ELISA untuk hepatitis virus

9 Maret 2017, 16:25 Artikel pakar: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3,608

Untuk mendeteksi hepatitis virus dalam tubuh, obat-obatan banyak menggunakan enzim immunoassay berdasarkan deteksi konsentrasi dan jenis antigen menggunakan antibodi dan enzim. Ini dilakukan secara bertahap, oleh penelitian laboratorium, dengan akurasi indikasi yang tinggi. Tergantung pada jumlah dan kelas antibodi, warna dan konsentrasi enzim yang menggunakan ELISA dan, oleh karena itu, dokter mendiagnosis penyakit, berubah.

Apa itu ELISA?

Kehadiran virus hepatitis dalam tubuh pasien ditentukan dengan menggunakan metode analisis darah serologis untuk keberadaan virus HCV dan penanda (tubuh dan antibodi) yang mengindikasikannya. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) meneliti berbagai virus, senyawa dengan berat molekul rendah, makromolekul, indikator kualitatif dan kuantitatifnya, menggunakan manifestasi reaksi terhadap antigen mereka. Untuk melakukan ini, gunakan enzim sebagai label untuk pendaftaran sinyal. Ini semakin banyak digunakan dalam pengobatan, karena ELISA jelas menemukan antigen yang terdefinisi dengan baik, tanpa membingungkan mereka dengan yang lain, memiliki sensitivitas yang tinggi terhadap kehadiran invasi pada virus hepatitis.

Kelemahan dari diagnosis semacam itu adalah ketidakmampuan untuk mengidentifikasi penyebab penyakit, karena metode ini hanya menunjukkan reaksi sistem kekebalan tubuh. Hasil analisis dipengaruhi oleh vaksinasi yang dilakukan sebelumnya. Selama 8 jam sebelum analisis, disarankan untuk tidak makan, nikotin, alkohol. Dasar dari tes ELISA adalah respon enzimatik dan kekebalan tubuh terhadap virus. Molekul biologis berikatan dengan sel dan unsur-unsurnya, mikroorganisme, mendeteksi virus, kemudian bekerja enzim yang memungkinkan Anda untuk mengekspresikan respons kekebalan dalam parameter yang terlihat dan terukur.

Indikasi untuk analisis

Hepatitis virus dalam tubuh dapat menyebabkan kanker dan sirosis hati. Pentingnya diagnosis yang tepat waktu tidak dapat disangkal lagi. Metode diagnosis utama adalah tes ELISA, yang dengan akurasi tinggi menentukan keberadaan virus HCV (IgM dan IgG) dan aktivitas elemen pelacaknya. Tes wajib untuk lulus virus hepatitis:

Orang dengan kelompok risiko (pecandu narkoba, penderita AIDS, karyawan lembaga medis dan penegak hukum).
Orang dengan hepatitis akut atau kronis.
Wanita hamil dan berencana hamil.

ELISA mengenali penyakit pada tahap apa pun. Hasil analisis, rata-rata, siap dalam 2 hari.

Kriteria yang menentukan pentingnya analisis

Tes ELISA menentukan adanya antibodi kelas IgG, IgM, IgA. Ketika mendiagnosis hepatitis virus, dokter tidak memperhatikan jenisnya, karena keberadaan manifestasi virus HCV semacam itu sudah menunjukkan tahap akut atau kronis penyakit. Pada tahap awal penyakit, tingkat IgM meningkat (5 hari setelah infeksi); pada hari ke 15 - 20, antibodi IgG muncul dan dapat tetap berada dalam darah manusia untuk waktu yang lama bahkan setelah penyembuhan; IgA - muncul setelah 10-14 hari, berkurang setelah perawatan.

Jika IgG dan IgA terdeteksi setelah penggunaan obat dan tingkatnya tetap pada tingkat yang sama - pembawa memiliki bentuk hepatitis kronis. Kriteria penting dari tes ini adalah definisi yang jelas tentang kelas antibodi yang tersedia dan kuantitasnya. Berdasarkan hal ini, Anda bisa tahu tidak hanya tentang keberadaan penyakit, tetapi juga tahap perkembangannya. Deteksi unsur-unsur tersebut dalam darah pasien memungkinkan resep pengobatan yang tepat dan tepat waktu untuk mencegah konsekuensi yang lebih serius.

Bagaimana ini dilakukan?

Alokasikan tes ELISA langsung dan tidak langsung. Tahapan langsung:

Mengumpulkan bahan biologis dan menempatkannya di lubang khusus.
Dalam 15-30 menit antigen menempel pada permukaan sumur.
Menambahkan antibodi ke sumur ke antigen yang ditemukan. Semua dibiarkan selama 1-5 jam.
Hapus antigen yang tidak terikat (tuangkan isi sumur).
Bilas sumur dengan solusi khusus.
Tambahkan larutan enzim ke dalam sumur. Biarkan selama 30 menit - 1 jam.
Penggunaan kolorimetri (deteksi warna dan konsentrasi warna isi sumur, perbandingan dengan indikator yang berbanding lurus dengan konsentrasi virus).

Penggunaan untuk diagnosis ELISA tidak langsung akan memberikan hasil yang lebih akurat.

Metode ELISA tidak langsung terjadi dengan penggunaan antibodi yang tidak berlabel pada antigen yang ditemukan dan penambahan label berikutnya. Pertama, darah diambil dari pasien dan menyebar melalui sumur selama 15-30 menit. (antibodi diperbaiki dengan lubang). Kemudian antibodi yang tidak berlabel dimasukkan ke dalamnya selama 1–5 jam (koneksi antibodi dengan antigen terbentuk - kompleks imun). Selanjutnya, elemen mikro yang tidak terikat dituang dari sumur dan dicuci dengan larutan khusus. Pada tahap berikutnya, teknisi laboratorium menambahkan elemen pelacak berlabel ke sumur selama 15-30 menit. (Ini mengikat tanpa label dengan label dengan pembentukan kompleks "antibodi-antibodi-antigen"). Ekstra (longgar) dihilangkan lagi selama pengeringan dan pencucian dengan larutan. Berikutnya adalah enzim yang berubah warna dalam 5-30 menit. tetap di lubang dan data warna dibandingkan dengan data indikator tabel. ELISA tidak langsung lebih akurat.

Apa yang ditunjukkan oleh ELISA untuk hepatitis virus?

ELISA memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan infeksi (virus hepatitis dari semua jenis, HIV, herpes, sifilis, cytomegalovirus, campak, rubella, virus gondong, virus Epstein-Barr), merupakan penanda penyakit autoimun, sel kanker. Mengindikasikan pelanggaran fungsi reproduksi (perubahan testosteron, prolaktin, estradiol, dan progesteron), kerusakan tiroid, serangan cacing, klamidia. Efektif untuk mendeteksi ureaplasmosis, batuk rejan, virus Dange, virus West Nile, Borrelia. Daftar definisi tinggi, termasuk banyak item.

