanda-tanda peradangan hati;
- studi penyaringan untuk pencegahan;
- pemeriksaan orang yang berhubungan;
- diagnosis hepatitis asal campuran (penentuan patogen utama);
- menentukan tingkat aktivitas reproduksi virus dalam bentuk kronis;
- sirosis hati;
- untuk menentukan efektivitas pengobatan yang ditentukan.
Ada analisis kualitatif dan kuantitatif PCR. PCR kuantitatif menunjukkan persentase RNA dengan pembawa virus dalam darah, dan kualitatif menunjukkan ada atau tidaknya virus. Indikator kualitas yang positif (adanya RNA Hepatitis C) juga perlu penelitian kuantitatif. Tingkat konsentrasi tinggi dari agen penyebab hepatitis C dikaitkan dengan risiko penularannya, yaitu infeksi orang lain. Angka yang rendah lebih bisa diobati. Jumlah virus RNA dalam darah tidak terkait dengan intensitas penyakit. Analisis PCR juga dilakukan dalam kasus terapi interferon untuk menentukan durasi dan kompleksitas kursus pengobatan.
Fitur analisis PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C
Analisis kualitatif ditugaskan dengan indikator reaksi berantai polimerase untuk semua pasien yang memiliki antibodi terhadap hepatitis C dalam darah mereka. Mereka yang sakit dan pulih harus mengikuti tes ulang. Dianjurkan untuk mengambil analisis untuk hepatitis B, kemudian, dalam hal kesimpulan positif, dan untuk hepatitis D. Juga, reaksi yang dianalisis secara kualitatif harus dilakukan bersamaan dengan tes darah lainnya. Analisis akan menampilkan gambaran lengkap penyebaran virus.
Dari hasil tes, hanya tes positif untuk hepatitis C yang akan terlihat atau negatif, yaitu ada atau tidak adanya virus. Jika outputnya "terdeteksi", maka virusnya dan terus menjadi aktif. Penunjukan "tidak terdeteksi" menunjukkan tidak adanya virus atau jumlahnya kecil. Dengan indikator ini, harus diingat bahwa sensitivitas analitis sistem diagnostik berbeda dan RNA hepatitis C mungkin masih ada dalam darah, tetapi tidak termanifestasi dalam analisis.
Metode PCR yang sangat sensitif mengungkapkan ultra hepatitis C bahkan dalam jumlah sedikit. Penelitian hibridisasi fluoresensi digunakan, yang berkali-kali lebih tinggi dari sistem PCR standar. Metode ini digunakan dalam beberapa kasus:
- diduga bentuk tersembunyi hepatitis C;
- Diagnosis PCR tidak mengkonfirmasi patogen, tetapi ada antibodi;
- dalam hal pemulihan;
- untuk mendeteksi infeksi dini.
Analisis decoding
Penguraian HCV PCR mempengaruhi keputusan akhir ketika membuat diagnosis, khususnya, dengan metode ultrametod. Kerugian utama dari penelitian ini adalah kepatuhan yang ketat terhadap kondisi steril untuk sampel dan bahan. Sedikit penyimpangan kadang-kadang menunjukkan kesimpulan analitik yang tidak akurat, mempersulit diagnosis dan perawatan selanjutnya. Analisis PCR untuk penentuan hepatitis RNA tidak selalu dengan penuh percaya diri menunjukkan gambaran penyakit, kadang-kadang ketidakakuratan diperbolehkan, dan dari dua arah.
Mendiagnosis virus hepatitis, disarankan untuk menggunakan pemeriksaan komprehensif.
Norma indikator
Tidak adanya antibodi JgM terhadap virus hepatitis C dalam hasil penelitian dianggap sebagai norma dalam analisis reaksi berantai polimerase. Pada saat yang sama, temuan analisis serologis menunjukkan adanya antibodi terhadap virus C dan ini juga dalam kisaran normal. Definisi kualitatif tidak menunjukkan intensitas penyakit, hanya mengungkapkan agen penyebab hepatitis C dalam RNA. Analisis ini diulang setelah perawatan untuk mengkonfirmasi pemulihan yang sebenarnya.
Penyimpangan
Jika terdapat antibodi JgM terhadap RNA HCV, ini menunjukkan infeksi yang berkembang. Penyakit pada saat yang sama terjadi secara akut atau kronis, dimanifestasikan dalam berbagai tahap. Jika penurunan jumlah antibodi dicatat, analisis akan menunjukkan bahwa hasil pengobatan dicapai selama pemulihan. Ada kasus yang sangat jarang dari temuan positif palsu dalam diagnosa. Mereka ditemukan pada wanita selama kehamilan dan pada orang dengan penyakit menular lainnya.
