PCR hepatitis B

Ketersediaan obat anti-hepatitis B (HBV) modern dengan indikasi yang jelas untuk pemberiannya membutuhkan verifikasi diagnosis yang akurat dan cepat. Namun, karena data klinis yang langka pada minggu-minggu pertama penyakit dan metode analisis immunoassay terbatas, tingkat diagnosis menurun.

Kehadiran penanda anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe memungkinkan Anda untuk mengkonfirmasi HBV atau menetapkan fakta penyakit sebelumnya. Tetapi dimungkinkan untuk menentukan keberadaan partikel virus aktif dalam darah dan menghitung jumlahnya pada saat penelitian oleh PCR - tes kuantitatif waktu nyata untuk mendeteksi hepatitis B. Metode ini, dibandingkan dengan metode diagnostik ELISA, memecahkan masalah diagnostik dan memungkinkan untuk memprediksi perjalanan penyakit saat menerima obat antivirus.

Dasar-dasar Diagnosis Penyakit

Diagnosis hepatitis B didasarkan pada penilaian manifestasi klinis, enzim immunoassay dan metode penelitian instrumental. Penyakit ini berlanjut pada fase akut setelah masa inkubasi dan, tergantung pada dosis infeksi dan efektivitas pengobatan, memasuki tahap kronis. Tujuan utama pengobatan adalah untuk mencegah kronisasi, yaitu menghilangkan semua partikel virus dari darah. Perjalanan klinis penyakit ini adalah penyembuhan tanpa viremia selanjutnya.

Fakta menghilangkan infeksi harus dibuktikan dengan metode penelitian kuantitatif.

Karena setiap enzim kualitatif immunoassay memungkinkan untuk mendiagnosis HBV secara tidak langsung, yaitu, ia tidak menunjukkan keberadaan patogen di lingkungan internal tubuh, tetapi mencirikan respon imun terhadap infeksi, memantau efektivitas terapi dan fakta penyembuhan menjadi sulit untuk dibuktikan. Oleh karena itu, pasien dengan hepatitis B atau dengan adanya kriteria diagnostik yang mendukungnya harus dilakukan reaksi rantai polimerase untuk menghitung jumlah partikel virus dalam darah. Tingkat diagnostik adalah kurangnya salinan DNA dari infeksi.

Deskripsi metode diagnostik

Metode diagnosis PCR hepatitis B yang sangat sensitif termasuk dalam kategori studi biologi molekuler yang direkayasa secara genetika. Melalui itu ditentukan oleh jumlah DNA virus dalam bahan biologis pasien dan laju yang diizinkan. Menurut hasil yang diperoleh, jumlah partikel virus per unit volume ditetapkan. Bahan untuk tes diagnostik adalah darah vena pasien. Asupan diinginkan pada perut kosong karena kemungkinan efek serum chyle pada hasil penelitian.

Hasil yang diperoleh harus diberikan kepada dokter untuk interpretasi dan penentuan taktik lebih lanjut. Penguraian mandiri tidak mewakili nilai diagnostik.

Signifikansi hasil dari jumlah partikel virus yang diperoleh dengan metode PCR melebihi nilai immunoassay enzim. Karena analisis dalam mode real-time menunjukkan adanya agen penyebab penyakit dalam darah, kandungan informasinya lebih tinggi daripada yang lain. Jika ELISA hanya menunjukkan adanya antibodi, yang diamati dari 4 minggu masa inkubasi dan berlangsung lebih dari 8 minggu setelah eliminasi virus dari darah, maka reaksi berantai polimerase dengan jelas mengkonfirmasi perjalanan aktif penyakit atau penyembuhannya, menjadi ciri dinamika terapi yang ditentukan.

Reaksi rantai polimerase dengan penentuan kuantitatif partikel patogen memecahkan pertanyaan diagnostik yang mendukung penghentian pengobatan karena pemulihan atau terapi berkelanjutan karena kurangnya efektifitasnya. Metode ini sespesifik mungkin untuk virus HBV dan dibedakan dengan kesalahan yang dapat diterima.

Indikasi dan tujuan kinerja

Analisis kuantitatif hepatitis B adalah yang paling dapat diandalkan dan memungkinkan Anda untuk mengkonfirmasi data yang diperoleh dengan metode ELISA. Ia ditunjuk ketika:

1. memperoleh hasil diagnostik positif ELISA;
2. merawat pasien dengan diagnosis kerusakan hati akibat virus;
3. dalam diagnosis etiologi campuran hepatitis;
4. jika perlu, tentukan viral load pada pasien.

Karena metode immunoassay enzim digunakan lebih luas dalam praktek spesialis penyakit menular, beberapa pasien dengan penyakit ringan dapat diobati tanpa harus menghitung viral load. Tetapi PCR secara umum dianggap sebagai "standar emas" diagnostik dalam Hepatologi, karena, karena keunikan hasilnya, ia menghilangkan sejumlah masalah organisasi. Oleh karena itu, arah pasien untuk analisis kuantitatif memiliki tujuan sebagai berikut:

• mendapatkan data tentang jumlah partikel virus dalam darah pasien;
• konfirmasi perjalanan hepatitis akut dan verifikasi tepat waktu penyakit kronis;
• deteksi konstan pembawa virus laten dengan tes ELISA positif, pemantauan viremia mereka;
• memutuskan penunjukan pengobatan antivirus, kombinasi dan penghentiannya.

Tujuan paling signifikan dari menerapkan tes PCR kuantitatif untuk mendeteksi HBV adalah untuk mengidentifikasi kemungkinan kombinasi pengobatan. Dalam kasus viral load yang tinggi, hasil analisis memberi kesempatan pada spesialis untuk melanjutkan dengan kombinasi obat. Selama terapi, mudah untuk menentukan efektivitas pengobatan farmakologis yang ditentukan berdasarkan hasil PCR. Dipandu hanya oleh data metode immunoassay, tidak mungkin untuk menentukan secara tepat waktu fakta perawatan dan efektivitasnya saat ini. Oleh karena itu, tes real-time kuantitatif adalah analisis yang diperlukan sebelum memulai pengobatan untuk hepatitis akut, infeksi virus laten dengan viremia tinggi dan HBV kronis.

Interpretasi hasil tes PCR kuantitatif

Interpretasi hasil tes PCR kuantitatif harus dilakukan oleh dokter yang merawat pasien. Penting untuk mengevaluasi indikator diagnostik dan menentukan taktik terapeutik.

Penganalisa standar mampu menghasilkan indikator kuantitatif yang mencerminkan jumlah salinan DNA virus yang ada dalam darah vena yang diteliti. Satuan ukuran - salinan / ml, IU / ml (salinan per mililiter, unit internasional per mililiter). Interpretasi hasil diberikan dalam tabel dengan indikasi unit pengukuran yang berbeda.

Studi tentang virus hepatitis B (ELISA dan PCR)

Antigen virus hepatitis B (HBsAg)

Antigen permukaan hepatitis B dalam serum biasanya tidak ada.
Deteksi antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) dalam serum mengkonfirmasi infeksi akut atau kronis dengan virus hepatitis B.

Pada penyakit akut, HBsAg terdeteksi dalam serum dalam 1-2 minggu terakhir dari masa inkubasi dan 2-3 minggu pertama dari periode klinis. Sirkulasi HBsAg dalam darah mungkin terbatas beberapa hari, jadi Anda harus berusaha untuk pemeriksaan awal awal pasien. Metode ELISA memungkinkan untuk mendeteksi HBsAg pada lebih dari 90% pasien. Hampir pada 5% pasien, metode penelitian yang paling sensitif tidak mendeteksi HBsAg, dalam kasus seperti itu etiologi virus hepatitis B dikonfirmasi oleh kehadiran anti-HBcAg JgM atau PCR.

Konsentrasi serum HBsAg dalam semua bentuk keparahan hepatitis B pada puncak penyakit memiliki kisaran fluktuasi yang signifikan, namun, ada pola tertentu: pada periode akut ada hubungan terbalik antara konsentrasi serum HBsAg dan keparahan penyakit.