Konfirmasi hasil

Penentuan antigen virus HCV oleh ELISA memberikan akurasi 98%. Ini juga digunakan untuk menguji ulang bahan biologis dengan indikator fuzzy sebelumnya. Kehadiran antigen IgM bukan merupakan indikator untuk hepatitis akut dan membutuhkan penelitian tambahan. Ketika tes ELISA diulang, hasilnya bertepatan dengan 90-100%. Dalam kasus perbedaan minimal, nilai rata-rata diambil sebagai indikator. Untuk akurasi maksimum dalam hal dokter menyarankan secara paralel untuk melakukan analisis biokimia darah. Untuk menguji hasil setelah immunoassay enzim, Anda dapat menggunakan metode diagnostik lainnya.

Penelitian tentang virus hepatitis dengan metode ife

ELISA dalam diagnosis hepatitis virus. Kemampuan immunoassay enzim

Diagnosis laboratorium khusus untuk hepatitis virus didasarkan pada penggunaan metode penelitian imunokimia dan biologi molekuler. Metode imunokimia utama adalah radioisotop atau radioimmune (RIA) dan immunoassay (ELISA). Metode diagnostik imunokimia didasarkan pada interaksi spesifik antigen - antibodi dengan identifikasi kompleks berikutnya dengan bantuan label khusus. Enzim immunoassay enzim yang paling umum.

Laporan pertama tentang penggunaan enzim immunoassay. sebagai metode untuk menentukan zat apa pun diterbitkan pada tahun 1971 secara bersamaan oleh dua kelompok penelitian - V. Van Weemen, A. Schuurs dan E. Engvall, P. Perlmann. Enzim immunoassay didasarkan pada prinsip berikut: pada fase padat, yang terutama menggunakan permukaan sumur tablet polystyrene, antigen dari agen infeksi atau antibodi (sering campuran antibodi) ke antigen yang terdeteksi terdeteksi. Antigen atau antibodi ini, yang melekat pada fase padat, disebut imunosorben.

Sebagai hasil dari inkubasi imunosorben dan serum uji di hadapan agen yang terdeteksi, mereka terikat pada kompleks antigen - antibodi. Setelah prosedur pencucian, selama antigen dan antibodi yang tidak terikat dikeluarkan, inkubasi dengan konjugat dilakukan. Sebagai konjugasi untuk deteksi HBsAg, anti-HBs digunakan, dalam pendeteksian antibodi terhadap virus hepatitis C - antibodi untuk imunoglobulin manusia (konjugat antivirus) yang dilabeli dengan peroksidase lobak. Sebagai hasil dari inkubasi ini, perlekatan pada kompleks antigen yang sudah ada terjadi - antibodi dari konjugat tambahan yang diperkenalkan. Setelah penghilangan konjugat (pencucian) yang tidak terikat, media dimasukkan ke dalam sumur. Ketika menggunakan konjugat peroksidase, hidrogen peroksida digunakan sebagai substrat dalam kombinasi dengan indikator, yang paling sering digunakan sebagai orthophenylenediamine (OPD) atau tetramethylbenzidine (TMB). Hasilnya diperkirakan secara fotometrik.

Kualitas dan keandalan kemampuan analitik dari metode immunoassay enzim dicirikan oleh sejumlah kriteria, yang meliputi sensitivitas, spesifisitas, akurasi dan reproduktifitas.

Sensitivitas adalah jumlah minimum suatu zat yang dapat dideteksi oleh enzim immunoassay. Dalam hal ini, batas bawah sensitivitas metode ini adalah konsentrasi zat uji dalam sampel, yang sesuai dengan hasil positif terkecil dari penentuan, yang secara statistik berbeda secara signifikan dari indikator sampel yang sengaja dibuat negatif. Sensitivitas suatu IFTS tergantung pada sejumlah keadaan yang terkait dengan desain sistem pengujian (afinitas immunosorbent, kualitas ekstraksi dan sistem buffer), dan resolusi serta akurasi metode registrasi.

Spesifisitas - kemampuan untuk mengidentifikasi komponen yang tepat untuk penentuan enzim immunoassay ini dirancang. Spesifisitas ELISA sebagian besar ditentukan oleh reaksi silang dari antibodi atau antigen (yaitu, komposisi yang digunakan sebagai imunosorben) dengan senyawa yang berhubungan erat, serta komposisi media inkubasi (efek matriks).

Correctness - korespondensi nilai rata-rata hasil penentuan berulang sampel kontrol yang sama dengan nilai sebenarnya dari parameter yang diukur. Keakuratan penentuan dalam ELISA tergantung pada kualitas sistem pengujian dan sampel kontrol. Untuk sistem pengujian immunoassay yang baik, indikator kebenaran berada di kisaran 90-110%. Keunikan penelitian biomedis dalam ELISA adalah ketidakmungkinan untuk menetapkan nilai yang tepat, dan oleh karena itu rata-rata beberapa laboratorium ahli dianggap sebagai nilai sebenarnya. Kriteria statistik untuk kebenaran adalah rata-rata aritmatika dan tingkat penyimpangannya dari nilai sebenarnya, dinyatakan sebagai persentase.

Reproducibility - kemampuan sistem pengujian untuk menunjukkan nilai yang sama dengan studi berulang dari sampel yang sama. Reproduksibilitas tergantung pada kesalahan acak (kesalahan) selama prosedur reaksi, dan pada kualitas sistem pengujian dan keakuratan metode pencatatan hasil. Diyakini bahwa reproduksibilitas sampel kontrol yang sama dari perusahaan yang sama di laboratorium yang berbeda tidak boleh melebihi nilai koefisien variasi 15%.

Ada beberapa skema ELISA spesifik untuk penentuan penanda hepatitis virus: a) immunoassay enzim langsung; b) immunoassay enzim tidak langsung; c) hambatan kompetitif; c) metode "trap", atau "capture".

Dari metode biologi molekuler untuk diagnosis hepatitis virus, reaksi berantai polimerase dan hibridisasi lebih umum digunakan. Metode-metode ini, terutama PCR, memungkinkan untuk mendeteksi sejumlah kecil DNA atau RNA virus tertentu dan, dengan demikian, menilai replikasi, dan dalam beberapa kasus, aktivitas replikasi.

Tes darah hepatitis C

Hepatitis C adalah salah satu penyakit hati yang paling umum yang terjadi ketika terinfeksi dengan virus hepatitis C (HCV), yang masuk ke dalam tubuh terutama ketika bersentuhan dengan darah orang yang terinfeksi. Ditemukan hepatitis C kronis dan akut. Pada 70-80 persen pasien dengan hepatitis C akut, tidak ada gejala penyakit, hanya dalam beberapa kasus, setelah beberapa waktu setelah infeksi, ada manifestasi penyakit, yang dinyatakan dalam kelelahan, sakit perut, kehilangan nafsu makan, gelap urin, muntah, mual, kotoran keringanan, sakit kuning, nyeri pada persendian. Biasanya, gejala muncul 6-7 minggu setelah infeksi, tetapi durasi timbulnya tanda-tanda penyakit bervariasi dari 2 minggu hingga enam bulan. Jika gejala di atas terjadi, Anda perlu berkonsultasi dengan dokter penyakit menular dan melakukan tes darah untuk hepatitis C. Diagnosis hepatitis, dilakukan pada waktu yang tepat, dapat mendeteksi penyakit pada tahap awal dan secara signifikan meningkatkan kemungkinan pemulihan.