Analisis PCR untuk Hepatitis C
Untuk diagnosis "virus hepatitis C kronis (CVHS)" memerlukan pemeriksaan komprehensif dari orang tersebut, yang meliputi studi klinis, laboratorium dan instrumental. Penting dari sudut pandang diagnosis untuk diagnosis yang benar adalah metode PCR - reaksi berantai polimerase.
Apa yang ditunjukkan oleh analisis ini dan mengapa diperlukan?
Metode laboratorium ini mendeteksi RNA dari virus hepatitis C dalam darah manusia. Bersama dengan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) untuk antibodi terhadap virus, PCR digunakan untuk membuat diagnosis CVHC dan genotipe patogennya. Penelitian ini adalah salah satu metode diagnostik laboratorium terbaru. Keandalannya di CVHS melebihi 97%, yang dianggap sebagai indikator yang sangat baik untuk penelitian.
Ada tiga tes darah PCR untuk CVHS: kualitatif, kuantitatif, dan genotipe virus. Studi pertama (analisis kualitatif) dari virus mendeteksi itu dalam darah, dan karenanya hanya digunakan untuk diagnosis.
Penelitian kedua (kuantitatif) menentukan tingkat viral load pada tubuh, oleh karena itu, digunakan untuk memantau efektivitas terapi.
PCR ketiga (genotip) mengklarifikasi diagnosis, menetapkan genotipe virus, yang sangat penting untuk penunjukan pengobatan antivirus yang tepat.
Inti dari teknik reaksi berantai polimerase adalah penggunaan enzim yang memperbanyak materi genetik patogen dalam biomaterial. Dalam proses replikasi seperti itu, tabung dengan darah dipanaskan beberapa kali dan didinginkan hingga suhu yang dibutuhkan untuk mempercepat reaksi enzimatik. Sebagai hasil dari manipulasi ini, jumlah genom virus meningkat berkali-kali, memungkinkannya untuk dideteksi bahkan dengan jumlah minimal.
Diagnostik PCR memiliki banyak keunggulan dibandingkan tes laboratorium lainnya:
- sensitivitas tinggi - 97-98%;
- spesifisitas analitik terjamin (mengungkapkan patogen yang tepat yang ingin Anda temukan, dan bukan strain yang terkait);
- kecepatan melakukan (dibutuhkan tidak lebih dari 2 hari untuk mendapatkan kesimpulan).
Tiga jenis tes PCR
Analisis PCR berkualitas tinggi ditugaskan untuk semua pasien yang analisis ELISA mendeteksi antibodi terhadap virus HVGS. Setelah melakukan PCR berkualitas tinggi, dua opsi respons dapat diperoleh: "RNA terdeteksi" atau "RNA tidak terdeteksi." Untuk mendeteksi jumlah minimum virus dalam darah, diperlukan sistem uji dengan sensitivitas minimal 50 IU / ml. Jika konsentrasi virus dalam darah pasien kurang dari yang diagnostik dapat tentukan, hasil penelitian mungkin negatif palsu. Untuk menghindari kesalahan diagnostik seperti itu, laboratorium yang melakukan diagnosa PCR harus dilengkapi dengan sistem pengujian yang sangat sensitif. Di laboratorium "Invitro", misalnya, tes dengan sensitivitas 15 IU / ml digunakan. Pekerja laboratorium berkewajiban untuk memberikan informasi tentang sensitivitas tes kepada pasien dan dokter atas permintaan pertama mereka.
Analisis kuantitatif PCR menentukan tingkat viremia, yaitu, konsentrasi patogen dalam darah, viral load. Hasil penelitian ini, berbeda dengan PCR berkualitas tinggi, dinyatakan dalam jumlah, misalnya, 2 × 10 * 6 IU / ml, yang berarti 2 juta unit internasional dalam 1 ml darah. Beberapa laboratorium menggunakan indikator lain - jumlah salinan / ml. Dua indikator ini mudah dikonversi: 1 unit internasional sama dengan 4 salinan RNA. Dengan demikian, 2 × 10 * 6 IU / ml akan berarti bahwa 8 × 10 * 6 salinan viral load dalam 1 ml, yaitu 8 juta kopi dalam 1 ml darah.