Konsentrasi tinggi HBsAg lebih sering terjadi pada penyakit ringan dan sedang. Dalam bentuk yang parah dan ganas, konsentrasi HBsAg dalam darah seringkali rendah, dan pada 20% pasien dengan bentuk parah dan pada 30% dengan antigen ganas dalam darah mungkin tidak terdeteksi sama sekali. Penampilan pada latar belakang ini pada pasien dengan antibodi terhadap HBsAg dianggap sebagai tanda diagnostik yang tidak menguntungkan; itu ditentukan dalam bentuk ganas B. hepatitis

Dalam perjalanan akut hepatitis B, konsentrasi HBsAg dalam darah berangsur-angsur menurun sampai penghilangan total antigen ini. HBsAg menghilang pada sebagian besar pasien dalam waktu 3 bulan sejak timbulnya infeksi akut.

Penurunan konsentrasi HBsAg lebih dari 50% pada akhir minggu ke-3 dari periode akut, sebagai suatu peraturan, menunjukkan penyelesaian proses infeksi yang hampir selesai. Biasanya pada pasien dengan konsentrasi HBsAg yang tinggi pada puncak penyakit, terdeteksi dalam darah selama beberapa bulan.
Pada pasien dengan konsentrasi HBsAg rendah menghilang jauh lebih awal (kadang-kadang beberapa hari setelah timbulnya penyakit). Secara umum, waktu deteksi HBsAg berkisar dari beberapa hari hingga 4-5 bulan. Jangka waktu maksimum deteksi HBsAg dengan perjalanan hepatitis B akut yang mulus tidak melebihi 6 bulan dari awal penyakit.

HBsAg dapat ditemukan pada orang sehat, sebagai aturan, dalam studi profilaksis atau tidak disengaja. Dalam kasus tersebut, penanda lain dari virus hepatitis B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg, diperiksa dan fungsi hati dipelajari.

Dalam hal hasil negatif, studi berulang pada HBsAg diperlukan.
Jika tes darah berulang selama lebih dari 3 bulan mengungkapkan HBsAg, pasien ini diklasifikasikan sebagai pasien kronis dengan virus hepatitis B.
Kehadiran HBsAg cukup umum. Ada lebih dari 300 juta operator di dunia, dan di negara kita ada sekitar 10 juta operator.
Pengakhiran sirkulasi HBsAg dengan serokonversi berikutnya (pembentukan anti-HBs) selalu menunjukkan pemulihan - sanitasi tubuh.

Tes darah untuk keberadaan HBsAg digunakan untuk tujuan berikut:

untuk diagnosis hepatitis B akut:

• masa inkubasi;
• penyakit akut;
• pemulihan awal;
  

untuk diagnosis virus hepatitis B kronis;

untuk penyakit:

• hepatitis kronis persisten;
• sirosis hati;

untuk menyaring dan mengidentifikasi pasien dalam kelompok risiko:

pasien dengan hemotransfusi yang sering;

pasien dengan gagal ginjal kronis;

pasien dengan banyak hemodialisis;

pasien dengan status defisiensi imun, termasuk AIDS.

Evaluasi hasil penelitian

Hasil penelitian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya serum HBsAg. Hasil positif - identifikasi HBsAg menunjukkan inkubasi atau periode akut dari virus hepatitis B akut, serta pada virus hepatitis B kronis.

Antibodi terhadap antigen nuklir virus hepatitis B JgG (anti-HBcAg JgG)

Biasanya, serum anti-HBcAg tidak ada dalam serum.
Pada pasien dengan anti-HBcAg, JgG muncul dalam periode akut virus hepatitis B dan bertahan sepanjang hidup. Anti-HBcAg JgG adalah penanda utama HBV yang ditransfer.

Tes darah untuk anti-HBcAg JgG digunakan untuk mendiagnosis:

virus hepatitis B kronis dengan adanya antigen HBs dalam serum;

virus hepatitis B.

Evaluasi hasil penelitian

Hasil penelitian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya serum anti-HBcAg JgG. Hasil positif - identifikasi anti-HBcAg JgG menunjukkan infeksi akut, pemulihan, atau hepatitis B virus yang sebelumnya ditransfer.

Antigen virus "B" hepatitis B (HBeAg)

Biasanya, HBeAg dalam serum tidak ada.
HBeAg dapat ditemukan dalam serum sebagian besar pasien dengan hepatitis B virus akut. Biasanya menghilang dalam darah sebelum antigen HBs. Tingkat HBeAg yang tinggi pada minggu-minggu pertama penyakit atau pendeteksiannya selama lebih dari 8 minggu memberikan alasan untuk mencurigai adanya infeksi kronis.

Antigen ini sering terdeteksi pada hepatitis aktif dari etiologi virus. Yang sangat menarik dalam definisi HBeAg adalah fakta bahwa pendeteksiannya mencirikan fase replikasi aktif dari proses infeksi. Telah ditetapkan bahwa konsentrasi HBeAg yang tinggi sesuai dengan aktivitas polimerase DNA yang tinggi dan mengkarakterisasi replikasi aktif virus.

Kehadiran HBeAg dalam darah menunjukkan infektivitasnya yang tinggi, yaitu adanya infeksi hepatitis B aktif dalam tubuh yang sedang diperiksa, dan terdeteksi hanya dengan adanya antigen HBs dalam darah. Pada pasien dengan hepatitis aktif kronis, obat antivirus hanya digunakan ketika HBeAg terdeteksi dalam darah. HBeAg - antigen - penanda fase akut dan replikasi virus hepatitis B.

Tes darah untuk keberadaan antigen HBe digunakan untuk mendiagnosis:

masa inkubasi virus hepatitis B;

masa prodromal virus hepatitis B;

periode akut dari virus hepatitis B;

hepatitis B. kronis yang persisten

Evaluasi hasil penelitian

Hasil penelitian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya serum HBeAg. Hasil positif - deteksi HBeAg menunjukkan inkubasi atau periode akut dari virus hepatitis B akut atau replikasi virus yang berlanjut dan infeksi yang dialami pasien.

Antibodi terhadap antigen "e" dari virus hepatitis B (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg dalam serum biasanya tidak ada. Munculnya antibodi anti-HBeAg biasanya menunjukkan penghapusan intensif dari tubuh virus hepatitis B dan infeksi ringan pada pasien.

Antibodi ini muncul pada periode akut dan bertahan hingga 5 tahun setelah infeksi. Pada hepatitis persisten kronis, anti-HBeAg ditemukan dalam darah pasien bersama dengan HBsAg. Seroconversion, yaitu transisi HBeAg ke anti-HBeAg, dengan hepatitis aktif kronis, lebih sering menguntungkan secara prognostik, tetapi serokonversi yang sama tidak meningkatkan prognosis transformasi hati sirosis yang parah.

Tes darah untuk keberadaan anti-HBeAg digunakan dalam kasus berikut dalam diagnosis virus hepatitis B:

membangun tahap awal penyakit;

infeksi akut;

pemulihan awal;

pemulihan;

pemulihan tahap akhir.

diagnosis hepatitis B virus yang baru ditransfer;

diagnosis hepatitis B kronis kronis yang persisten

Evaluasi hasil penelitian

Hasil penelitian dinyatakan secara kualitatif - positif atau negatif. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya antibodi terhadap HBeAg dalam serum. Hasil positif adalah deteksi antibodi terhadap HBeAg, yang dapat menunjukkan tahap awal hepatitis B virus akut, periode infeksi akut, tahap awal pemulihan, pemulihan, baru-baru ini menularkan virus hepatitis B atau hepatitis virus persisten.

Kriteria untuk kehadiran hepatitis B kronis adalah:

mendeteksi atau secara berkala mendeteksi DNA HBV dalam darah;

peningkatan aktivitas ALT / AST dalam darah yang terus-menerus atau berkala;

tanda-tanda morfologis hepatitis kronis dalam pemeriksaan histologis biopsi hati.

