Metode biokimia untuk mempelajari fungsi hati

Hati adalah laboratorium pusat tubuh. Ini mensintesis protein (albumin, protrombin, fibrinogen, faktor pembekuan darah lainnya), lipid (kolesterol), lipoprotein, asam empedu, bilirubin, empedu terbentuk. Zat beracun yang terjadi di dalam tubuh dan masuk ke dalam tubuh (fungsi antitoksik) dimanfaatkan di hati. Hati mensintesis glikogen dan terlibat dengan pankreas dalam pengaturan cadangan karbohidrat dalam tubuh. Peran aktifnya dalam pencernaan adalah empedu yang emulsi lemak dan meningkatkan pemecahannya oleh lipase pankreas. Produk pemecah makanan (lemak, asam lemak, gliserin, asam amino, karbohidrat, mineral, air, vitamin) masuk melalui pembuluh vena portal ke hati. Di dalamnya, mereka sebagian disimpan, sebagian diproses, digunakan dan sebagian disiapkan untuk digunakan oleh jaringan lain.

Penyakit hati menyebabkan gangguan satu atau lainnya dari fungsinya, yang digunakan untuk tujuan diagnostik. Yang paling banyak dilakukan dalam studi laboratorium klinis tentang kelainan fungsi pigmen, karbohidrat, dan protein. Pada kerusakan hati inflamasi dan toksik akut, sejumlah besar enzim intraseluler dilepaskan dari livernya. Studi aldolase, alanine dan aspartic transaminase (aminoferases), lactate dehydrogenase dan fraksinya, cholinesterases, arginase, dan lainnya telah memperoleh nilai diagnostik.Indikator aktivitas aldolase dan transaminase digunakan untuk mendiagnosis penyakit hati inflamasi, keracunan, disertai dengan distrofi akut dari pola-pola tubuhnya, juga pola-polanya. fosfatase diproduksi di jaringan tulang. Indikator aktivitasnya digunakan dalam diagnosis ikterus obstruktif. Studi tentang spektrum enzim darah digunakan dalam diagnosis banding berbagai penyakit hati, terutama penyakit kuning.

Di bawah ini adalah informasi dasar tentang nilai diagnostik sampel yang paling terkenal, yang mencerminkan keadaan hati dalam kondisi normal dan patologis. Metode beberapa sampel atau prinsip penerapannya diberikan jika metode tersebut memerlukan deskripsi terperinci. Metode biokimia untuk studi fungsi hati dapat ditemukan dalam publikasi berikut: Pedoman untuk menggunakan metode penelitian klinis dan laboratorium standar.

Tes fungsional mencerminkan peran hati dalam metabolisme karbohidrat. Pada penyakit hati, kadar gula darah puasa pada kebanyakan pasien adalah normal - 4,44-6,11 mmol / l (80-110 mg%). Kadang-kadang, hiperglikemia terjadi, sering karena disfungsi sistem saraf vegetatif sympathoadrenal. Ketika sirosis hati, ketika sintesis glikogen terganggu dan cadangannya secara signifikan habis, hipoglikemia dapat terjadi.

Sampel untuk toleransi terhadap karbohidrat dengan beban glukosa dilakukan dengan cara yang sama seperti dalam mempelajari fungsi peralatan insular. Tes ini terutama digunakan dengan satu muatan glukosa (gula, fruktosa, levulosa).

Tes galaktosurik didasarkan pada kenyataan bahwa galaktosa lebih sulit daripada glukosa, berubah menjadi glikogen dan dalam kasus penyakit hati dalam jumlah yang lebih besar diekskresikan oleh ginjal. 40 g galaktosa diberikan untuk pengujian di dalam 200 ml air. Kemudian urine dikumpulkan dalam tiga bagian terpisah setiap 2 jam, selama 6 jam, 2-2,5 g galaktosa dilepaskan. Menurut A. I. Khazanov (1968), pada hepatitis kronis tesnya positif pada 4-12% pasien, dan dalam kasus sirosis hati pada 47,1% pasien.