Genotipe adalah definisi dari satu dari enam genotipe virus. Gambaran klinis, tingkat perkembangan komplikasi hati dan prognosis untuk kehidupan masa depan pasien tergantung pada genotip agen penyebab. Genotipe virus sudah sangat penting pada tahap diagnosis, karena kombinasi obat dan durasi terapi yang akan diberikan kepada pasien tergantung pada penentuan yang benar.
Namun, bahkan penelitian laboratorium yang tampaknya “sempurna” ini memiliki kelemahan:
- studi ini mereplikasi materi genetik semua patogen, bahkan yang tidak hidup, yang dapat merusak hasilnya. Oleh karena itu, untuk memantau efektivitas dengan bantuan PCR, analisis ulang dilakukan tidak lebih awal dari 2 bulan setelah yang sebelumnya, sehingga virus yang mati dapat "meninggalkan" organisme pasien;
- bagian dari genom virus, yang ditentukan dengan menggunakan sistem uji, secara teoritis dapat hadir dalam virus atau mikroorganisme lain, sehingga ada kemungkinan tanggapan positif palsu;
- virus bermutasi dengan cepat. Terkadang kecepatan dan luasnya mutasi virus sangat tinggi sehingga sistem pengujian berhenti menangkap genomnya. Akibatnya, hasil negatif palsu dimungkinkan.
Untuk menyamakan kekurangan ini, produsen sistem uji laboratorium untuk diagnostik PCR secara konstan melakukan pengujian mereka, termasuk reaksi silang dan sensitivitas terhadap genotipe virus tertentu.
Bagaimana cara mengambil tes PCR untuk hepatitis C?
Agar kesimpulan pemeriksaan PCR dapat diandalkan, perlu untuk benar-benar mematuhi aturan persiapan untuk pelaksanaannya:
- penelitian dilakukan pada perut kosong (glukosa, lemak, mineral yang masuk ke dalam darah dari makanan, dapat mempengaruhi kecepatan dan kualitas reaksi enzim);
- jarak antara waktu makan terakhir dan pengambilan sampel darah untuk analisis minimal 8 jam;
- pada malam studi dilarang minum alkohol dan mengonsumsi makanan berlemak, periode eliminasi yang berlarut-larut;
- sehari sebelum pergi ke laboratorium harus menghindari tekanan fisik dan emosional yang kuat;
- sampai saat pengambilan sampel darah tidak dianjurkan untuk merokok.
Untuk menghindari munculnya kesimpulan yang salah, pasien yang diduga harus datang ke laboratorium sedikit lebih awal dari yang diambil darah. Butuh 15-20 menit bagi seseorang untuk menarik napas, tenang. Adrenalin, yang ada dalam darah setelah berjalan cepat, dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan.
Jika pasien yang dirujuk untuk analisis mengambil obat apa pun, ia harus memberi tahu dokter tentang hal ini. Ada kemungkinan bahwa beberapa dari mereka harus ditolak untuk beberapa waktu (jika mungkin).
Hasil analisis PCR untuk hepatitis C
Menguraikan hasil yang terlibat dalam dokter laboratorium dari laboratorium yang melakukan analisis. Decoding adalah penentuan penyimpangan hasil yang diperoleh dari norma. Tingkat indikator ditetapkan langsung oleh pabrikan sistem uji, yang digunakan oleh laboratorium untuk diagnostik. Oleh karena itu, tidak mengherankan bahwa di beberapa laboratorium viral load ditentukan dalam IU / ml, dan di laboratorium lain dalam salinan / ml.
Setelah menerima kesimpulan, perlu untuk dapat menafsirkannya dengan benar. Perawatan hasil penelitian harus dilakukan oleh dokter yang merawat pasien dengan hepatitis C. Hanya setelah pemeriksaan objektif, instrumental dan laboratorium pasien, dokter dapat memperoleh jumlah data yang cukup untuk interpretasi yang benar dari hasil PCR yang diperoleh.
Evaluasi analisis kualitatif, sebagai suatu peraturan, tidak menyebabkan kesulitan, bahkan pada pasien. Hasilnya hanya ada satu: "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi." Dalam hal ini, yang kedua adalah norma.
Indikator analisis kuantitatif lebih sulit diinterpretasikan. Ini menunjukkan tingkat viral load pada pasien. Bahkan di antara para ahli hepatologi, tidak ada konsensus tentang cara mengobati viremia yang terdeteksi. Kebanyakan dokter cenderung percaya bahwa beban tinggi lebih dari 8 × 10 * 5 IU / ml harus dipertimbangkan. Beban lebih dari 1 × 10 * 7 IU / ml dianggap sangat tinggi, sedangkan beban rendah kurang dari 4 × 10 * 5 IU / ml.