Deteksi virus hepatitis B oleh PCR (secara kualitatif)

Virus hepatitis B dalam darah biasanya tidak ada.
Penentuan kualitatif virus hepatitis B dengan metode PCR dalam darah memungkinkan untuk mengkonfirmasi keberadaan virus dalam tubuh pasien dan dengan demikian menetapkan etiologi penyakit.

Penelitian ini memberikan informasi yang berguna untuk diagnosis virus hepatitis B akut dalam tahap inkubasi dan perkembangan awal penyakit, ketika penanda serologis utama pasien dalam darah mungkin tidak ada. DNA viral serum terdeteksi pada 50% pasien tanpa HBeAg. Sensitivitas analitik metode PCR tidak kurang dari 80 partikel virus dalam 5 μl, sampel deteksi DNA terakhir, spesifisitas - 98%.

Metode ini penting untuk mendiagnosis dan memantau perjalanan HBV kronis. Sekitar 5-10% kasus sirosis dan penyakit hati kronis lainnya disebabkan oleh pembawa kronis virus hepatitis B. Penanda aktivitas penyakit tersebut adalah adanya HBeAg dan DNA virus hepatitis B dalam darah.

Metode PCR memungkinkan untuk menentukan dalam darah DNA dari virus hepatitis B baik secara kualitatif maupun kuantitatif. Fragmen yang ditentukan dalam kedua kasus adalah urutan DNA unik dari gen protein struktural virus hepatitis B.

Deteksi DNA virus hepatitis B dalam biomaterial menggunakan PCR diperlukan untuk:

resolusi hasil tes serologis yang dipertanyakan;

deteksi tahap akut penyakit dibandingkan dengan infeksi atau kontak sebelumnya;

mengontrol efektivitas pengobatan antivirus.

Hilangnya DNA hepatitis B dari darah adalah tanda efektivitas terapi

Deteksi virus hepatitis B oleh PCR (kuantitatif)

Metode ini memberikan informasi penting tentang intensitas perkembangan penyakit, efektivitas pengobatan dan pengembangan resistensi terhadap obat aktif.
Untuk diagnosis hepatitis virus oleh PCR dalam serum, sistem tes digunakan, sensitivitasnya adalah 50-100 salinan dalam sampel, yang memungkinkan untuk mendeteksi virus pada konsentrasi 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 salinan / ml. PCR dalam virus hepatitis B jelas diperlukan untuk menilai replikasi virus.

DNA viral serum terdeteksi pada 50% pasien tanpa HBeAg. Serum darah, limfosit, dan hepatobiopsi dapat berfungsi sebagai bahan untuk mendeteksi DNA virus hepatitis B.

• Penilaian tingkat viremia adalah sebagai berikut:
• kurang dari 2,10 ^ 5 salinan / ml (kurang dari 2,10 ^ 5 IU / ml) - viremia rendah;
• dari 2,10 ^ 5 salinan / ml (2,10 ^ 5 IU / ml) menjadi 2,10 ^ 6 salinan / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - viremia sedang;
• lebih dari 2,10 ^ 6 salinan / ml - viremia tinggi.

Ada hubungan antara hasil hepatitis B virus akut dan konsentrasi DNA HBV dalam darah pasien. Dengan tingkat viremia yang rendah, proses kronisasi infeksi mendekati nol, dengan rata-rata, proses ini dikronifikasi pada 25-30% pasien, dan dengan tingkat viremia yang tinggi, virus hepatitis B akut paling sering menjadi kronis.

Indikasi untuk pengobatan interferon-alfa HBV kronis harus dipertimbangkan adanya penanda replikasi virus aktif (deteksi HBV HBV, HBeAg, dan DNA HBV dalam serum darah selama 6 bulan sebelumnya).

Kriteria untuk mengevaluasi efektivitas pengobatan adalah hilangnya HBEAg dan DNA HBV dalam darah, yang biasanya disertai dengan normalisasi kadar transaminase dan remisi jangka panjang dari penyakit, DNA HBV menghilang dari darah pada bulan ke-5 pengobatan pada 80% pasien. Mengurangi tingkat viremia hingga 85% atau lebih pada hari ketiga dari awal pengobatan dibandingkan dengan awal adalah kriteria yang cepat dan cukup akurat untuk memprediksi efektivitas terapi.

Analisis PCR untuk Hepatitis B

Virus DNA dari keluarga Hepadnaviridae adalah agen penyebab langsung hepatitis B. Analisis PCR terhadap hepatitis B memungkinkan keberadaan virus DNA yang terinfeksi terdeteksi dalam darah pasien. Hasil dari jenis positif pada DNA HBV menunjukkan adanya infeksi dalam darah pasien. Perlu dicatat bahwa diagnosis melalui penggunaan analisis PCR memungkinkan tidak hanya untuk menentukan adanya infeksi, tetapi juga beban kuantitatif dan aktivitasnya. Metode ini dapat diandalkan, akurat dan dapat diproduksi ulang. Mengkuantifikasi DNA HBV dengan qPCR dapat digunakan untuk memantau efektivitas terapi HBV dan berguna untuk memahami riwayat alami HBV di daerah endemis.

Proses infeksi hepatitis B terjadi melalui kontak domestik atau seksual - melalui kontak langsung dengan darah yang terinfeksi. Setelah infeksi, virus memasuki sel-sel hati, di mana ia melanjutkan reproduksi aktifnya. Melalui aliran darah, sel-sel patogen menyebar ke seluruh tubuh. Perlu dicatat bahwa sel-sel hepatitis B sangat tahan terhadap asam dan suhu tinggi. Dia mampu mempertahankan propertinya yang rusak selama enam bulan.

Jenis PCR untuk Hepatitis B

Sampai saat ini, ada dua jenis diagnostik yang diresepkan jika Anda mencurigai adanya virus hepatitis B: PCR kualitatif (memungkinkan Anda menentukan dengan akurasi 100% keberadaan virus dalam darah) dan PCR kuantitatif (memungkinkan Anda menentukan tingkat aktivitas virus).

PCR berkualitas tinggi diresepkan jika ada kecurigaan infeksi HBV, atau jika metode diagnostik lainnya belum menghasilkan hasil yang jelas. Jenis analisis PCR ini sangat mudah diuraikan: negatif (tidak ada virus yang terdeteksi dalam darah), positif (virus terdeteksi dalam darah). Tugas utama dari analisis kualitatif adalah untuk menentukan keberadaan sel yang terinfeksi pada tahap awal penyakit. Jika virus didiagnosis dua minggu setelah infeksi diduga, efektivitas pengobatan akan jauh lebih tinggi. Jika virus dalam darah sekitar dua bulan, penyakit menjadi kronis, oleh karena itu, tidak dapat disembuhkan sepenuhnya.

Jika diagnosis kualitatif mengkonfirmasi keberadaan HBV dalam darah, dokter meresepkan analisis kuantitatif.

Analisis kuantitatif memungkinkan untuk menentukan aktivitas perkembangan virus dalam tubuh pasien. Jenis analisis PCR ini ditugaskan untuk:

• untuk menentukan stadium penyakit;
• untuk memantau efektivitas terapi yang diterapkan;
• untuk menentukan tingkat resistensi virus terhadap obat tertentu;
• untuk pemilihan obat.

Indikator kuantitatif virus dalam darah diukur dalam IU per mililiter atau DNA per mililiter.

Jika dokter segera meresepkan diagnosis kuantitatif, tanpa memeriksa kualitasnya, maka nilainya adalah 75 IU per mililiter. Jika lebih sedikit unit internasional yang terdeteksi, hasilnya adalah HBV tidak terdeteksi ketika angka-angka di atas normal, keberadaan virus hepatitis B didiagnosis.