Kurva galaktosemik lebih sensitif daripada sampel galaktosurik. Perut kosong pada orang sehat mengandung 0,1-0,9 mmol / L dalam darah, atau 2–17 mg% galaktosa. Setelah memuat 40 g galaktosa pada orang sehat, kenaikan tajam tingkat galaktosa menjadi 6,6 mmol / l, atau 120 mg%, diamati selama 30-60 menit, dan kemudian setelah 2-3 jam, indikator dikurangi menjadi 2,20 mmol / l, atau 40 mg%. Pada orang dengan penyakit hati, tingkat galaktosa lebih tinggi, itu berlangsung lebih lama dan tidak kembali normal setelah 3 jam.

Tes fungsional mencerminkan peran hati dalam metabolisme lipid. Hati terlibat dalam semua tahap metabolisme lemak. Untuk penyerapan normal lemak di usus, empedu diperlukan. Ini bertindak sebagai deterjen dan pengemulsi untuk lemak, memfasilitasi kerja lipase pankreas, meningkatkan penyerapan lemak di usus. Di hati, fosfolipid disintesis dengan adanya zat lipotropik yang bertindak sebagai donor kelompok lipid (metionin, kolin) atau faktor yang berkontribusi pada sintesis fosfolipid (vitamin B).12). Dengan kekurangan zat lipotropik di hati, lemak netral menumpuk, dan jumlah glikogen berkurang. Ketika penyakit hati di dalamnya mengurangi kandungan adenosin trifosfat, yang memberi energi untuk proses sintetis.

Tingkat kolesterol dalam darah adalah indikator terpenting dari sintesis lipid dalam hati. Kolesterol dicerna dengan makanan. Penyerapannya dalam usus terjadi dengan partisipasi asam empedu. Namun, kolesterol makanan bukan satu-satunya atau bahkan sumber utama kolesterol dalam tubuh. Secara konstan disintesis di hati dari asetilkoenzim A. Sintesis kolesterol melebihi asupannya. Kelebihan kolesterol yang disintesis dan diet diekskresikan dari tubuh melalui usus. Sebagian dari itu diubah di hati menjadi asam empedu, dan juga digunakan di organ lain (kelenjar adrenal, testis) sebagai bahan awal untuk sintesis hormon steroid. Sebagian kolesterol digabungkan dalam hati dengan asam lemak untuk membentuk ester kolesterol.

Kandungan kolesterol dalam darah ditentukan oleh metode Ilka. Kolesterol diekstraksi dengan kloroform. Di hadapan anhidrida asetat dan campuran asam asetat dan asam sulfat, itu memberikan warna hijau untuk larutan. Konsentrasi kolesterol ditentukan oleh metode kalorimetri pada FEC. Pada orang sehat, serum mengandung 3.0-6.5 mmol / l (116-150 mg%) kolesterol. Dalam hepatitis dan sirosis hati, ada pelanggaran kolesterol dalam darah: hiperkolesterolemia, tampaknya terkait dengan pelanggaran fungsi ekskresi hati, lebih jarang - hipokolesterolemia, terkait dengan penurunan sintesis di hati.

Ester kolesterol dalam hepatitis terbentuk dalam jumlah yang lebih kecil dari normal, dan rasio ester dan kolesterol berkurang menjadi 0,3-0,4 bukannya 0,5-0,7 sehat.

Di hati, sintesis lipoprotein juga sangat rendah dan kepadatannya tinggi. Silomikron dan sebagian kecil lipoprotein densitas sangat rendah terbentuk dalam sel epitel usus halus. Sintesis dan dekomposisi lipoprotein berlangsung dengan partisipasi lipoprotein lipase, yang berhubungan dengan heparin. Perlu dicatat bahwa dalam kasus sirosis hati, kadar heparin dalam darah menurun. Jadi, hati terlibat baik dalam pembentukan lipoprotein, dan dalam penghancurannya. Dengan penyakit hati ada dislipoproteinemia, terutama peningkatan pembentukan lipoprotein (hepatitis, bentuk awal sirosis hati). Ada peningkatan kadar beta-lipoprotein dalam darah.