Ketika tes hepatitis C dijadwalkan

Situasi ketika tes Hepatitis C diperlukan:

selama kehamilan dan keluarga berencana;
pasien dengan gejala hepatitis kronis atau akut;
orang tersebut berisiko. Mereka adalah pekerja medis, orang-orang di penjara, petugas penegak hukum, orang-orang yang menggunakan narkoba, memiliki banyak pasangan seksual, mengidap AIDS, sedang menjalani hemodialisis, dan lain-lain.

Persiapan untuk Analisis Hepatitis C

Tidak diperlukan persiapan khusus untuk analisis hepatitis C. Untuk analisis, darah diambil dari vena dengan perut kosong, pada saat yang sama, setidaknya delapan jam harus berlalu setelah makan terakhir.

Tes hepatitis C ELISA

Analisis pertama, biasanya diresepkan untuk diagnosis tes hepatitis C - ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Tes Hepatitis C ELISA memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan antibodi terhadap virus hepatitis C (anti-HCVAb) dalam darah. Jika hasil tes ELISA positif, maka itu menunjukkan adanya kontak tubuh dengan virus hepatitis C. Tetapi 40% orang yang memiliki ELISA positif tidak mendeteksi virus dalam darah. Fenomena ini disebut hasil positif palsu. Juga, dengan bantuan ELISA, darah donor diperiksa.

RIBA untuk Hepatitis C

Analisis RIBA untuk hepatitis C digunakan untuk mengkonfirmasi hasil ELISA positif. Metode immunoblotting rekombinan (RIBA) adalah studi yang lebih akurat tentang keberadaan antibodi terhadap virus hepatitis C. Kehadiran virus hepatitis C dalam tubuh juga tidak menentukan hasil positif, tetapi hanya mengkonfirmasi keberadaan antibodi.

Tes PCR hepatitis C

Untuk mendeteksi keberadaan virus hepatitis C dalam darah (HCV RNA) dan untuk membuat diagnosis, mereka paling sering menggunakan analisis dengan metode reaksi rantai polimerase (PCR). Studi ini memungkinkan untuk mendeteksi dengan akurasi tinggi keberadaan dalam darah bahkan sejumlah kecil virus. Analisis PCR untuk hepatitis C dapat mengungkapkan keberadaan virus sudah 5 hari setelah infeksi, jauh sebelum munculnya antibodi. Ketika hasil analisis PCR positif, itu berarti adanya infeksi aktif.

Ada beberapa variasi analisis PCR:

PCR kuantitatif, yang memungkinkan untuk menentukan tidak hanya fakta keberadaan virus, tetapi juga viral load (jumlah virus). Indikator ini sangat penting untuk menentukan efektivitas pengobatan;
genotipe yang membentuk genotipe virus hepatitis C, yang penting untuk menentukan durasi dan taktik pengobatan. Ada lebih dari 10 genotipe virus hepatitis C, tetapi untuk praktik klinis cukup menentukan lima jenis yang paling umum: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Analisis PCR kuantitatif dilakukan:

dengan tes positif kualitatif untuk keberadaan RNA virus hepatitis C dalam serum;
untuk penilaian yang akurat tentang efektivitas pengobatan;
untuk menentukan taktik perawatan pasien.

Tidak ada hubungan langsung antara tingkat keparahan hepatitis C dan jumlah virus dalam darah. Konsentrasi virus memengaruhi infektivitas penyakit, yaitu semakin besar jumlah virus dalam darah pasien, semakin besar risiko penularan virus, misalnya melalui kontak seksual atau dari ibu ke anak. Juga, efektivitas pengobatan tergantung pada konsentrasi virus. Selama terapi, faktor yang menguntungkan adalah viral load yang rendah, dan faktor yang sangat tinggi tidak menguntungkan.

Analisis genotip dilakukan:

dengan tes positif kualitatif untuk keberadaan RNA virus hepatitis C dalam serum;
untuk penilaian yang akurat tentang efektivitas pengobatan;
untuk menentukan taktik perawatan pasien;
untuk memprediksi kronisasi proses infeksi;
untuk menentukan perkembangan penyakit.

Deteksi genotipe virus sangat penting untuk menentukan durasi pengobatan, yang penting, karena interferon memiliki berbagai efek samping dan toleransi pasien yang rendah.

Analisis decoding untuk hepatitis C

Biasanya, virus RNA, antibodi untuk mereka dan antigen sama sekali tidak ada. Kehadiran antibodi dalam darah menunjukkan adanya hepatitis C kronis atau akut atau masa pemulihan. Jika RNA HCV hadir dalam darah, yang ditentukan oleh analisis PCR, ini menunjukkan adanya virus dalam darah.

Dengan teknik tes yang salah, transportasi dan kelainan darah, analisis PCR terkadang dapat menunjukkan hasil positif palsu. Analisis ELISA dan RIBA pada tahap awal penyakit, ketika tubuh belum menghasilkan jumlah antibodi yang cukup, dapat menunjukkan hasil negatif palsu.

Jika, ketika menguraikan tes untuk hepatitis C, hasil positif diperoleh, perlu untuk menghubungi dokter penyakit menular dan ahli gastroenterologi untuk diagnosis dan pengobatan lebih lanjut.

Netrofil tersegmentasi diturunkan

Trombosit anak normal, naik, turun

Hormon perangsang tiroid, TGT

Diagnosis Hepatitis

Seseorang tidak dapat menentukan keberadaan hepatitis dalam tubuh dengan segera, karena masa inkubasi penyakit dapat bertahan hingga empat minggu. Ketika tanda-tanda pertama penyakit muncul, perubahan radikal dalam komposisi darah terjadi pada organisme yang terpengaruh: analisis biokimiawi melaporkan masalah kesehatan yang serius dan adanya virus patogen. Namun, untuk membuat diagnosis akhir, tidak cukup untuk menyumbangkan darah untuk hepatitis, serta diagnosis hepatitis secara terperinci.

Diagnosis laboratorium hepatitis

Diinginkan untuk melaksanakannya setelah akhir masa inkubasi, sehingga dokter dengan ketelitian tertinggi dapat menentukan penyakit hati yang ada dalam tubuh. Jika tidak, pengobatan yang diresepkan tidak akan memberikan efek terapi yang diinginkan dan bahkan memperburuk gambaran klinis yang berlaku.