Interpretasi diagnosis kuantitatif

Indikator berikut (dalam salinan / mililiter) dianggap sebagai norma CRP pada hepatitis B: kurang dari 10 3 - virus tidak aktif; dari 10 4 hingga 10 5 - virus biasanya tidak aktif; 10 6 - virus aktif; 10 7 - virus dalam aktivitas tingkat tinggi.

Berdasarkan indikator kuantitatif seseorang dapat menentukan dengan akurasi 100% bentuk penyakit (pembawa, akut atau kronis), reaksi virus terhadap pengobatan, kebutuhan akan diagnostik tambahan.

Bentuk kronis dari hepatitis B ditetapkan jika aktivitas virus adalah 10 5 salinan per mililiter. Operator didiagnosis jika nilainya di bawah 10 5 salinan per mililiter.

Selama masa pengobatan, perlu untuk secara rutin (sekali setiap tiga bulan) mengulangi diagnostik kuantitatif untuk mempertimbangkan pada waktunya periode ketika virus mengembangkan kekebalan terhadap obat yang digunakan dan mengubah metode. Jika semua penelitian telah dilakukan dengan benar dan pengobatan yang efektif telah dipilih, analisis berulang (setelah tiga hari pengobatan) akan menunjukkan penurunan aktivitas sel-sel patogen setidaknya delapan puluh lima persen.

Biopsi hati dilakukan hanya dalam kasus ketika enam bulan pengobatan telah menunjukkan bahwa kadar ALT dua kali lebih tinggi dari normal, dan diagnosa PCR menunjukkan tingkat lebih rendah dari 10 5 salinan per mililiter darah.

Mempersiapkan survei

Darah vena diperlukan untuk analisis. Untuk mendapatkan hasil yang paling akurat, perlu dipersiapkan untuk prosedur: menolak untuk makan setidaknya delapan jam sebelum pengumpulan darah; selama dua hari untuk menolak perawatan obat (sangat penting untuk memperingatkan dokter tentang mengambil obat); Anda harus menghabiskan dua puluh menit dalam mode istirahat sebelum menyumbangkan darah; Dua belas jam sebelum prosedur, hentikan latihan olahraga, minuman beralkohol, merokok, dan makan makanan berlemak.

Penting: jika diagnosis diperlukan untuk anak di bawah usia lima bulan, maka ia perlu memberikan segelas air matang setiap sepuluh menit enam puluh menit sebelum prosedur pengumpulan darah.

Kesimpulannya

Analisis PCR untuk hepatitis B saat ini adalah metode yang paling akurat untuk mendiagnosis virus. Metode ini memungkinkan untuk menentukan bentuk penyakit yang bermutasi dan tersembunyi, untuk mendiagnosis penyakit pada hari pertama infeksi, oleh karena itu, untuk memilih perawatan yang paling efektif. Asisten laboratorium membandingkan hasil analisis dengan norma, dan kemudian membawa mereka pada kesimpulan. Data diproses dalam waktu dua minggu. Untuk mendapatkan rujukan untuk analisis PCR, perlu untuk menghubungi ahli hepatologi, spesialis penyakit menular atau ahli virologi. Penting untuk diingat bahwa semakin cepat Anda pergi ke dokter, semakin cepat hasilnya akan diperoleh, oleh karena itu, semakin efektif pengobatannya.

Penjelasan PCR dan analisis biokimia hepatitis

Hepatitis adalah proses peradangan di hati yang dihasilkan dari perusakan sel-selnya oleh zat beracun. Menguraikan analisis untuk hepatitis memungkinkan untuk menilai secara objektif kondisi kesehatan pasien yang menderita penyakit hati. Dokter penyakit menular akan memberi tahu Anda cara memahami hasil penelitian, dan meresepkan perawatan lebih lanjut. Pasien, setelah secara independen mempelajari data yang diperoleh, menarik kesimpulan tertentu, yang tidak selalu sesuai dengan kenyataan.

Virus hepatitis B terkandung dalam serum dan metode diagnostik laboratorium khusus memungkinkan deteksi antigen dan antibodi patogen terhadapnya.

Daftar Tes Hepatitis

Diagnosis peradangan virus hati dikonfirmasi oleh penelitian khusus. Sebelum menjalani terapi, pasien diuji:

1. Pasien memberikan darah untuk penelitian di pagi hari, antara pukul 7.00 dan 9.00. Pasien harus menahan diri dari makan selama 12 jam. Analisis kuantitatif hepatitis B menentukan keberadaan virus dan titer antibodi dalam serum. Pada saat yang sama, dokter meresepkan penelitian yang mengidentifikasi DNA HBV menggunakan reaksi PCR.
2. Pada pasien yang terinfeksi, keberadaan protein IgG Anti-HBc dan antigen HBsAg ditetapkan. Imunoglobulin spesifik menunjukkan peningkatan cepat dalam konsentrasi virus hepatitis dalam serum pasien. Dalam kasus tes negatif untuk Anti-HBc, IgG dilakukan penelitian tambahan tentang keberadaan penyakit lain.
3. Mempelajari periode eksaserbasi penyakit, mereka menentukan imunoglobulin HBeAg dan Anti-HBc IgM. Menegakkan diagnosis yang benar hanya mungkin setelah penemuan RNA virus - hepatitis dalam kasus ini dikonfirmasi oleh metode molekuler-biologis.
4. PCR banyak digunakan untuk diagnosis penyakit hati - metode kuantitatif memungkinkan Anda meresepkan pengobatan hepatitis yang efektif.

Studi imunologi

Untuk menetapkan kemampuan pasien dalam menghadapi virus berbahaya, diagnosa tingkat daya tahan tubuh. Karena keseluruhan kompleks penelitian laboratorium, indikator kuantitatif dan kualitatif dari faktor imunologis ditetapkan - antibodi terhadap hepatitis B.

Protein HBsAg adalah antigen permukaan yang merupakan komponen superkapsid (selubung virus) dari patogen. Fungsi utamanya adalah partisipasi dalam proses adsorpsi virus oleh sel-sel hati yang sehat. Peptida HBsAg tahan terhadap faktor lingkungan - alkali (Ph = 10), larutan kloramin dan fenol 2%.

Penanda HBsAg hadir dalam serum orang yang terinfeksi. Segera setelah kemunculannya, RNA tidak hanya menerjemahkan sintesisnya, tetapi juga mengandung partikel inti Ar dari penanda sebelumnya. Ini adalah bukti perkembangan fase aktif hepatitis.

Kehadiran HBeAg pada pasien kronis menunjukkan awal tahap aktif dari proses infeksi.

Marker anti-HBc mengandung 2 jenis antibodi - IgG dan IgM. Ini adalah protein khusus untuk satu antigen. Bentuk akut dari penyakit ini ditandai dengan adanya Anti-HBc dan IgM. Nilai positifnya menunjukkan penyakit hati sebelumnya.

Analisis kuantitatif

Untuk menentukan aktivitas patogen meresepkan analisis PCR. Ini menentukan tingkat viral load dan peluang pasien pulih. Reaksi rantai polimerase dilakukan setelah akhir periode laten. Dalam proses penelitian, tidak hanya HBsAg ditentukan, tetapi juga penanda HBeAg.

Mendekode analisis PCR untuk hepatitis memungkinkan Anda menentukan tingkat aktivitas proses patologis dan efektivitas terapi kompleks.

Dokter menentukan seberapa rentan tubuh pasien terhadap obat antivirus, dan apakah tindakan dapat diambil untuk menghilangkan penyebab penyakit hati kronis. Dalam hal ini, indeks transaminase meningkat, dan indeks aktivitas agen penyebab beberapa kali lebih tinggi dari indeks normal, konsentrasi asam amino lebih dari 106 salinan DNA per ml.

Norma transaminase dalam darah sesuai dengan nilai-nilai enzim AsAT dan AlAT. Alanine aminotransferase pada wanita tidak melebihi 32 U / l, dan pada pria - 40 U / l. Konsentrasi virus untuk orang yang terinfeksi pada usia dini adalah 100.000 kopi per ml.