Studi tentang lipoprotein dalam darah dilakukan terutama metode elektroforetik.

Metabolisme lipoprotein interstisial terganggu pada penyakit hati yang parah - koma hati, sirosis hati. Dalam hal ini, kandungan laktat (normanya adalah 0,78-1,2 mmol / l (7-14 mg%) dan asam piruvat (normanya adalah 57–136 μmol / l (0,5-1,2 mg%)) meningkat dalam darah.

Ketika koma hepatik terdeteksi, kadar aseton dalam darah meningkat.

Tes fungsional mencerminkan peran hati dalam metabolisme protein. Hati mentransaminasi asam amino, mengoksidasi mereka menjadi asam piruvat dalam siklus asam trikarboksilat (Krebs), dan sintesis protein. Semua albumin, 75-90% alpha globulin, 50% beta globulin disintesis di hati. Hati yang sehat dapat menghasilkan 13-18 g albumin setiap hari. Prothrombin, proconvertin, proaccelerin hanya disintesis di hati. Sintesis protein terjadi dengan partisipasi energi. Salah satu alasan untuk penurunan fungsi sintetis hati adalah penurunan kandungan senyawa mikroergik di dalamnya. Pada penyakit hati yang parah, jumlah total protein whey dapat turun menjadi. 40 g / l bukannya 80 g / l. Isi albumin berkurang secara signifikan (hingga 20 g / l bukannya 40 g / l). Dalam kondisi patologis, hati mensintesis globulin dengan sifat yang tidak biasa (paraprotein). Diketahui bahwa protein semacam itu lebih buruk diwarnai dengan pereaksi biuret, kurang stabil dalam larutan salin (misalnya, kalsium klorida), di hadapan timol. Dengan sifat ini dibangun sampel diagnostik sedimen.

Total protein serum ditentukan dengan metode polarimetrik atau dalam reaksi dengan pereaksi biuret. Norma - 60-80 g / l. Fraksi protein dibuat oleh elektroforesis di atas kertas atau dalam gel akrilamida. Kandungan albumin dalam serum darah, menurut V. E. Predtechensky, 56.5-66.8%, alfarglobulin - 3.0-5.5, alfagglobulin - 6.9-10.5, beta-globulin - 7.3 —12.5 dan gamma globulin - 12.8–19.0%. Pada penyakit hati ada penurunan kandungan albumin dalam darah, peningkatan kandungan gamma globulin. Dalam proses inflamasi akut (hepatitis), tingkat alfa-globulin meningkat 1,5-2 kali. Gamma globulin diproduksi oleh limfosit dan sel-sel sistem retikuloendotelial. Pada hepatitis kronis yang terjadi dengan proses autoimun yang jelas, kandungan gamma globulin dalam darah meningkat secara signifikan (hingga 30%). A. I. Khazanov mencatat bahwa peningkatan signifikan dalam beta atau gamma globulin diamati pada pasien dengan sirosis hati yang dekensirovanny dan sering menunjukkan prognosis penyakit yang buruk. Ini mencerminkan reorganisasi sintesis protein di hati dan peningkatan pembentukan paraprotein.

Sampel sedimen didasarkan pada perubahan stabilitas koloid serum darah ketika berinteraksi dengan berbagai elektrolit. Stabilitas sistem darah koloid terganggu karena disproteinemia dan paraproteinemia.

Uji sublimat (reaksi sedimen-sublimat), reaksi Takat-Ara, terdiri atas fakta bahwa selama interaksi antara sublimat dan natrium karbonat dengan protein serum darah mengendap, membentuk serpihan. Saat ini, reaksi tersebut digunakan dalam modifikasi Grinstedt (1948). Ke 0,5 ml serum non-hemolisis yang diencerkan dengan 1 ml larutan garam fisiologis ditambahkan larutan 0,1% dari tetesan sublimat sampai kekeruhan yang muncul, ketika membaca teks koran menjadi tidak mungkin melalui lapisan cairan vertikal. Angka ini 1,6-2,2 ml larutan 0,1% merkuri klorida. Tes ini positif pada kerusakan hati parenkim, terutama pada sirosis hati, hepatitis akut dan kronis, silikosis, dan silikotuberkulosis.