Tingkat viral load menunjukkan virulensi (agresivitas) virus: semakin besar jumlahnya dalam darah, semakin cepat komplikasi hati dapat berkembang. Konsentrasi tinggi virus dalam darah wanita hamil meningkatkan kemungkinan penetrasi melalui penghalang hemato-plasenta ke janin. Viremia juga memengaruhi efektivitas pengobatan: dengan jumlah yang rendah, efektivitas terapi lebih tinggi daripada yang tinggi.
Untuk menjadi percaya diri dalam keakuratan analisis PCR untuk hepatitis C, perlu untuk memberikan preferensi hanya untuk laboratorium yang terbukti baik. Kebijakan penetapan harga dalam hal ini seharusnya tidak memainkan peran utama.
Penggunaan diagnostik PCR
Reaksi rantai polimer (PCR) dalam biologi molekuler adalah metode eksperimental untuk mendeteksi virus. Ini memungkinkan Anda untuk secara signifikan meningkatkan konsentrasi fragmen asam nukleat tertentu (DNA) dalam sampel bahan biologis, yang memungkinkan untuk menentukan (mengenali) dan menghitungnya.
Analisis dilakukan sebagai berikut. Bahan genetik (sampel darah), yang berpotensi memasukkan gen yang diinginkan, dimasukkan ke dalam tabung. Ada juga primer ditempatkan - segmen disintesis secara kimia dari gen kecil yang diinginkan.
DNA atau RNA polimerase juga ditambahkan ke kapal, itu mampu meluruskan rantai asam nukleat yang benar-benar identik dengan aslinya. Komposisi yang dihasilkan disuntikkan dan satu set empat nukleotida bebas - bahan bangunan khusus untuk RNA atau DNA, yang salah satunya mengandung partikel fosfor radioaktif.
Campuran yang dihasilkan dipanaskan hingga 95-96 ° C, itulah sebabnya dua heliks DNA, yang biasanya terjalin, ditenun. Kemudian obat didinginkan, pada saat itu primer itu sendiri menempel pada daerah yang diinginkan dari genom virus, mencegah RNA (atau DNA) membentuk kembali heliks ganda.
Dalam proses pendinginan, polimerase mencari rantai nukleotida bebas. Untuk berfungsinya enzim ini diperlukan satu rantai nukleotida. Karena polimerase tergelincir di sepanjang rantai DNA (seperti cincin pada seutas tali), ia tidak dapat bekerja pada heliks ganda.
Setelah ini, siklus pemanasan ulang dilakukan, karena rantai nukleotida dipisahkan. Pada setiap siklus PCR ini, jumlah dalam sampel gen hepatitis yang diinginkan meningkat secara eksponensial, dan sisa bahan genetik diproduksi (tumbuh) secara linear.
Setelah pemurnian larutan dari residu nukleotida dan pemisahan dengan elektroforesis rantai DNA oleh parameter berat molekul, orang dapat dengan mudah menentukan apakah ada gen yang diinginkan dalam sampel yang diteliti atau tidak.
Manfaat PCR
Pengujian laboratorium menggunakan PCR memungkinkan bahkan lebih banyak informasi yang diperoleh daripada keberadaan virus RNA. Dengan menentukan parameter tingkat radiasi radioaktif, dimungkinkan untuk mengidentifikasi berapa banyak materi genetik yang semula terkandung dalam sampel yang diteliti. Dalam kasus hepatitis, tentukan indikator tingkat viral load.
Keuntungan lain dari metode ini adalah tingkat kepekaan reaksi CR yang sangat tinggi. Ini jauh lebih tinggi daripada metode klasik untuk mendeteksi virus. Idealnya, untuk mengidentifikasi gen yang diinginkan, untuk PCR, hanya satu virus dalam sampel yang cukup.
Selain itu, PCR sepenuhnya spesifik. Primernya dirancang sedemikian rupa sehingga mereka sepenuhnya sesuai dengan wilayah unik dari gen yang diinginkan yang tidak memiliki urutan lain. Seperti sidik jari yang unik, setiap gen memiliki urutan nukleotida yang unik.
Analisis kualitatif PCR
Analisis kualitatif mengungkapkan hanya keberadaan virus dalam darah. Tes ini harus dilakukan untuk semua pasien yang antibodi terhadap hepatitis C ditemukan dalam darah dan dapat menghasilkan hanya satu dari dua nilai: "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi." Pada orang yang sehat, norma (nilai referensi) harus “tidak terdeteksi”.