Dalam fase tidak aktif virus dan dalam kasus Anti-HBc, DNA HBV berada dalam kisaran 2000 IU / ml, dan jumlah salinan tidak melebihi 10.000.

Metode Hibridisasi Molekul

Tanggapan ELISA terhadap hepatitis menentukan jenis antigen dengan antibodi dan enzim. Penelitian bertahap dapat diterima, tetapi hanya spesialis yang telah menerima hasil analisis dalam waktu yang dapat membuat diagnosis yang benar.

Penanda virus hepatitis selama immunoassay adalah HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Pada awal penyakit, mereka meningkat: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg adalah 1,239, virus DNA tidak terdeteksi. Setelah pengobatan, hasil analisis menunjukkan penurunan HBsAg menjadi 1,07, dan HBeAg menjadi negatif. Virus DNA hadir.

Jika nilai IgM, IgG, IgA negatif diperoleh - perlu untuk menentukan apakah penyakit tersebut tidak ada atau pemulihan total telah terjadi.

Nilai IgG positif menunjukkan kekebalan yang terbentuk sepenuhnya. Dalam hal ini, IgM tidak terdeteksi. Penting untuk mengetahui bahwa penelitian tentang hepatitis mengungkapkan titer IgM yang tinggi.

Pada periode akut penyakit, nilai-nilai IgG negatif muncul. Remisi penyakit virus disertai dengan IgM imunoglobulin negatif. ELISA relatif sederhana dan aman untuk kesehatan pasien.

Tes darah biokimia

Studi tentang serum mengidentifikasi patologi dalam tubuh, menentukan diagnosis, memungkinkan Anda untuk mengevaluasi kerja hati dan mendapatkan informasi tentang metabolisme. Analisis biokimia dilakukan di pagi hari. Untuk penelitian menggunakan bahan yang berasal dari darah vena.

Penting untuk mengikuti aturan persiapan untuk tes hepatitis C - dalam hal ini, pengodean semua indikator tidak akan terdistorsi. Total bilirubin normalnya 8,55-20,2 mmol / l, dan peningkatannya menunjukkan munculnya penyakit hati. Nilai-nilai AlAT dan AsAT juga meningkat dalam kasus hepatitis B.

Albumin pada pasien sehat adalah 35-55 g / l. Kadar protein plasma yang rendah mengindikasikan peradangan virus pada hati.

Indeks LDH normal berada pada kisaran 125–250 U / l, dan pertumbuhannya berarti deformasi dan penghancuran sel-sel organ yang sakit. Indikator LDH (sorbitol dehydrogenase) menunjukkan keadaan jaringan hati. Nilai normal adalah 0–1 U / l. Tingkat pertumbuhan adalah komponen karakteristik dari perjalanan akut hepatitis B atau transisi ke tahap kronis.

Protein GGG memiliki aktivitas rendah dalam plasma darah.

Pertumbuhannya diamati pada peradangan hati dan bertahan lama. Norma - 25-49 U / l untuk pria, untuk wanita, indikatornya jauh lebih rendah - 15-32 U / l.

Penguraian tanda-tanda hepatitis B kronis

Identifikasi penanda penyakit hati adalah tugas utama dokter, yang berupaya mencegah kesalahan dalam diagnosis. Penting untuk diketahui bahwa faktor-faktor fisiologis berikut memengaruhi hasil analisis:

Tabel antigen dan penguraiannya akan memungkinkan pasien untuk mendapatkan gambaran tentang sifat penyakit.

Jenis PCR untuk hepatitis B dan interpretasi hasil

Reaksi rantai polimerase adalah jenis tes darah yang dapat secara akurat mendeteksi virus hepatitis B. Fitur dari metode ini adalah mampu menunjukkan HBV pada tahap awal - satu bulan setelah infeksi, sementara antigen spesifik terdeteksi pada pasien hanya setelah 2 bulan. PCR tidak hanya dapat mendeteksi virus DNA normal, tetapi juga strain mutan yang tidak bisa dilihat oleh analisis lain.

Ketika decoding PCR untuk hepatitis B, hasilnya dibandingkan dengan nilai standar. Berdasarkan ini, kesimpulan dibuat tentang keberadaan penyakit (hasil positif), konsentrasi virus (aktivitas) atau tidak adanya penyakit (hasil negatif). Pemrosesan data adalah 2 minggu.

Jenis PCR untuk virus hepatitis B

Ada 2 jenis diagnostik yang diresepkan untuk hepatitis B. PCR berkualitas tinggi memungkinkan, dengan akurasi 100%, untuk mengatakan apakah HBV ada dalam darah atau tidak. PCR kuantitatif menunjukkan aktivitas virus, yaitu, berapa banyak DNA HBV yang terkandung dalam 1 ml darah.

PCR berkualitas tinggi dan interpretasinya

Tes darah untuk hepatitis B oleh PCR hanya dapat mendeteksi keberadaan fragmen DNA. Ditunjuk dalam kasus ketika pasien mencurigai infeksi HBV (HBV) atau ketika metode diagnosis lainnya, misalnya, tes serologis tidak memberikan jawaban yang jelas. Menguraikan hasil saat melakukan analisis kualitatif sangat sederhana:

• hasil negatif - tidak ada virus;
• hasil positif - virus terdeteksi.

Tujuan PCR berkualitas tinggi adalah untuk mengkonfirmasi atau menolak keberadaan virus hepatitis B, serta untuk melakukan diagnosis dini. Jika HBV terdeteksi dalam 1-2 minggu setelah infeksi, pengobatan akan seefektif mungkin. Dengan perkembangan aktif HBV selama 2 bulan ke atas, penyakit ini menjadi kronis dan tidak dapat disembuhkan sepenuhnya.

Dalam kasus di mana PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis ditandai dengan adanya virus, langkah selanjutnya adalah melakukan diagnosis kuantitatif.

PCR kuantitatif

Untuk tujuan pengobatan yang efektif atau evaluasi hasil terapi, hanya mengetahui bahwa pasien memiliki HBV tidak cukup. Penting untuk mengukur nilai DNA virus hepatitis B dalam 1 ml darah, yaitu viral load pada tubuh. Jenis PCR untuk hepatitis B ini dilakukan dalam kasus-kasus berikut:

1. Sebelum meresepkan pengobatan.
2. Untuk menilai efektivitas terapi.
3. Untuk menentukan perkembangan resistensi virus terhadap obat yang diminum.
4. Untuk menentukan tahap di mana penyakit itu berada.

Unit pengukuran untuk virus adalah unit internasional (IU / ml) atau jumlah salinan DNA / ml, yaitu jumlah fragmen DNA per 1 ml darah. Rasio antara dua unit tergantung pada sistem pengujian yang dipilih dan berkisar 2 hingga 7 salinan / ml dalam 1 IU / ml. Jika sistem tidak dikenal, maka nilai rata-rata digunakan untuk konversi:

1 IU / ml = 5 salinan / ml

Jika analisis kuantitatif dilakukan segera, angka marginal untuk mendiagnosis penyakit adalah 75 IU / ml. Ketika hasilnya di atas indikator ini, diagnosis HBV dibuat, di bawah ini - HBV tidak terdeteksi.

Pengobatan PCR kuantitatif

Pada hepatitis B, nilai viral load (viremia) berikut, salinan / ml, adalah standar PCR:

• 10 ^ 5 salinan / ml. Ketika, dengan aktivitas virus yang besar, ada peningkatan tingkat ALT lebih sering 2 kali dalam enam bulan, maka terapi antivirus segera diresepkan.

Untuk mengetahui bagaimana DNA hepatitis akan berperilaku dalam hal kronisitas, yaitu, transisi ke bentuk kronis dari akut, hasil diagnosa PCR juga digunakan:

• DNA HBV 2 x 10 ^ 6 salinan / ml berarti bahwa perolehan bentuk kronis penyakit tidak dapat dihindari.