Tes Veltmann (uji koagulasi, reaksi termokagulasi) diusulkan pada tahun 1930 untuk membedakan proses fibro-produktif dan nekrotik di hati. Serum segar tanpa jejak hemolisis dituangkan ke dalam 11 tabung 0,1 ml bernomor. Kemudian, 5 ml larutan kalsium klorida ditambahkan dalam konsentrasi yang menurun: 0,1, 0,09, 0,08, dll., Menjadi 0,01%, isi tabung dikocok perlahan dan dimasukkan ke dalam bak air mendidih selama 15 menit, setelah itu hasilnya ditandai. Sampel dianggap positif jika terjadi pengendapan protein. Jumlah tabung dengan hasil positif disebut band koagulasi. Biasanya, itu adalah 6-7 tabung. Penurunannya (bergeser ke kiri) diamati dalam proses inflamasi di paru-paru, tumor, infark miokard; memperpanjang (bergeser ke kanan) - dalam proses inflamasi di hati, distrofi hati akut, sirosis, serta penyakit hemolitik, nefrosis, tuberkulosis paru berserat. Saat ini, sampel Veltmann telah dimodifikasi sebagai berikut: 4,9 ml air ditambahkan ke 0,1 ml serum darah, kemudian 0,1 ml larutan 0,5% kalsium klorida ditambahkan. Campuran dipanaskan sampai mendidih, tanpa adanya endapan, 0,1 ml larutan kalsium klorida lainnya dituangkan. Prosedur ini diulang sampai protein murine muncul di tabung reaksi. Hasil dievaluasi pada jumlah total kalsium klorida yang dihabiskan untuk reaksi. Biasanya, 0,4-0,5 ml kalsium klorida diperlukan.

Uji timol (uji kekeruhan timol) dalam modifikasi Huerg dan Popper (uji timol-toner) didasarkan pada pembentukan kekeruhan serum uji dengan adanya larutan jenuh timol dalam buffer veronal. Endapan terbentuk sebagai akibat dari munculnya kompleks globulin-timolophosphatide dengan penurunan isi albumin dalam darah, peningkatan beta dan gamma globulin. Tingkat kekeruhan tergantung pada suhu sekitar dan pH. Reaksi dievaluasi dengan metode photocalorimetric pada 660 nm terhadap larutan thymol-meronal. Perhitungan dilakukan sesuai dengan kurva kalibrasi yang disusun dari suspensi barium sulfat. Biasanya, kekeruhan serum adalah 0–5 unit. M (Maklagana). Peningkatan kekeruhan (tes positif) diamati dalam kondisi kerusakan hati pada epidemi hepatitis (tes positif sebelum pengembangan penyakit kuning), pada sirosis hati, setelah hepatitis akut, dan sebagainya.

Ketika terjadi pelanggaran hati yang parah, proses deaminasi asam amino terganggu, yang menyebabkan peningkatan kandungan mereka dalam darah dan urin. Jika pada orang sehat kandungan nitrogen amino dalam serum adalah 50-80 mg / l, maka dengan proses distrofik yang parah di hati dapat meningkat menjadi 300 mg / l (300 mg / l sesuai dengan 30 mg% dari rasio transfer nitrogen amino, dinyatakan dalam mg%, dalam mmol / l adalah 0,7139). A. I. Khazanov mencatat bahwa dalam hepatitis virus akut, kadar glutathione, asam glutamat, metionin, fenilalanin, serin, dan treonin dalam serum meningkat. Dengan hepatitis kronis mengungkapkan perubahan yang sama dalam kandungan asam amino dalam darah, tetapi diekspresikan pada tingkat yang lebih rendah.