Diagnosis Hepatitis A

Biasanya, diagnosis hepatitis A dimulai dengan pertanyaan terperinci dari pasien dan penunjukan sejumlah tes yang harus dilakukan sesegera mungkin. Ini adalah:

tes darah biokimia;
hitung darah lengkap;
Metode PCR;
ELISA;
koagulogram.

Jika penyakit Botkin berkembang, maka lompatan bilirubin, AlAT dan AsAT yang tidak normal, sampel thymol diamati sesuai dengan hasil analisis darah biokimia. Selain itu, IgM anti-HAV spesifik diproduksi, yang merupakan fakta tak terbantahkan dari keberadaan hepatitis A.
Secara umum, analisis darah ditentukan oleh penurunan leukosit, lonjakan LED dan limfositosis. Dan, bagaimanapun, yang paling dapat diandalkan adalah metode PCR, yang menentukan indikator RNA virus patogen.
Selain itu, dokter mempelajari gejala penyakit, setelah itu dapat membuat diagnosis akhir dan menerobos ke terapi yang paling efektif. Kebutuhan akan pemeriksaan instrumental sangat jarang. Setelah perawatan konservatif yang berhasil dalam kondisi rawat inap dan karantina pasien, pemulihan akhir menunggu, dan hepatitis A tidak kambuh lagi.

Diagnosis Hepatitis B

Untuk menentukan keberadaan virus hepatitis B juga dimungkinkan berdasarkan hasil tes laboratorium, dan untuk ini hal pertama yang diperlukan adalah menyumbangkan darah untuk hepatitis. Secara alami, virus patogen memiliki tiga antigen utama - HBsAg, HBcAg dan HBeAg, yang memproduksi antibodi dalam tubuh. Fitur utama dari gambaran klinis ini adalah ELISA - ELISA, yang hanya mengungkapkan penanda spesifik hepatitis B.
Segera harus diklarifikasi bahwa antigen HBsAg muncul dalam darah bahkan sebelum gejala hepatitis pertama dan secara pasti ditentukan pada periode icteric. Namun, tes negatif tidak mengecualikan kehadiran hepatitis B, dan karenanya membutuhkan penggunaan metode polymerase chain reaction (PCR) yang sama efektifnya.
Jika Anda menduga bahwa hepatitis B wajib adalah tes darah biokimia, yang direkomendasikan untuk lulus sejak awal. Melakukan biopsi hati dan ultrasonografi organ peritoneum dibahas secara individual, tetapi ketika riwayat penyakit ini sangat jelas, tidak diperlukan metode pemeriksaan klinis.

Echogram hati pada hepatitis autoimun pada tahap hepatitis kronis

Diagnosis Hepatitis C

Untuk membuat diagnosis ini, tidak cukup untuk menyumbangkan darah untuk hepatitis, karena virus mungkin ada dalam tubuh dalam bentuk laten. Dan, bagaimanapun, tes laboratorium utama adalah semua analisis yang disajikan di atas, serta kinerja tambahan dari biopsi hati. Pemeriksaan mikroskopis bahan biologis ini (dalam kasus kami, sepotong jaringan hati) menentukan sejauh mana proses patologis dan fibrosis jaringan. Pengambilan sampel bahan dilakukan di bawah pengaruh bius lokal, komplikasi dari prosedur semacam itu sangat jarang dalam praktik medis.
Jika dicurigai hepatitis C, metode utama pemeriksaan klinis adalah ultrasonografi organ peritoneum. Alasannya sederhana: penyakit ini sering dimanifestasikan oleh perubahan visual pada hati yang terkena, perubahan struktur dan ukurannya. Dengan cara ini Anda dapat menentukan:

ukuran hati, limpa, pankreas dan kantong empedu;
perubahan patologis pada organ-organ ini;
aliran darah umum di organ peritoneum;
area optimal untuk melakukan biopsi hati.

Metode pemeriksaan klinis ini menentukan semua patologi fokus organ pada tingkat mikroskopis. Jika hati terwakili di layar dalam skala abu-abu, biopsi langsung diperlukan, karena warna abu-abu memvisualisasikan jaringan yang terkena dari "filter manusia".

Pencegahan hepatitis

Karena penyakit ini tidak segera muncul dengan sendirinya, penyakit ini jauh dari gambaran klinis yang berlanjut ke perawatan segera. Pasien mungkin tidak menyadari keberadaan virus patogen dalam tubuh, yang, pada gilirannya, dengan cepat menyebar ke aliran darah dan menginfeksi sel-sel hati yang sehat.
Untuk menghindari nasib tragis seperti itu, disarankan untuk mematuhi semua tindakan pencegahan. Kewaspadaan seperti itu secara signifikan akan mengurangi risiko morbiditas dan menyelamatkan Anda dari masalah kesehatan serius di masa depan. Aturan dasar pencegahan disajikan di bawah ini:

cuci tangan setelah jalan;
tunduk pada pemrosesan sayuran dan buah segar berkualitas tinggi;
untuk melaksanakan semua vaksinasi pencegahan yang ditentukan dalam rencana kalender tahunan;
sikap selektif terhadap pasangan seksual;
hindari kontak dengan orang sakit;
hanya gunakan jarum suntik sekali pakai dan sangat waspada di stasiun transfusi darah.

Juga disarankan untuk secara teratur (setiap enam bulan sekali) menyumbangkan darah untuk hepatitis, untuk memastikan bahwa virus tidak menembus ke dalam tubuh, dan tidak menginfeksi sel-sel hati yang dulu sehat. Jika diagnosis ditentukan, diperlukan untuk segera menjadi akun apotik dan mengikuti semua rekomendasi spesialis.

Penulis publikasi:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Pendidikan: Universitas Kedokteran Negeri Rostov (Universitas Kedokteran Negeri Rostov), Departemen Gastroenterologi dan Endoskopi.
Ahli gastroenterologi
Doktor Ilmu Kedokteran

Metode ELISA untuk mendeteksi hepatitis

Obat modern dikenal karena banyak penyakit hati. HCV (virus hepatitis C) adalah yang paling umum dan berbahaya karena infeksi ini sering berkembang tanpa gejala dan mengarah pada komplikasi kritis, bahkan kematian. Itulah sebabnya diagnosis penyakit yang tepat waktu, yang dilakukan dengan menggunakan berbagai metode, termasuk enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) untuk mendeteksi antibodi terhadap virus dalam darah, sangat penting.

Pernyataan infeksi HCV untuk diagnosis hepatitis

Dalam diagnostik laboratorium untuk mendeteksi hepatitis C (infeksi HCV), dua jenis metode digunakan:

Serologis, berdasarkan deteksi antibodi terhadap virus hepatitis C (anti-HCV), juga disebut ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Ini bertujuan mendeteksi anti-HCV (penanda IgM dan IgG) yang digunakan untuk skrining dan untuk mendiagnosis hepatitis C. Kedua penanda ini dapat dideteksi dalam darah (plasma) dalam kombinasi yang berbeda, yang membutuhkan interpretasi klinis yang tepat. Untuk mengkonfirmasi keberadaan anti-HCV, tes RIBA (rekombinan imunoblot) dilakukan.
Biologi molekuler, bertujuan mendeteksi virus RNA. Tes RNA HCV diresepkan untuk kategori pasien berikut:
- dengan anti-HCV yang teridentifikasi;
- tanpa terdeteksi anti-HCV, tetapi dengan data epidemiologis dan klinis yang mapan yang membutuhkan pengecualian bentuk HCV akut.