Ada interpretasi khusus dari hasil penelitian kualitatif tersebut:
- Hasilnya "terdeteksi." Ini berarti bahwa fragmen RNA yang spesifik untuk virus hepatitis C ditemukan dalam sampel yang dianalisis dari bahan biologis yang diambil, akibatnya ada fakta bahwa pasien terinfeksi virus hepatitis C. dan pada saat ini menginfeksi sel hati baru di dalam tubuh.
- Hasilnya "tidak terdeteksi." Putusan tersebut menunjukkan bahwa dalam sampel yang dianalisis dari bahan biologis yang diperoleh di laboratorium ini tidak ditemukan fragmen RNA yang spesifik untuk virus hepatitis C. Atau, konsentrasi RNA dari infeksi patogen dalam sampel ini di bawah batas sensitivitas tes.
Pada fase akut RNA virus hepatitis C, penelitian kualitatif dengan metode PCR dapat dideteksi setelah 1-2 minggu segera setelah infeksi tubuh, yaitu, jauh sebelum kemunculan antibodi terhadap hepatitis itu sendiri.
Hasil tes yang tidak dapat diandalkan dari penelitian ini dapat diperoleh dengan:
- biomaterial yang terkontaminasi;
- adanya heparin dalam darah pasien;
- kehadiran dalam sampel bahan kimia atau protein (inhibitor) yang mempengaruhi berbagai komponen PCR.
Untuk melakukan analisis kualitatif PCR, tidak ada persiapan khusus pasien untuk penelitian ini. Bahan yang digunakan adalah darah vena.
Evaluasi hasil
Tes PCR berkualitas tinggi memiliki tingkat sensitivitas tertentu, dan tergantung pada keakuratan penelitian dan tingkat peralatan di laboratorium dapat bervariasi dari 10 hingga 500 IU / ml.
Ini berarti bahwa jika virus dalam sampel darah hadir pada konsentrasi yang sangat rendah (kurang dari nilai ambang batas sensitivitas laboratorium ini), maka hasil untuk pasien yang sakit dapat "tidak terdeteksi". Karena itu, ketika melakukan analisis kualitatif PCR dengan tingkat viremia yang rendah (konsentrasi virus yang rendah), misalnya, untuk pasien yang menjalani terapi antivirus, sangat penting untuk mengetahui ambang sensitivitas sistem diagnostik ini.
Varian sistem diagnostik
Untuk mengendalikan tanggapan virologi, disarankan untuk menggunakan sistem diagnostik dengan ambang batas sensitivitas minimal 50 IU / ml ketika melakukan pengobatan antivirus. Kriteria ini dipenuhi, misalnya, dengan Cobas Ampicolor analisis HCV-Test (akurat hingga 50 IU / ml), serta RealBest HCV RNA (dengan sensitivitas 15 IU / ml).
Menurut rekomendasi WHO, untuk menetapkan diagnosis definitif hepatitis C, perlu didasarkan hanya pada deteksi tiga kali lipat dari RNA virus C dalam sampel serum pasien, dengan tidak adanya varietas lain penanda hepatitis.
Selain metode PCR, uji TMA (metode amplifikasi transkripsi) juga digunakan untuk mendeteksi RNA HCV pada pasien. Ini memiliki ambang sensitivitas terbaik (5-10 IU / ml), tetapi di negara kami metode pengujian seperti itu belum terlalu umum.
Kisaran modifikasi virus yang terdeteksi
Penentuan kualitatif semacam itu dalam serum akan kehadiran virus Hepatitis C RNA memungkinkan untuk menentukan beberapa genotipe virus ini. Saat ini, ilmu pengetahuan mengetahui lebih dari enam genotipe virus ini, serta sekitar 10 subtipe penyakit ini.
Di negara kita, virus umum 1, 2, 3 genotipe. Laboratorium dapat mendeteksi genotipe berikut: 1a dan 1b, 2a, 2b dan 2c, serta 3, 4, 5a dan 6, terlepas dari subtipe. Untuk semua modifikasi virus, spesifisitas deteksi adalah 100%.
Analisis Kuantitatif PCR
Dengan menggunakan tes PCR kuantitatif, tingkat konsentrasi virus hepatitis dalam sampel darah ditentukan (viral load). Tes untuk viremia (konsentrasi virus) ini memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah unit materi genetik tertentu (viral RNA itu sendiri), yang terdeteksi dalam jumlah tertentu. Dalam hal ini, tentukan konsentrasinya dalam 1 ml, yang sesuai dengan 1 cu. lihat
Parameter kuantitatif analisis dinyatakan dalam angka, untuk tujuan ini, unit internasional (IU) per mililiter (ml), disebut sebagai IU / ml, digunakan sebagai unit pengukuran. Sekarang, di beberapa laboratorium, jumlah virus dapat ditentukan di unit lain: jumlah salinan per ml diindikasikan sebagai salinan / ml.