Pada siang hari, 100-400 mg (rata-rata 200 mg) asam amino diekskresikan dalam urin orang sehat. Aminoazot adalah di antara mereka 1-2% dari total nitrogen urin, dan pada penyakit hati mencapai 5-10%. Pada distrofi hati akut, peningkatan ekskresi leusin dan tirosin dalam urin diamati. Biasanya, tirosin dilepaskan dalam jumlah 10-20 mg / l, dengan hepatitis virus akut - hingga 1000 mg / l (2 g per hari). Di dalam urin dapat ditemukan kristal leusin dan tirosin.

Nitrogen dan urea residual dalam serum darah pada penyakit hati meningkat jika gagal hepatorenal akut atau kerusakan hati akut yang parah (distrofi akut pada hepatitis akut, eksaserbasi hepatitis kronis, sirosis hati, kanker hati, setelah operasi saluran empedu dan lainnya). Pada orang sehat, sisa nitrogen dalam darah adalah 14,3–28,6 mmol / l (0,20-0,40 g / l), urea - 2,5–3,3 mmol / l (0,15-0, 20 g / l). Dengan penyakit hati, kandungan nitrogen residual dalam darah naik sedikit - hingga 35,4-64,3 mmol / l (0,50 -; 0,90 g / l). Peningkatan levelnya di atas 71,4 mmol / l (1,0 g / l) diamati dengan kerusakan ginjal dan secara signifikan memperburuk prognosis penyakit.

Nitrogen sisa dalam darah ditentukan dengan beberapa metode - setelah mineralisasi darah melalui reaksi langsung dengan pereaksi Nessler atau metode hipobromit Rappoport-Eichgorn. Urea dalam darah juga ditentukan oleh beberapa metode: metode ekspres didasarkan pada penggunaan kertas reaktif "Ureatest", metode urease dengan fenol hipoklorida digunakan, metode urease dengan reagen Nessler, dll.

Hati dan hemostasis saling terkait erat. Di hati, protein yang terlibat dalam pembekuan darah disintesis. Yang paling penting dari mereka adalah protrombin dan fibrinogen, dan pelanggaran sintesis protein ini lebih umum. Perlu dicatat bahwa pada penyakit radang akut paru-paru, sendi, hati, kandungan fibrinogen dalam darah dapat meningkat secara signifikan. Penurunan kandungan protrombin dalam darah dicatat pada pasien dengan virus akut, toksik, hepatitis kronis, sirosis hati. Tanda-tanda klinis paling penting dari defisiensi protrombin adalah perdarahan spontan di bawah kulit, di bawah selaput lendir, pendarahan pada rongga mulut, lambung.

Sintesis protein yang memastikan proses pembekuan darah terjadi dengan partisipasi vitamin K. Vitamin K larut dalam lemak dan masuk ke dalam tubuh bersama dengan lemak. Pada penyakit hati karena gangguan pembentukan empedu dan ekskresi empedu dalam tubuh hipovitaminosis K terjadi.

Gangguan sintesis faktor pembekuan darah dapat dikaitkan dengan penghambatan fungsi pembentuk protein hati. Dalam hal ini, hipoprothrombinemia terjadi dengan pemberian vitamin K dalam tubuh yang cukup. Di klinik untuk tujuan diagnostik, jumlah protrombin dalam darah diperiksa sebelum dan setelah pemuatan dengan Vikasol.

Sejumlah besar heparin disintesis di hati dan paru-paru.

Pertanyaan tentang kemungkinan diatesis hemoragik, terkait dengan peningkatan produksi faktor antikoagulan sistem darah pada penyakit hati, tidak dipahami dengan baik.