RNA virus dapat dideteksi dalam darah sedini 14 hari setelah infeksi, yaitu sebelum munculnya anti-HCV yang terjadi selama 2-3 bulan pertama.

Untuk konfirmasi akhir diagnosis (terutama ketika hanya satu dari dua penanda infeksi HCV terdeteksi), para ahli merekomendasikan bahwa, setelah waktu tertentu, tes anti-HCV dan RNA HCV yang berulang harus dilakukan.

Deteksi hepatitis oleh ELISA

Untuk implementasi diagnosis dini hepatitis virus, terutama asimptomatik, bentuk anicteric, dalam serum, keberadaan protein virus (antigen) atau antibodi terhadap mereka (diproduksi oleh sistem kekebalan ketika virus memasuki tubuh) dengan menggunakan alat immunosorbent assay (ELISA) yang terhubung dengan enzim terdeteksi. Ini adalah metode universal diagnosis imunologis, esensinya terletak pada studi tentang interaksi "antigen-antibodi". Ini banyak digunakan di banyak negara di dunia.

Penentuan hepatitis oleh ELISA memungkinkan tidak hanya untuk menegakkan diagnosis yang akurat, tetapi juga untuk menilai sifat penyakit, serta untuk memilih pengobatan yang kompeten dan efektif menggunakan obat-obatan tradisional (interferon, ribavirin), obat-obatan tindakan langsung (Sofosbuvir, Daclatasvir) dan obat generiknya dari produksi India dan Cina.

Kapan pun memungkinkan, diagnosis hepatitis virus oleh ELISA dilengkapi dengan PCR (reaksi berantai polimerase), yang memungkinkan untuk menentukan keberadaan virus hepatitis dalam RNA.

Seberapa akurat metode immunoassay enzim

Menurut perkiraan para ahli, keakuratan metode ELISA adalah 95%, yaitu, dalam 95 dari 100 pasien yang menggunakan enzim immunoassay, keberadaan dan jumlah antibodi HCV - IgM dan IgG dapat dideteksi dalam darah. Jika hasilnya positif, adalah mungkin untuk mendiagnosis kontak HCV dengan tubuh (bukan virus itu sendiri, yaitu adanya antibodi dalam darah untuk itu, yang mungkin merupakan hasil dari penyakit yang sudah ditransfer).

Namun, meskipun sensitivitas tinggi dari uji immunosorbent terkait-enzim (ELISA), pada 40% pasien dengan hasil positif, virus mungkin tidak terdeteksi, menunjukkan hasil yang meragukan atau hasil positif palsu.

Untuk mengkonfirmasi kebenaran hasil ELISA, metode RIBA (rekombinan imunobloting) digunakan untuk lebih akurat mempelajari deteksi antibodi terhadap HCV.

Uji inti anti NCV

Studi yang efektif untuk menentukan keberadaan antibodi terhadap virus hepatitis termasuk inti anti-HCV, yang digunakan sebagai tes konfirmasi ketika hasil "tidak pasti" diperoleh.

Jika inti anti-HCV terdeteksi dalam serum pada pengenceran 1: 1000, hasil positif kemungkinan didiagnosis, yaitu, penyakitnya ada.

Jika sampel pada pengenceran 1: 1000 negatif, pada pengenceran 1: 200 positif, penelitian diperlukan untuk keberadaan viral load RNA. Dalam kasus ini, kemungkinan besar, tidak ada infeksi HCV.

Penting untuk dipahami bahwa, dalam bentuk HCV kronis, antibodi terdeteksi secara konstan, dan selama eliminasi (pengangkatan sel-sel tubuh) dari virus, mereka bertahan selama 4-8 tahun atau lebih. Oleh karena itu, keberadaan anti-HCV tidak selalu menunjukkan infeksi tubuh dan tidak memungkinkan membuat kesimpulan obyektif tentang aktivitas proses tersebut. Untuk mendapatkan data yang akurat tentang viral load, tingkat kerusakan hati, durasi infeksi dan perbedaan antara bentuk akut dan kronis penyakit, disarankan untuk menggunakan definisi spektrum antibodi terhadap HCV yang berbeda. peptida. Penting juga untuk mengamati dinamika kuantitatif dan kualitatif mereka.

Analisis ELISA - dari skrining untuk HbsAg hingga diagnostik kompleks

Dengan diperkenalkannya teknologi modern dalam kedokteran, kemungkinan metode diagnostik imunokimia, yang mampu mengenali penyakit dengan cepat dan akurat, ketika metode lain tidak berdaya, tumbuh. Memahami bahwa virus hepatitis B mampu berada di dalam tubuh dalam konsentrasi yang sangat rendah, di mana ia tidak dapat dideteksi bahkan dengan metode yang dapat diandalkan seperti PCR, membuatnya perlu untuk melihat secara segar masalah diagnosis penyakit ini dan untuk menghargai kemungkinan immunoassay.

Dalam materi ini kami akan menganalisis secara terperinci semua yang berhubungan dengan jenis penelitian laboratorium ini. Anda akan belajar apa enzim immunoassay itu dan bagaimana kinerjanya, apa antigen Australia dan bagaimana ditentukan, apa singkatan Hbs ag, Hbcor, di mean dan peran mereka dalam menguraikan analisis, serta mendapatkan informasi yang lebih berguna dan menarik.

Isi artikel:

Informasi umum tentang ELISA

ELISA (disingkat ELISA) adalah metode diagnostik laboratorium yang dapat mendeteksi antigen dan antibodi dari berbagai infeksi, termasuk hepatitis B. Pengetahuan terkini tentang sifat-sifat virus dan karakteristik respons kekebalan tubuh, memungkinkan tidak hanya mendeteksi infeksi, tetapi juga mengidentifikasi itu. tahap, efektivitas vaksinasi dan mengevaluasi efektivitas pengobatan.

Esensi enzim immunoassay

ELISA didasarkan pada reaksi "antigen-antibodi", atau lebih tepatnya sifatnya.

Menanggapi invasi zat asing (antigen), yang khususnya adalah protein dari virus, tubuh menghasilkan protein pelindung - antibodi. Antibodi masuk ke dalam reaksi kompleks dengan antigen, menghalangi aktivitasnya.