Mempersiapkan survei

Untuk menentukan keberadaan HBV oleh PCR, darah diambil dari vena. Prosedur ini selalu dilakukan dengan ketat pada waktu perut kosong dan yang terbaik adalah pergi ke laboratorium di pagi hari ketika waktu istirahat alami dari makanan adalah 8 jam. Agar hasil pemeriksaan menjadi benar, perlu diketahui terlebih dahulu bagaimana mempersiapkan diri untuk pergi ke klinik dengan benar. Langkah tambahan adalah sebagai berikut:

1. Penolakan dari makanan berlemak, merokok, alkohol, dan olahraga selama 12 jam sebelum prosedur.
2. Beristirahatlah selama 20 menit segera sebelum mendonorkan darah.
3. Sebelum memulai prosedur, perawat harus diperingatkan tentang obat yang diminum.

Perhatian! Jika diagnosis dilakukan pada anak di bawah 5 tahun, maka setengah jam sebelum prosedur, ia harus minum 1 gelas air matang setiap 10 menit.

Kesimpulannya

Hingga saat ini, diagnostik PCR untuk mendeteksi hepatitis B adalah metode yang paling akurat. Metode ini memungkinkan Anda untuk melihat bentuk penyakit yang tersembunyi dan bermutasi, untuk mengidentifikasi penyakit pada minggu-minggu pertama setelah infeksi dan, dengan demikian, untuk melakukan perawatan yang efektif. Bergantung pada situasinya, PCR kualitatif atau kuantitatif dilakukan, yang bertujuan mendeteksi HBV dan menetapkan aktivitasnya. Untuk diuji, Anda perlu menghubungi ahli virologi, spesialis penyakit menular atau hepatologis.

Esensi dari analisis PCR untuk hepatitis B dan hasilnya

Virus hepatitis B berhasil diobati jika terdeteksi dalam waktu dan jumlah antibodi dan antigen dalam darah pasien ditentukan dengan benar. Dengan bantuan enzim immunoassay untuk hepatitis, dimungkinkan untuk mendeteksi keberadaan penanda virus, tetapi mereka tidak dapat menentukan tahap pasti dari proses tersebut.

Untuk evaluasi kuantitatif digunakan diagnosa PCR. Dengan menggunakan tes ini, dimungkinkan untuk menghitung jumlah penanda, memprediksi perjalanan penyakit dan kemungkinan penyembuhan dengan bantuan obat antivirus.

Keuntungan utama dari penelitian ini adalah kemampuan untuk mendeteksi bahkan konsentrasi minimal virus, untuk mengidentifikasi patogen pada tahap spesies.

Diagnosis Hepatitis B

Virus hepatitis B sangat menular dan resisten terhadap pengaruh luar. Itu tetap aktif dalam darah pasien selama beberapa minggu. Oleh karena itu, setiap orang berisiko terinfeksi, bahkan jika profilaksis diamati.

Untuk mendiagnosis penyakit ini, tentukan penelitian berikut:

Inti dari metode PCR

Ahli kimia Amerika K.Mullis menerima Hadiah Nobel, dan metode diagnostiknya masih digunakan.

Leluhur metode PCR (reaksi berantai polimerase) dianggap sebagai ilmuwan dari Norwegia H. Kleppe. Dia pertama kali mulai melakukan amplifikasi (pemulihan) DNA menggunakan rantai pendek DNA, yaitu primer sintetik (semacam salinan).

Namun, ilmuwan gagal mewujudkan idenya. Studi serupa dilakukan oleh ahli kimia Amerika K.Mullis, yang pada tahun 1993 dianugerahi Hadiah Nobel untuk penemuannya. Sejak itu, PCR telah digunakan untuk menetapkan status ayah, mendiagnosis penyakit genetik, dan mendeteksi virus.

Inti dari reaksi adalah bahwa dengan bantuan enzim sepotong DNA tertentu disalin. Anda hanya dapat menyalin area yang sesuai dengan parameter yang ditentukan dan jika berada dalam sampel yang disajikan. Komponen-komponen berikut digunakan untuk memulai reaksi:

1. Matriks DNA dengan situs yang akan disalin.
2. Primer memiliki struktur yang mirip dengan DNA.
3. Polymerase, yaitu enzim yang memicu reaksi. Itu harus termostabil, yaitu, untuk menahan suhu ekstrem.
4. Solusi dengan parameter tertentu, memastikan jalannya reaksi.

Reaksi dilakukan dalam beberapa tahap:

Untuk mendeteksi hepatitis B, dua jenis reaksi digunakan: kuantitatif dan kualitatif.

PCR kuantitatif

Metode kuantitatif menentukan jumlah genom HBV

PCR kuantitatif melibatkan pembuatan serentak salinan fragmen DNA dan penentuan jumlah molekul secara simultan. Pengukuran dilakukan setelah setiap tahap, yaitu secara real time. Ini dicapai dengan menggunakan probe fluorescent, yang termasuk dalam rantai molekul dan bersinar dalam periode tertentu studi.

Metode ini digunakan untuk mendeteksi fragmen DNA yang merupakan penanda virus hepatitis. Dengan menggunakan metode kuantitatif, dimungkinkan untuk secara akurat mengisolasi genotipe virus. Dengan kata lain, jumlah salinan genom HBV per nomor sel pasien dihitung.

Analisis kuantitatif memberikan jawaban atas pertanyaan-pertanyaan berikut:

1. Dengan intensitas apa penyakit ini berkembang.
2. Seberapa efektif pengobatannya.
3. Apakah resistensi obat berkembang?

Juga, pengukuran kuantitatif diperlukan untuk diagnosis tahap infeksi kronis. Jika jumlah DNA di bawah 100 pcs / ml pada tingkat transaminase normal, maka orang tersebut adalah pembawa virus.

Pada fase akut, jumlah antibodi jauh lebih tinggi.Dalam terapi antivirus, peningkatan jumlah antibodi menunjukkan perkembangan resistensi obat, yang merupakan sinyal untuk penyesuaian pengobatan.

PCR berkualitas tinggi

PCR berkualitas tinggi memberikan informasi lebih sedikit, tetapi dapat menghilangkan infeksi.

PCR berkualitas tinggi hanya dapat menentukan keberadaan patogen dalam darah. Jika tidak ada, pasien tidak terinfeksi, jika patogen memasuki darah, hasilnya akan positif.

Namun, dengan bantuan reaksi kualitatif tidak mungkin untuk mengklarifikasi genom virus, stadium penyakit. Oleh karena itu, untuk diagnosis HBV dilakukan pengukuran kuantitatif dan kualitatif.

Mempersiapkan survei

Darah vena diperlukan untuk analisis PCR. Ini harus dilakukan di pagi hari dengan perut kosong.

Pasien harus mempersiapkan studi dengan benar:

1. Selama 10 jam menolak makanan, Anda hanya bisa minum air bersih.
2. Menjelang berhenti minum alkohol, selama 4 jam tidak merokok.
3. Sebelum pemeriksaan harus menghindari stres fisik dan emosional.
4. Hentikan penggunaan obat selama 2 hari, jika hal ini tidak memungkinkan, perlu untuk memberi tahu teknisi laboratorium. Beberapa obat memiliki efek pada hasil akhir.

Interpretasi data

Dalam reaksi kuantitatif, indikator yang diperoleh dievaluasi tergantung pada jumlah salinan DNA.

Mudah untuk menginterpretasikan data pengukuran kualitas. Ia memberikan jawaban positif atau negatif.

Dalam reaksi kuantitatif, dimungkinkan untuk mengevaluasi indikator yang diperoleh tergantung pada jumlah salinan DNA. Satuan ukuran adalah salinan / ml.

Data diterjemahkan sebagai berikut:

1. Jika jumlah DNA HBV kurang dari 90, maka infeksi tidak ada. Pasien mengembangkan kekebalan pasca vaksinasi, atau dia sembuh dari penyakit.
2. Ketika jumlah salinan 2x100 berbicara tentang pembawa virus.
3. Angka 2x106 menunjukkan tahap kronis dari penyakit ini.
4. Dengan DNA lebih dari 2x109, pasien mengalami hepatitis akut.