- Tanggal Untuk hepatitis C, analisis kuantitatif PCR dilakukan segera sebelum memulai terapi. Kemudian pada minggu ke-1, ke-4, ke-12 dan ke-24. Evaluasi pada minggu ke-12 bersifat indikatif, memungkinkan untuk menentukan efektivitas terapi.
- Persiapan untuk analisis. Untuk melakukan analisis kuantitatif PCR, persiapan khusus pasien untuk studi tidak diperlukan. Setengah jam sebelum pengambilan sampel seharusnya tidak merokok. Darah vena digunakan sebagai bahan laboratorium.
Evaluasi hasil
Untuk sistem uji laboratorium yang berbeda, ada berbagai faktor konversi untuk indikator ini dalam IU / ml. Rata-rata, mereka mengambil parameter konversi, di mana 4 salinan / ml = 1 IU / ml. Misalnya, jika laboratorium memberikan hasil analisis PCR 2.4 * 10 6 salinan / ml, maka parameter ini harus dibagi menjadi 4 dan kita akan mendapatkan 6 * 10 5 IU / ml.
Beban 800.000 IU / ml dianggap tinggi, yang kira-kira setara dengan 3.000.000 kopi / ml. Viremia rendah, menurut beberapa penulis, sesuai dengan parameter PCR kuantitatif di bawah 400.000 IU / ml.
Sebagai hasil dari uji kuantitatif, hasil akhir dapat dikirim bukan dalam bentuk nilai digital, tetapi: "di bawah rentang pengukuran", atau "tidak terdeteksi".
- Penilaian: "di bawah rentang pengukuran." Ini menunjukkan bahwa tes kuantitatif gagal mendeteksi RNA virus hepatitis C, namun, virus itu sendiri ada dalam tubuh dalam konsentrasi yang sangat rendah. Ini dibuktikan dengan uji kualitas tambahan, yang mengkonfirmasi fakta keberadaan virus.
- Peringkat: tidak terdeteksi. Hasil ini menunjukkan bahwa uji kuantitatif tidak ditemukan pada sampel virus RNA.
Parameter viral load, pertama-tama, menentukan tingkat infeksi penyakit, tingkat "infeksi" pasien. Semakin tinggi konsentrasi virus pasien, semakin besar kemungkinan penularannya kepada orang lain. Misalnya, saat berhubungan seksual dengan orang yang sakit, atau secara vertikal. Indikator kuantitatif ini juga membantu menentukan efektivitas perawatan pasien.
Melakukan analisis kuantitatif CCP penting untuk terapi antivirus, menilai keberhasilannya dan merencanakan durasi kursus. Dengan demikian, dengan respons tubuh yang cepat terhadap pengobatan dan tingkat viremia yang rendah, durasi terapi dapat dikurangi.
Jika parameter PCR kuantitatif dikurangi secara perlahan, terapi antivirus harus diperluas atau dimodifikasi. Jika tingkat viral load rendah, maka ini adalah faktor yang menguntungkan dalam terapi, jika meningkat, maka metode yang digunakan tidak efektif dan obat atau metode penggunaannya harus diubah.
Analisis kualitatif dan kuantitatif PCR untuk hepatitis C: negatif, positif, transkrip
Hepatitis C adalah penyakit hati karena virus yang disebabkan oleh flavivirus HCV (dari virus hepatitis C Inggris), struktur yang mengandung molekul asam ribonukleat (RNA). RNA membawa kode genetik virus. Kehadirannya memungkinkan untuk analisis PCR untuk hepatitis C.
Bahaya HCV bagi seseorang terletak pada kenyataan bahwa apa yang disebut jendela serologis (waktu antara infeksi dan munculnya reaksi dari sistem kekebalan) bisa sangat lama - dari beberapa minggu hingga enam bulan.
Itu tidak mendeteksi infeksi dan memulai perawatan tepat waktu.
Bergantung pada karakteristik individu organisme, pembawa HCV dapat memanifestasikan dirinya dalam bentuk akut, serta terjadi sebagai penyakit kronis yang akan membutuhkan perawatan yang lama dan mahal. Dalam deteksi antibodi terhadap HCV, serangkaian tes laboratorium dilakukan, termasuk PCR untuk hepatitis C. Tes ini dilakukan untuk semua orang yang antibodi darahnya terhadap HCV ditemukan.