Kami akan berbicara lebih banyak tentang antigen dan antibodi di bawah ini, tetapi sekarang kami akan mencatat bahwa untuk setiap antigen ada individu yang ketat, atau seperti kata dokter, antibodi homolog. Jadi, jika kita ingin mendeteksi antigen spesifik dalam darah, kita akan menggunakan tablet diagnostik dengan antibodi. Jika ada antigen dalam darah, itu akan bereaksi dengan antibodi, yang dapat dideteksi dengan berbagai cara. Begitu juga sebaliknya. Jika kita ingin menemukan antibodi, maka kita membutuhkan tablet dengan antigen yang sesuai.

Paling sering, nilai diagnostik dari beruang hanya antibodi yang dengannya Anda dapat mendiagnosis hampir semua infeksi. Namun, kekhasan virus hepatitis B adalah bahwa peran utama dalam diagnosis dimainkan oleh salah satu antigen - antigen Australia.

Bagaimana IFA?

Pertimbangkan prosedur ELISA tipikal untuk contoh spesifik ketika Anda ingin mengidentifikasi antibodi terhadap patogen.

Untuk diagnosa, tablet dengan 96 sumur digunakan, yang sudah jenuh dengan antigen yang sesuai. Selanjutnya, prosedurnya adalah sebagai berikut:

serum diterapkan ke semua sel;

antibodi homolog bereaksi dengan antigen dan menempel pada lempeng;

tablet dicuci, menghilangkan antibodi yang tidak terikat;

kemudian label enzimatik dimasukkan ke dalam sel - suatu zat yang bereaksi dengan antibodi dan menyebabkan pewarnaan isi sel.

Ini adalah prosedur ELISA standar dengan pewarnaan, yang digunakan, misalnya, dalam strip tes imunokromatografi.

ELISA tidak terbatas pada penentuan kualitatif antibodi atau antigen patogen. Semakin banyak antibodi yang terkandung dalam sel tablet, semakin kuat larutan yang diwarnai. Membandingkan densitas optisnya dengan kontrol, peralatan modern dapat secara akurat menghitung konsentrasi antibodi per satuan volume. Dengan demikian, ELISA kuantitatif dilakukan, ukuran pengukuran yang paling sering adalah satuan kepadatan optik (EOP).

Analisis imunochemiluminesen

Saat ini ada beberapa lusin jenis ELISA, yang masing-masing memiliki cakupan pilihan. Yang paling populer dalam diagnosis hepatitis B adalah analisis immunochemiluminescent.

Label enzimatik untuk analisis ini bukan kromatin, seperti pada ELISA standar, tetapi zat khusus - fosfor yang menyebabkan kompleks bercahaya dalam cahaya ultraviolet.

Dengan bantuan alat khusus - luminometer, Anda dapat secara akurat menentukan tingkat emisi dan, sebagai konsekuensinya, konsentrasi zat yang diinginkan.

Menggunakan metode ELISA menentukan hampir semua antigen yang ada dari virus hepatitis B dan antibodi untuk mereka.

Antigen virus hepatitis B: Hbs, Hbe dan Hbc

Istilah antigen (antigen) berasal dari dua kata bahasa Inggris: antibody - antibody dan generator - manufacturer. Dengan demikian, di bawah antigen memahami zat apa pun yang menyebabkan pembentukan antibodi dalam tubuh untuk itu. Antigen yang paling umum adalah senyawa protein.

Saat ini, tiga antigen dari virus hepatitis B diketahui: hbsag, hbc dan hbe.

Antigen Australia

Protein yang merupakan bagian dari kulit luar dari patogen hepatitis B telah terdeteksi jauh sebelum ditemukannya virus itu sendiri. Antigen ini mendapat namanya karena pertama kali diidentifikasi dari penduduk asli Australia. Namun, pada awalnya, protein itu tidak dianggap sebagai antigen, tetapi unsur darah yang benar-benar normal di antara penduduk asli, dan kesadaran akan hubungannya dengan penyakit hati datang sedikit kemudian.

Pelestarian jangka panjang antigen dalam darah dan tidak adanya antibodi menunjukkan kemungkinan pembentukan hepatitis B kronis yang positif-HBeAg

Hari ini dalam literatur profesional nama "antigen Australia" praktis tidak ditemukan dan telah digantikan oleh singkatan internasional - HbsAg (antigen permukaan hepatitis b - antigen permukaan hepatitis B). Selain itu, Anda dapat menemukan singkatan antigen hbs atau hanya hbs. Semua singkatan ini dapat diterima dan dapat ditambahkan dengan mencatat HBV atau HBV - virus hepatitis B (virus hepatitis b).

Antigen permukaan virus hepatitis B memiliki satu fitur luar biasa yang membuatnya menjadi penanda diagnostik yang sangat diperlukan - konsentrasinya dalam darah dapat mencapai tingkat yang sangat tinggi, hingga setengah miligram per mililiter darah. Ini karena hanya sebagian kecil dari HBsAg baru, yang terbentuk selama reproduksi virus hepatitis B, pergi ke konstruksi selaput partikel virus baru, dan sisanya - bebas beredar di dalam darah. Akibatnya, jumlah partikel hbs dalam darah dapat melebihi jumlah virion ratusan ribu kali.

Fitur ini membuat antigen Australia menjadi penanda utama dalam diagnosis skrining hepatitis B, yang terdeteksi dalam darah sedini 4-6 minggu setelah infeksi. Ketika antibodi terbentuk, antigen permukaan secara bertahap digantikan oleh mereka. Jika setelah 6 bulan HBsAg berlanjut, maka ini mengindikasikan transisi infeksi ke bentuk kronis.

Baru-baru ini, ketika menjadi mungkin untuk menentukan konsentrasi hb hbv, perannya dalam diagnosis telah tumbuh lebih, karena mengandalkan tingkat antigen dapat membedakan hepatitis B kronis (HBV) dari keadaan karier yang sehat, serta memantau efektivitas pengobatan.

Antigen inti

Inti dari virus - nukleokapsid - adalah protein yang mengendalikan reproduksi virus HBcoreAg dan HBeAg.

HBcoreAg, yang juga bisa disebut HBCore-antigen, hbc atau core antigen, hanya dapat ditemukan di jaringan hati, langsung di inti hepatosit. Antigen ini tidak terdeteksi dalam darah dan tidak memiliki nilai diagnostik.

Struktur virus hepatitis

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - sebaliknya, memainkan peran penting dalam diagnosis. HBeAg dan HBcoreAg adalah kerabat dekat. Mereka memiliki kesamaan struktur yang besar dan berbeda terutama dalam posisi spasial molekul. Tidak seperti HBcore, HBe bukan bagian dari dinding nukleokapsid, dan beredar bebas dalam darah.

Peran HBe dalam proses infeksi tidak cukup jelas, namun, kekhasan perilaku dan hubungannya dengan proses infeksi sudah cukup dipelajari. HBeAg menunjukkan reproduksi aktif virus dan memungkinkan Anda menentukan fase CHB kronis - HBeAg-positif atau HBeAg-andal.