Aktivitas faktor kompleks protrombin (indeks protrombi-baru) dipelajari dengan metode Cepat (norma 95-105%), konsentrasi fibrinogen dalam darah dipelajari dengan metode Rutberg (normanya adalah 200-300 mg dalam 100 ml plasma). Menurut metode gravimetri terpadu yang direkomendasikan oleh V. V. Menshikov (1987), tingkat fibrinogen dalam darah adalah 200-400 mg%, atau 2-4 g / l. Metode untuk menentukan faktor pembekuan darah dijelaskan secara rinci dalam Buku Pegangan metode penelitian klinis dan laboratorium.

Tes fungsional mencerminkan peran hati dalam metabolisme pigmen. Ini terutama penentuan bilirubin dalam serum, studi tentang urobilin, stercobilin, pigmen empedu dalam urin. Kami telah menyebutkan studi tentang kandungan bilirubin dalam empedu. Indikator-indikator ini secara langsung atau tidak langsung mencerminkan proses konversi bilirubin di hati. Hati memainkan peran penting dalam metabolisme pigmen yang mengandung zat besi - hemoglobin, mioglobin, sitokrom, dll.

Tahap awal pemecahan hemoglobin adalah pemecahan jembatan metil dan pembentukan verdohemoglobin (verdoglobin), yang juga mengandung zat besi dan globin. Di masa depan, Verdoglobin kehilangan zat besi dan globin, ia memulai proses membuka cincin porfirin dan pembentukan biliverdin, dengan pemulihan di mana pigmen empedu utama terbentuk - bilirubin (tidak langsung, bilirubin tidak terikat). Bilirubin semacam itu dikombinasikan dengan Ehrlich diazoreaktif setelah perawatan dengan alkohol atau reagen kafein, yaitu, ia memberikan reaksi warna tidak langsung. Ini aktif diserap oleh hepatosit dan, dengan bantuan enzim, glukuronil transferase dalam aparatus Golgi terhubung dengan satu (monoglucuronide) atau dua (diglucuronide) molekul asam glukuronat. Lima belas persen bilirubin di hati melalui sulfat transferase dengan asam sulfat dan membentuk fosfoadenosin fosfosulfat. Bilirubin seperti itu bereaksi dengan cepat dengan diazoreaktif dan memberikan reaksi langsung.

Pada penyakit hati, peningkatan kadar bilirubin dalam darah terutama ditentukan oleh fakta bahwa hepatosit mensekresikannya ke dalam empedu dan kapiler darah. Bilirubin terakumulasi dalam darah, memberikan reaksi langsung dengan diazoreaktif (langsung, atau terikat, bilirubin). Jumlah yang lebih kecil juga mengandung bilirubin dalam kasus kerusakan hati yang parah, yang memberikan reaksi tidak langsung, yang disebabkan oleh penurunan aktivitas menangkap bilirubin tak terkonjugasi dari darah oleh sel hati dan tampaknya disebabkan oleh pelanggaran mekanisme penangkapan bilirubin dan penyerapan dalam cangkang hepatosit.

Ketika penyumbatan saluran empedu atau hati oleh batu, tumor, lendir kental, penyempitan lumen oleh bekas luka (misalnya, setelah operasi pada saluran empedu) di saluran empedu hati meningkatkan tekanan empedu. Ini menembus darah dan kapiler limfatik. Darah terakumulasi terutama bilirubin, yang memberikan reaksi langsung dengan penyakit kuning diazoreaktif (subhepatik, atau mekanis).

Hemolisis eritrosit disertai dengan pelepasan sejumlah besar hemoglobin, sebagian diekskresikan oleh ginjal, sebagian ditangkap oleh sel-sel sistem retikuloendotelial dan diubah menjadi verdoglobin dan bilirubin. Bagian dari bilirubin tersebut terkonjugasi dengan asam glukoronat di hati dan diekskresikan dalam jumlah yang meningkat dengan empedu ke usus. Namun, sejumlah besar bilirubin, yang memberikan reaksi tidak langsung, dipertahankan dalam darah. Ikterus seperti itu disebut hemolitik, atau suprahepatik.