Hasil yang salah

Keuntungan dari metode diagnostik menggunakan reaksi polimerase adalah sebagai berikut:

1. Deteksi patogen secara langsung. Sebaliknya, ELISA memberikan informasi tentang keberadaan antibodi terhadap virus.
2. Kekhususan. Artinya, itu adalah wilayah DNA yang ada dalam sampel biomaterial yang disalin.
3. Hipersensitif. Metode ini bahkan dapat mendeteksi fragmen sel tunggal.
4. Diagnosis penyakit pada tahap akut dan laten. Artinya, adalah mungkin untuk mendiagnosis penyakit pada tahap manifestasi praklinis.

Metode ini memiliki kekurangan yang mengarah pada hasil yang salah. Kelemahan paling signifikan adalah kemungkinan kontaminasi bahan. Sumber utama kontaminasi adalah tabung reaksi yang tidak diproses dengan baik, tangan laboratorium, reagen.

Bagian dari DNA dari reaksi sebelumnya dapat masuk ke dalam darah. Oleh karena itu, peningkatan persyaratan sanitasi diberlakukan di laboratorium: ruang terpisah, tabung plastik, perawatan laboratorium ultraviolet, dll.

Hasil negatif palsu mungkin disebabkan oleh berkurangnya sensitivitas reaksi. Ini terjadi dalam situasi berikut:

• pasien sedang minum obat, misalnya, antikoagulan;
• orang tersebut menderita tekanan fisik sebelum analisis (bermain olahraga, kerja keras);
• infeksi telah terjadi baru-baru ini.

Jika pasien memiliki kemungkinan infeksi yang tinggi, dan hasil penelitiannya negatif, ia perlu diperiksa ulang.

Lihat juga:

Kesimpulan

Metode reaksi rantai polimerase adalah yang utama dan paling informatif untuk diagnosis HBV. Hal ini memungkinkan tidak hanya untuk menetapkan status pembawa infeksi, tetapi juga untuk memperjelas stadium penyakit, untuk mengevaluasi hasil perawatan.

Untuk diagnosis yang lebih akurat, pengukuran kualitatif dan kuantitatif digunakan. Kerugian dari metode ini termasuk kemungkinan kontaminasi, sensitivitas berkurang dan harga agak tinggi.

Agar hasil yang paling dapat diandalkan, seseorang harus mempersiapkan studi dengan benar dan melakukannya di klinik dengan lisensi yang sesuai dan reputasi yang baik.

DNA Hepatitis B dan PCR

Tes DNA dan PCR dari virus hepatitis B adalah tes yang paling sensitif yang mendeteksi jejak DNA molekuler di hati yang mengidentifikasi keberadaan virus. Esensi dari metode ini terdiri dari penggandaan beberapa fragmen DNA yang dimiliki oleh agen penyebab penyakit.

PCR jenis hepatitis B adalah reaksi berantai polimerase dari pereaksi kimia eksternal dengan bahan biologis yang sedang diselidiki, yang bertujuan untuk mengidentifikasi molekul DNA virus dalam darah dan indikator kuantitatif per satuan volume. Analisis ditugaskan dalam kasus-kasus berikut:

• jika Anda mengalami tanda-tanda hepatitis B pada pasien;
• selama kegiatan diagnostik untuk hepatitis campuran;
• untuk mengklarifikasi efektivitas terapi.

Untuk analisis PCR, darah vena dikumpulkan. Sebelum belajar, sebaiknya jangan makan sekitar 8 jam.

Hasil normal ketika mendeteksi DNA dalam virus dianggap “tidak terdeteksi”. Ini berarti bahwa virus tidak ada dalam darah atau isinya tidak signifikan. Diagnosis akhir hanya dapat dibuat oleh spesialis berdasarkan analisis biokimia dan imunologis yang komprehensif dari plasma darah untuk hepatitis tipe B. Dokter meresepkan kursus terapi. Pengobatan sendiri melibatkan terlalu banyak risiko.

Pengambilan sampel darah vena dilakukan untuk analisis PCR.

Metode PCR memungkinkan untuk mendeteksi DNA patogen bahkan dengan kehadiran minimal dalam sampel darah yang dipilih. Selain itu, analisis ini memungkinkan untuk mendeteksi antigen yang telah dikembangkan untuk virus. Masing-masing antigen menunjukkan tahap penyakit tertentu:

• HBsAg - virus hadir saat ini.
• Anti-HBcor - patogen saat ini tidak ada, tetapi ada di masa lalu.
• Anti-HBs - dalam darah terdapat antibodi terhadap hepatitis B (sebagai pilihan - herpes, HIV, klamidia, mikoplasmosis, kandidiasis, tuberkulosis, ensefalitis yang ditularkan melalui kutu dan banyak penyakit lainnya).

Patologi dan tanda-tandanya

Hepatitis B atau HBV adalah infeksi virus yang mempengaruhi sel-sel hati. Berbahaya tidak hanya dengan tindakan langsung pada parenkim organ, yang melemahkan fungsi penghalang dan kekebalan umum. Konsekuensi yang lebih serius mungkin terjadi, seperti sirosis hati dan terjadinya neoplasma ganas.

HBV ditularkan melalui darah seseorang yang terinfeksi hepatitis, kotorannya, melalui kontak dengan selaput lendir, terutama selama hubungan seksual, lesi kulit, melalui jarum suntik yang tidak steril selama transfusi darah atau selama operasi perut. Bayi yang baru lahir dapat terinfeksi oleh ibunya yang sakit ketika menyentuh celah di putingnya.

Gejala-gejala berikut adalah karakteristik hepatitis B:

Kelelahan yang tidak biasa

• meningkatkan kelelahan pada beban rendah;
• kelelahan yang tidak biasa;
• berat di hypochondrium kanan;
• nafsu makan berkurang, mual;
• kekuningan kulit, sklera mata;
• kotoran terang;
• urin gelap;
• nyeri pada sendi.

Masa inkubasi, setelah gejala ini mulai muncul, adalah dari satu hingga enam bulan. Ini adalah periode akumulasi sel-sel virus dalam aliran darah hati. Ketika konsentrasi mereka mencapai massa kritis, virus menembus membran hepatosit dan terus berkembang biak di dalam sel. Akibatnya, sel-sel hati mati, sirosis berkembang, yang, tanpa adanya langkah-langkah terapi yang tepat, menyebabkan pasien menjadi fatal. Tes darah tepat waktu untuk PCR dan Hepatitis B DNA membantu menghindari yang negatif.

Indikasi untuk PCR adalah:

• tes DNA positif mengkonfirmasikan diagnosis hepatitis B;
• hepatitis akut dan kronis;
• hepatitis campuran;
• penentuan kuantitatif virus dalam serum darah;
• pengembangan taktik terapi yang efektif.

Persiapan untuk analisis

Persiapan untuk diagnosis menggunakan PCR ditentukan oleh jenis biomaterial. Jadi darah dan urin hanya disumbangkan di pagi hari, dengan perut kosong. Juga diambil apusan dan goresan dari daerah urogenital. Satu-satunya batasan bagi wanita adalah menstruasi. Seks terbatas untuk kedua jenis kelamin pada malam penelitian.

Hasil PCR dapat dianggap dapat diandalkan hanya jika pasien dipersiapkan dengan baik untuk prosedur ini. Studi ini menyiratkan kondisi berikut:

• penuh kenyamanan spiritual, tidak adanya kegembiraan. Untuk memastikan analisis ini dapat diteruskan bahkan di rumah. Anda hanya perlu memanggil dokter dengan peralatan yang sesuai;
• tidak makan, alkohol, merokok, aktivitas fisik setidaknya 8-12 jam sebelum analisis, jika tidak data penelitian akan terdistorsi;
• 15-20 menit relaksasi lengkap sebelum pengumpulan darah;
• penghentian obat-obatan (jika ini tidak memungkinkan, laboratorium harus diperingatkan);
• anak-anak di bawah lima tahun selama setengah jam sebelum analisis harus diberikan air matang untuk diminum dalam porsi kecil.