HBe dapat dideteksi dalam darah yang sudah dalam masa inkubasi virus hepatitis B akut (HBV), sementara HBeAg konsentrasi tinggi selama 3 minggu kemungkinan besar mengindikasikan ancaman proses kronis. Konsentrasi HBe secara langsung berkaitan dengan kandungan partikel Dane (disebut partikel virus hepatitis B) - semakin tinggi jumlah HBe, semakin tinggi konsentrasi DNA HBV dalam darah.

HBeAg adalah penanda utama infeksi. Darah pasien HBeAg-positif jauh lebih menular daripada HBeAg-negatif. Sebagai contoh, pada wanita hamil yang positif untuk HBe dan Hbs, probabilitas penularan infeksi kepada anak mencapai 50%, sedangkan kemungkinan kejadian seperti itu dalam HBe-negatif, tetapi Hbs ibu positif adalah 10-30%.

Hbe menentukan perjalanan hepatitis kronis. Hepatitis B kronis HBeAg-positif memiliki prognosis yang jauh lebih tidak menguntungkan dalam hal pengembangan sirosis.

Mungkin itu yang perlu Anda ketahui tentang antigen HBV, dan kami beralih ke kelompok kedua penanda hepatitis B - antibodi.

Apa artinya hasil AMDAL positif atau negatif untuk hepatitis C?

Untuk menentukan secara akurat jenis hepatitis setelah diagnosis awal, untuk memprediksi perjalanan penyakit, untuk menentukan tahap perkembangannya, berbagai penelitian serologis digunakan. Data yang paling akurat diperoleh setelah enzim immunoassay. Menggunakan ELISA hepatitis C, didiagnosis pada 95% kasus. Analisis inilah yang memungkinkan untuk mendeteksi antibodi antivirus Hepatitis C (antivirus HCV) dan menilai tidak hanya tingkat aktivitas proses patologis, tetapi juga tingkat efektivitas terapi antivirus yang ditentukan oleh dokter yang hadir dan dilakukan di bawah kendalinya.

Ketika penelitian diperlukan dan fitur-fiturnya

Hepatitis C adalah jenis penyakit yang paling berbahaya, karena memiliki periode laten (laten) yang panjang dan konsekuensi yang berbahaya. Untuk menghindari tampilan dan pengembangan diagnosis yang tepat dan tepat waktu memungkinkan, salah satu metode yang paling informatif yang diakui immunoassay.

Dimungkinkan untuk mengkonfirmasi keberadaan infeksi HCV dalam darah pasien dengan bantuan penanda serologis, dan analisis yang didasarkan pada kompleks peptida virus struktural dan non-struktural memungkinkan memperoleh data yang paling lengkap dan dapat diandalkan tentang keberadaan antibodi. Pada orang sehat, antibodi terhadap virus hepatitis C tidak ada dalam darah pasien, dan deteksi mereka menunjukkan adanya patogen dan pengembangan proses patologis.

Dalam perjalanan penelitian, spesialis mengidentifikasi IgM dan IgG total antibodi yang relevan langsung dengan protein struktural dan non-struktural HCV. Melakukan penelitian ini pada tahap awal penyakit untuk mengidentifikasi pasien yang terinfeksi virus hepatitis C. Kehadiran total antibodi dalam darah pasien menunjukkan timbulnya penyakit atau infeksi sebelumnya.

Permulaan penyakit ini ditunjukkan oleh adanya antibodi kelas IgM, dan hepatitis C tipe dapat dinilai oleh antibodi kelas IgG yang terdeteksi. Mereka menjadi konfirmasi pemulihan (tahap akhir penyakit).Untuk periode ini, pemulihan anatomi dan fungsional organ yang terkena adalah karakteristik.

ELISA (ELISA) yang dilakukan tepat waktu memungkinkan Anda mengidentifikasi proses patologis pada tahap awal pengembangan, mendiagnosis penyakit dengan akurasi tinggi, dan meningkatkan peluang pemulihan yang cepat. Tes ELISA memungkinkan untuk menentukan tidak hanya keberadaan virus, tetapi juga jumlah total antibodi antivirus tertentu.

Wanita dalam keadaan hamil saat mendaftar di klinik antenatal.
Pasien yang memiliki gejala hepatitis akut atau kronis.
Profesional medis yang terus-menerus berhubungan dengan bahan biologis.
Pasien dengan diagnosis AIDS.
Warga yang kecanduan narkoba.
Pasien dengan alkoholisme dan mereka yang menjalani gaya hidup asosial.

Rujukan ke tes ELISA (enzyme immunoassay) dan terima petugas penegak hukum atau karyawan layanan publik. Kebutuhan akan ELISA terjadi jika Anda mencurigai adanya pelanggaran fungsi hati atau ketika menerima data yang meragukan tentang keadaan organ setelah ultrasound. Dokter dapat memberikan pasien rujukan untuk tes darah ELISA jika yang terakhir akan menjalani intervensi bedah yang kompleks. Jika seorang wanita (terutama di atas 30 tahun) merencanakan kehamilan, dan peningkatan nilai bilirubin atau transferase (ALT, AST) ditemukan dalam tes darah.

Antibodi IgG anti-virus spesifik telah terdeteksi selama beberapa tahun. Konsentrasi mereka menurun secara bertahap, yang menegaskan dinamika positif. Adapun hepatitis C kronis, dalam hal ini, jumlah total antibodi anti-HCV tidak berubah. Diagnosis yang akurat didasarkan pada penentuan tingkat antibodi IgM.

Perjalanan hepatitis C tergantung pada genotipe virus yang menyebabkan perkembangan penyakit. 11 varietas obat modern dikenal. Dalam situasi yang paling sulit, infeksi dengan beberapa genotipe virus mungkin terjadi, dan salah satunya selalu dominan. Hanya diagnosis yang akurat yang akan membantu memilih obat yang paling efektif untuk terapi yang efektif, memilih dosisnya dan mengatur durasi intervensi terapeutik.

Evaluasi hasil penelitian

Untuk membuat diagnosis dugaan hepatitis C dan mendapatkan informasi indikatif tentang jumlah dan kualitas patogen, dilakukan uji ELISA (immunosorbent assay-linked enzim), di mana spesialis menerima konfirmasi keberadaan virus dalam tubuh dan dapat menilai aktivitasnya.

Dengan penelitian ini, kita dapat menarik kesimpulan tentang:

viral load;
risiko mengembangkan proses kronis;
aktivitas reproduksi (replikasi) molekul RNA HCV;
lamanya proses patologis;
tingkat kerusakan hati.

Tingkat risiko penyakit menjadi kronis juga dievaluasi. Diidentifikasi menggunakan ELISA antivirus, antibodi HCV mengindikasikan replikasi virus. Hasil akhir memerlukan konfirmasi dengan penelitian yang lebih akurat.

Penilaian kualitatif hasil immunoassay enzim dinyatakan sebagai hasil positif atau negatif. ELISA memungkinkan untuk mendeteksi hepatitis C pada tahap awal perkembangan penyakit, serta selama perjalanan penyakit dalam bentuk anicteric.