Apa itu analisis PCR?
Analisis laboratorium PCR untuk hepatitis C - studi bahan biologis untuk mengidentifikasi keberadaan flavavirus.
Reaksi rantai polimerase (singkatannya) menunjukkan nilai kuantitatif kerusakan virus tubuh, karakteristik kualitatifnya, serta genotipe virus yang mengandung RNA.
Atas dasar mereka, serta berdasarkan analisis tambahan, metode dan lamanya terapi, serta faktor epidemiologis (tingkat risiko penularan ke pembawa lain) ditentukan.
Apa itu Analisis RNA Hepatitis C?
PCR hepatitis C juga disebut analisis RNA (HCV RNA), karena Flavavirus mengandung partikel RNA dengan ukuran virion 30-60 nm. Salah satu fitur dari mikroorganisme ini adalah kecenderungan mutasi yang tinggi.
Masing-masing subspesies (genotipe) dari virus memiliki resistensi yang berbeda, yang menyebabkan berbagai metode perawatan dan sifat prognosis lebih lanjut untuk pasien.
Bahan biologis (darah vena) diberikan pada perut kosong dan, sebagai aturan, diuji dengan metode PCR Real-Time (diagnostik real-time yang sangat sensitif dengan batas deteksi lebih rendah 15 IU / ml menggunakan sistem otomatis tertutup).
Ada tes lain, misalnya COBAS AMPLICOR dengan sensitivitas 50-100 IU / ml. Untuk setiap tes laboratorium, ambang sensitivitas adalah penting, yaitu kemampuan reagen untuk mendeteksi konsentrasi minimum virus dalam bahan biologis.
Jenis analisis untuk hepatitis C oleh PCR
PCR Hepatitis C mencakup tiga komponen penting:
- analisis kualitatif;
- analisis kuantitatif;
- genotyping.
Tes ini dapat menentukan sifat viremia, serta fitur genetik patogen. Bergantung pada sensitivitas sistem diagnostik, penelitian dilakukan sekali, dan kadang-kadang tes kedua dilakukan dengan pereaksi yang lebih sensitif untuk mengkonfirmasi atau memperbaiki hasilnya.
PCR hepatitis C berkualitas tinggi
Analisis PCR hepatitis C kualitatif adalah nama umum lainnya untuk analisis reaksi berantai polimerase. Sensitivitas standar dari tes ini, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan lesi virus, berada dalam kisaran 10-500 IU / ml.
Analisis PCR negatif untuk hepatitis C menunjukkan bahwa konsentrasi virus dalam darah pasien di bawah ambang kerentanan sistem diagnostik.
Jika PCR berkualitas tinggi memberikan jawaban "tidak terdeteksi", maka untuk perawatan selanjutnya adalah penting untuk mengetahui ambang sensitivitas reagen.
Fraksi protein menjadi flavavirus muncul jauh lebih lambat.
PCR Kuantitatif Hepatitis C
Hepatitis C PCR kuantitatif adalah indikator viral load, yang mencerminkan tingkat konsentrasi RNA flavavirus dalam tubuh. Ini adalah indikator yang menunjukkan berapa banyak fragmen RNA virus yang terkandung per sentimeter kubik darah. Hasil PCR hepatitis C RNA dalam tes kuantitatif dalam sistem konvensional ditunjukkan dalam satuan internasional per mililiter (IU / ml) dan dapat direkam dengan cara yang berbeda, misalnya, 1,7 juta atau 1.700.000 IU / ml.
Diagnosis PCR kuantitatif hepatitis C diresepkan untuk pasien sebelum memulai terapi antivirus, dan pada minggu ke 12 pengobatan, untuk mengevaluasi hasil metode yang dipilih untuk menangani HCV. Viral load memungkinkan untuk menentukan tiga indikator penting penyakit:
- infektivitas, yaitu tingkat risiko penularan virus dari satu pembawa ke yang lain (semakin tinggi konsentrasi flavavirus RNA, semakin tinggi kemungkinan menginfeksi orang lain, misalnya, melalui kontak seksual);
- metode dan efektivitas pengobatan;
- durasi dan prognosis terapi antivirus (semakin tinggi viral load, semakin lama pengobatan berlangsung).