Bagaimana penelitiannya

Analisis PCR didasarkan pada prinsip-prinsip yang digunakan oleh biologi molekuler. Mereka terdiri dalam penggunaan enzim khusus yang membelah dan mereplikasi bagian DNA dan RNA dari agen infeksi yang ditemukan dalam darah. Setelah operasi ini, sampel yang diperoleh diidentifikasi oleh database yang tersedia di laboratorium. Pada saat yang sama, jenis infeksi dan konsentrasi dalam darah patogen terdeteksi.

Untuk penelitian ini, amplificator digunakan - termostat yang mampu memanaskan dan mendinginkan tabung dengan biomaterial. Ini diperlukan untuk aktivasi proses replikasi. Keakuratan analisis tergantung pada keakuratan parameter suhu.

Hasil decoding

Hasil positif bagi pasien adalah kesimpulan laboratorium "tidak terdeteksi". Ini berarti tidak adanya DNA hepatitis B dalam darah.Dalam istilah numerik, ini adalah sekitar 120 IU / ml, atau 200 salinan per unit volume darah yang sama. Nilai ini adalah norma. Persyaratan untuk bahan biologis adalah tidak boleh terkontaminasi.

Decoding hasil analisis lain memungkinkan diagnosis berikut dibuat:

• Konsentrasi DNA hepatitis B dalam darah lebih dari 200, tetapi di bawah tingkat kritis. Tidak ada patologi yang parah.
• Viremia dalam bentuk ringan, hingga 500 kopi per ml. Pilihan pengobatan tergantung pada indikator biopsi hati dan tingkat kemunduran fungsinya.
• Peningkatan konsentrasi virus (lebih dari 500 salinan). Proses peradangan pada fase aktif dan membutuhkan terapi antivirus intensif.
• Viral load maksimum (lebih dari 800 salinan per ml.). Langkah-langkah terapi dikembangkan berdasarkan kondisi pasien dan sepenuhnya ditujukan untuk peningkatan semaksimal mungkin.

Bagi pasien, hasil yang baik adalah kesimpulan "tidak terdeteksi"

Menentukan indikator kuantitatif dari konten DNA hepatitis B selama PCR adalah dasar untuk pilihan program terapi. Setelah tiga atau enam bulan, tes dilakukan lagi untuk menguji efektivitas terapi antivirus.

Fitur reaksi berantai polimerase

Dalam metode PCR menggunakan dua pendekatan untuk penentuan DNA milik virus: kualitatif dan kuantitatif.

Pendekatan kualitatif mengkonfirmasi atau menyangkal adanya hepatitis B. PCR diresepkan atas permintaan pasien yang mencurigai dirinya terinfeksi infeksi HBV atau dalam kasus ketika diagnosis dini tidak memberikan hasil yang jelas dengan cara lain.

Jika virus hepatitis B dapat dideteksi selambat-lambatnya dua minggu setelah masuk ke dalam tubuh, kemungkinan besar prognosis untuk pengobatan. Di masa depan, penyakit akan mulai berkembang. Setelah sekitar dua bulan, dia akan memasuki fase kronis. Penyembuhan total dalam kasus ini akan menjadi tidak mungkin.

Pendekatan kuantitatif untuk PCR hanya digunakan ketika virus terdeteksi. Dia mengevaluasi:

• viral load spesifik pada hati;
• intensitas perkembangan penyakit;
• resistensi terhadap obat antivirus;
• efektivitas pengobatan.

Indikator-indikator ini adalah kepentingan praktis langsung. Terutama indikator kuantitatif DNA. Prognosis pada fase akut hepatitis B tergantung pada konsentrasi virus dalam aliran darah hati, dengan demikian, konsentrasi rendah sel-sel virus hampir sepenuhnya mengecualikan transisi hepatitis akut ke kronis. Pasien seperti itu tidak membahayakan orang lain. Viral load yang tinggi berkontribusi pada kronisasi proses patologis dan kemungkinan infeksi hepatitis pada orang yang kontak dengan pasien.

Ada juga hubungan antara konsentrasi gen virus dalam darah dan degenerasi sirosis hati, dan terjadinya kanker parenkimnya.

Tes PCR membantu dokter untuk mendeteksi pembawa virus.

Efektivitas terapi antivirus ditentukan oleh tingkat penurunan konsentrasi DNA hepatitis B dalam sirkulasi hati. Hasil yang memadai adalah pengurangan viral load 1-2 kali dengan pengobatan intensif selama tiga bulan hingga enam bulan. Tingkat yang lebih rendah membutuhkan perubahan dalam perawatan.

Prognosis perkembangan patologi dan penunjukan terapi yang tepat berasal dari:

• volume kuantitatif DNA virus hati dalam serum darah;
• parameter biokimia terkait (misalnya, tingkat leukosit dalam darah dan kadar bilirubin di sana);
• penanda infeksi virus;
• hasil biopsi hati.

PCR tujuan umum

Analisis dengan bantuan reaksi berantai polimerase membantu dokter:

• mendeteksi pembawa virus;
• memprediksi perkembangan hepatitis tipe B;
• pastikan bahwa penyakitnya menjadi kronis;
• memantau aktivitas virus di semua fase perkembangan;
• mengidentifikasi jenis mutan dan hepatitis B yang tersembunyi;
• mengevaluasi efektivitas pengobatan virus ketika memilih taktik tertentu dan mengubahnya jika tidak cukup berhasil.

Keuntungan dari metode ini

Tidak seperti tes lain yang digunakan untuk mendiagnosis hepatitis B, PCR memiliki:

Analisis PCR sangat sensitif.

1. Sensitivitas luar biasa. Teknik ini memungkinkan peneliti untuk mendeteksi agen penyebab penyakit, bahkan jika konsentrasi molekul DNA dalam darah minimal. Ini memungkinkan Anda untuk mengambil langkah-langkah pencegahan dan penyembuhan pada tahap awal penyakit, ketika tampaknya belum dinyatakan oleh gejala apa pun.
2. Cakupan peluang yang luas. PCR tidak hanya dapat mendeteksi agen penyebab virus hepatitis B, tetapi juga sejumlah patologi lainnya.
3. Universalitas pendekatan. Biomaterial untuk penelitian dapat berupa darah, air liur, sel mukosa dan kulit.
4. Efisiensi Kesimpulannya akan siap tepat satu hari setelah pengambilan sampel darah (hasil analisis itu sendiri diperoleh selambat-lambatnya 7 jam).
5. Kredibilitas. Dalam semua kondisi metode PCR, tidak pernah menunjukkan data yang salah.
6. Studi aksesibilitas harga. Dengan biaya, PCR hanya sedikit lebih tinggi dari tes biasa yang menggunakan darah sebagai biomaterial.

Satu-satunya biaya penelitian adalah kompleksitas teknologinya. Untuk implementasi PCR yang berkualitas tinggi membutuhkan biomaterial yang sangat bersih, peralatan modern, dan staf yang terlatih. Lebih disukai untuk mengajukan diagnosa menggunakan metode ini ke laboratorium khusus.

Virus hepatitis B mengacu pada penyakit, penyembuhan lengkap yang hanya mungkin terjadi pada tahap awal perkembangan. Identifikasi penyakit pada fase ini membantu diagnosis hipersensitif oleh PCR. Gejala pertama yang menyebabkan kecurigaan kerusakan hati oleh virus harus menjadi alasan untuk berkonsultasi dengan spesialis. Jika diagnosis dikonfirmasi, perawatan harus segera dimulai. Ini akan meningkatkan prognosis dan meningkatkan kemungkinan mendukung hati dalam keadaan sehat selama bertahun-tahun.