Analisis ini memiliki keunggulan tertentu, termasuk:

Akurasi indikator kualitatif dan kuantitatif.
Waktu belajar minimum.
Tes bertahap.

Enzim immunoassay adalah salah satu survei yang dibedakan dengan akurasi tinggi, tetapi terlepas dari semua keuntungannya, dalam beberapa kasus tidak memungkinkan untuk mengidentifikasi patogen yang ada dalam tubuh manusia.

Untuk penelitian, asisten laboratorium mengambil darah vena pasien dan menempatkannya dalam wadah khusus. Setelah waktu tertentu, antigen (mikroorganisme asing) melekat pada dinding kapal. Spesialis memasukkan imunoglobulin (antibodi) ke dalam pembuluh dan mencari respons imun.

Hasil yang diperoleh dibandingkan dengan data dari tabel yang dikompilasi khusus. Hasilnya dievaluasi sebagai:

Positif, menunjukkan adanya bentuk akut penyakit, jika keberadaan antibodi kelas IgA, IgG, IgM ditentukan selama tes darah.

Negatif - ketiga jenis antibodi tidak terdeteksi, tidak ada.

Salah positif - Hasil ELISA positif, tetapi tidak dikonfirmasi setelah PCR (reaksi berantai polimerase).

Diragukan - penanda dalam darah tidak terdeteksi di hadapan hepatitis C. Ini mungkin terjadi dengan diagnosis yang terlalu dini. Diperlukan analisis berulang setelah 2-3 minggu. Untuk diagnosis yang akurat, buat analisis PCR.

Hasil negatif-negatif dari analisis adalah mungkin pada pasien yang menggunakan obat yang memiliki efek penghambatan pada sistem pertahanan tubuh.

Kedua hasil positif palsu dan negatif palsu dari analisis dimungkinkan karena beberapa alasan. Pertama-tama, itu adalah viral load minimal pada tahap awal perkembangan penyakit. Yang tak kalah penting adalah keadaan sistem kekebalan tubuh pasien dan karakteristik individu tubuhnya. Hasil penelitian secara signifikan mempengaruhi pemberian obat dari antara imunosupresan.

Mustahil untuk sepenuhnya percaya diri dalam keakuratan hasil enzim immunoassay, jika pasien adalah wanita dalam keadaan hamil. Hasil yang keliru dimungkinkan dalam kasus-kasus di mana analisis dilakukan untuk pasien yang menderita penyakit autoimun, penyakit onkologis dengan tumor jinak.

Penelitian tambahan dilakukan jika pasien baru-baru ini menderita penyakit menular yang serius, ia telah didiagnosis dengan gangguan metabolisme atau kerusakan sistem endokrin. Jika komposisi darah meningkatkan kadar heparin atau secara signifikan mengurangi kadar elemen jejak.

Keakuratan analisis dapat ditingkatkan dengan memperhatikan aturan yang ada untuk mempersiapkan pengirimannya:

Darah disumbangkan hanya saat perut kosong. Makan terakhir diperbolehkan setidaknya 8-10 jam sebelum bahan dikumpulkan.
Di malam hari, sebelum analisis, diharuskan untuk menolak makan produk dan hidangan berlemak, digoreng, pedas, diasap.
Tidak boleh ada pembicaraan tentang minum alkohol.
Lebih baik berhenti merokok sehari sebelum donor darah.

Uji imunosorben terkait-enzim dapat dilakukan hanya untuk pasien yang saat ini tidak menderita penyakit catarrhal, peradangan atau infeksi, dan tidak mengeluh karena ketidakpatuhan.

Pelanggaran aturan dan persyaratan yang tercantum mengarah pada fakta bahwa hasil analisis dievaluasi sebagai false positive. Situasi ini berkembang pada 15-20% kasus. Namun, untuk kepercayaan penuh, dokter merujuk pasien untuk pemeriksaan tambahan, di mana mereka perlu menyumbangkan darah untuk PCR.

Reaksi berantai polimerase

Diagnosis tidak dimungkinkan hanya berdasarkan hasil analisis ELISA. Kehadiran antibodi bukan bukti keberadaan virus patogen dalam tubuh pada saat penelitian. Pengujian yang salah dapat memicu gangguan saraf atau bahkan reaksi pasien yang lebih akut. Diagnosis berdasarkan hasil ELISA tidak akurat. Diperlukan penelitian tambahan, yang hasilnya akan menghasilkan vonis akhir dari para dokter.

Penting untuk diingat bahwa hasil tes positif palsu adalah mungkin pada orang yang saat ini menderita penyakit menular lainnya, tetapi sistem kekebalan mereka tidak merespon dengan benar terhadap penetrasi patogen atau virus ke dalam tubuh.

Diagnosis hepatitis C memungkinkan sejumlah tes laboratorium, tempat khusus di antaranya adalah enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Penilaian kualitatif indikator didefinisikan sebagai hasil positif atau negatif. Tidak adanya virus hepatitis B dalam darah pasien adalah normal, tetapi dalam beberapa kasus, setelah penelitian, para ahli menyatakan bahwa konsentrasi yang tidak signifikan dari beberapa fragmen RNA (asam ribonukleat) telah ditemukan dalam bahan biologis. Identifikasi mereka menggunakan PCR (reaksi berantai polimerase).

Tes darah ini memungkinkan untuk mengidentifikasi agen penyebab hepatitis C pada tahap awal pengembangan penyakit dan untuk membuat diagnosis dengan akurasi tinggi. Studi ini didasarkan pada fakta bahwa virus memiliki molekul DNA (hepatitis B) atau RNA (hepatitis C) dalam strukturnya.

Selama analisis PCR menggunakan perlakuan khusus sampel darah pasien:

meningkatkan konsentrasi molekul asam nukleat;
tentukan tipenya;
menetapkan jenis patogen.

Jika ada sejumlah kecil fragmen RNA patogen dalam darah manusia, semuanya akan terdeteksi oleh PCR. Ini memungkinkan untuk membuat diagnosis yang akurat. Perbedaan utama dari analisis ini dari semua metode penelitian lainnya adalah 100% diagnosis akurat.

Analisis ini dilakukan dalam studi tentang darah wanita hamil yang mendaftar ke klinik antenatal untuk pendaftaran, dengan dugaan hepatitis C dengan periode laten (laten) yang panjang, dengan kesulitan dalam membuat diagnosis yang akurat menggunakan ELISA. PCR diperlukan dalam kasus di mana hasil yang meragukan telah diperoleh setelah enzim immunoassay.

Virus hepatitis C dalam situasi ini ada di tubuh pasien, tetapi belum memprovokasi perkembangan penyakit yang cepat. Ini adalah perjalanan penyakit yang laten. Analisis dilakukan agak cepat, karena tidak perlu menumbuhkan patogen menggunakan media nutrisi untuk mendapatkan hasilnya. Perbedaan utama antara PCR dan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) adalah bahwa dalam penelitian ini tidak ada yang namanya false-positif atau hasil yang meragukan.