Diagnosis PCR kuantitatif hepatitis C tergantung pada jenis tes laboratorium dan ambang sensitivitasnya. Batas bawah norma dianggap sebagai indikator hingga 600.000 IU / ml, nilai rata-rata berada di kisaran 600.000-700.000 IU / ml. Hasil 800.000 IU / ml dan di atas dianggap tingkat tinggi yang mengandung virus RNA.
Genotipe
Karena aktivitas mutasi HCV yang tinggi di alam, saat pengujian, penting untuk mengidentifikasi genotipe virus mana yang ada dalam darah pasien. Secara total, 11 genotipe virus hepatitis C telah dicatat di planet ini, yang mencakup banyak subspesies (subtipe). Di wilayah Federasi Rusia didistribusikan 1,2 dan 3.
RNA PCR hepatitis C bersama dengan genotipe adalah komponen yang sangat penting dari analisis memungkinkan dokter untuk menentukan resistansi (resistansi) virus, memilih obat yang sesuai dan meresepkan pengobatan.
Genotipe juga memungkinkan penentuan tidak langsung kondisi hati. Sebagai contoh, 3 genotipe HCV sering disertai dengan steatosis, di mana lemak menumpuk di sel-sel organ.
Tes darah untuk PCR untuk hepatitis C harus menghasilkan angka yang menentukan genotipe. Tanggapan laboratorium dapat mengatakan "tidak diketik" - dan ini berarti bahwa virus ada dalam darah manusia yang tidak terdeteksi oleh sistem pengujian. Ini mungkin menunjukkan bahwa genotipe tidak tipikal untuk wilayah geografis tertentu. Dalam hal ini, Anda harus mengulang analisis dengan sensitivitas yang lebih tinggi dari sistem diagnostik.
Decoding analisis PCR untuk hepatitis C
Tes untuk dekripsi kuantitatif hepatitis C PCR dapat didasarkan pada data di atas. Saat memperoleh hasil tes laboratorium, data berikut biasanya ditulis:
- “Ditemukan” / “tidak ditemukan” (PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C);
- jumlah fraksi yang mengandung RNA, misalnya 831.680 ME / ml (analisis PCR kuantitatif);
- angka yang menentukan genotipe HCV, misalnya - 1, 2, 3, 4;
- Nama ujian paling sering adalah Real-time.
Hal yang paling penting dalam menguraikan analisis PCR untuk hepatitis C adalah item kedua, yang menunjukkan viral load, yang menentukan prognosis, metode, dan lama pengobatan.
Jika tes PCR untuk hepatitis C negatif, dan ELISA positif - apa artinya ini?
Untuk menguraikan tes laboratorium, penting untuk menghubungi hepatologis atau spesialis penyakit menular yang akan menjelaskan informasi yang diperoleh sesuai dengan jenis sistem diagnostik dan ambang sensitivitasnya. Dalam praktik medis, ada banyak data tes darah yang dapat menyesatkan seseorang tanpa pendidikan medis.
Misalnya, jika tes untuk PCR hepatitis C negatif dan ELISA positif, itu mungkin berarti bahwa tidak ada HCV dalam darah pasien saat ini, tetapi ia sebelumnya telah menderita bentuk akut hepatitis C. Diperkirakan bahwa uji imunosorben terkait-enzim (ELISA) yang menunjukkan enzim positif menunjukkan bahwa ada antibodi dalam darah yang telah diproduksi setelah invasi virus di masa lalu. Tetapi dalam praktik medis modern, analisis ELISA dianggap kurang dapat diandalkan dan sering memberikan hasil yang tidak biasa, sehingga dokter menggunakannya sebagai skrining primer. Saat mendiagnosis suatu penyakit, spesialis dipandu secara tepat dengan tes PCR.
Video yang bermanfaat
Video berikut ini menceritakan dengan sangat rinci dan menarik apa inti dari metode PCR, bagaimana analisis dilakukan:
Kesimpulan
Untuk analisis PCR hepatitis C, darah vena biasanya diambil. Paling sering ada asupan ganda bahan biologis - untuk ELISA, dan langsung untuk tes PCR. Untuk hasil tes yang benar, diperlukan kepatuhan terhadap aturan dasar untuk pengumpulan bahan biologis di laboratorium:
- darah untuk analisis diberikan pada paruh pertama hari dengan perut kosong;
- antara waktu makan dan pengumpulan darah harus memakan waktu setidaknya 8 jam;
- Alkohol dan makanan yang digoreng juga harus dikeluarkan sebelum mengikuti tes.
- pada hari sebelum donor darah perlu untuk menghindari aktivitas fisik yang tinggi.
Hasil tes darah biasanya siap pada hari berikutnya.