Dengan penyakit kuning obstruktif, sangat sedikit empedu (bilirubin) memasuki usus atau tidak masuk sama sekali. Warna tinja tergantung pada produk konversi bilirubin - stercobilin, yang terbentuk di usus dari stercobilinogen - produk perantara konversi bilirubin. Jika pigmen empedu tidak memasuki usus, tinja menjadi terang, putih, acholichny. Reaksi terhadap stercobilin dan urobilin dalam kasus seperti itu adalah negatif.

Pada ikterus parenkim, pigmen empedu masuk ke usus dalam jumlah yang lebih kecil dari biasanya, karena kadar bilirubin dalam empedu berkurang dan jumlah empedu itu sendiri kecil. Namun, bilirubin yang memasuki usus sudah cukup untuk mewarnai tinja dalam warna coklat muda. Bagian dari stercobilin diserap dan diekskresikan oleh ginjal, pertama dalam bentuk urobilinogen, dan kemudian urobilin. Ketika bilirubin (langsung) terkonjugasi berlebihan dalam darah, sebagian masuk ke dalam urin, di mana ia dapat dideteksi oleh Rosin (dengan larutan alkohol yodium) atau sampel dengan presipitasi bilirubin oleh garam barium.

Dengan penyakit kuning hemolitik dalam empedu, tingkat bilirubin meningkat. Sterobilin dan urobilin juga terbentuk dalam tinja berlebih dan urin berwarna pekat. Dan dalam darah, kandungan bilirubin yang tidak terikat meningkat, itu larut dalam air, tidak menembus melalui penghalang ginjal ke dalam jaringan. Karena itu, tidak ada bilirubin dalam urin.

Bilirubin serum ditentukan dengan metode Endrašík, Cleghorn dan Grof. Metode ini didasarkan pada kombinasi asam diazophenyl sulfonic (dibentuk oleh interaksi asam sulfanilat dengan natrium nitrit) dengan serum bilirubin, menghasilkan pewarnaan pink-violet. Intensitasnya dinilai pada konsentrasi bilirubin, masuk ke dalam reaksi langsung. Ketika pereaksi kafein ditambahkan ke serum, bilirubin (tidak langsung) tak terkonjugasi masuk ke keadaan terdisosiasi terlarut dan memberikan larutan pewarnaan merah muda-ungu ke campuran diazoreaktif. Teknik ini dijelaskan dalam buku referensi V. G. Kolb, V. S. Kamyshnikov; Buku Pegangan ed. A. A. Pokrovsky; instruksi metodis ed. V. V. Menshikov dan lainnya.

Nilai enzim tertentu dalam diagnosis penyakit hati. Enzim hati, seperti organ-organ lain, dibagi menjadi organ-spesifik dan non-spesifik. Untuk hati, enzim organ spesifik adalah ornithine carbamyl transferase, glutamate dehydrogenase, phosphofructaldolase, histidase, sorbitol dehydrogenase. Selain itu, isoenzim laktat dehidrogenase kelima dianggap spesifik.

Sel hati kaya akan enzim. Kerusakan hepatosit menyebabkan pelepasan sejumlah besar enzim intraseluler dan akumulasi mereka dalam darah. Dalam hal ini, transaminase, aldolase, dan enzim yang ditemukan dalam sel-sel organ dan jaringan lain telah memperoleh nilai diagnostik. Mengevaluasi aktivitas mereka dalam darah harus dibandingkan dengan tanda-tanda klinis penyakit.

Aldolase - nama kelompok enzim yang terlibat dalam mekanisme pemisahan karbohidrat secara aerob. Serum aldolase mengkatalisasi pemisahan terbalik dari fruktosa-1,6-difosfat menjadi dua fosfo-triosa - fosfogliseraldehida dan dioksi aseton monofosfat. Aktivitas aldolase dalam serum meningkat pada hepatitis epidemi akut dan, pada tingkat lebih rendah, pada hepatitis toksik akut. Pada hepatitis virus akut, peningkatan 5-20 kali lipat dalam aktivitas fruktosa difosfat aldolase diamati pada 90% pasien. Peningkatannya terjadi 3-15 hari sebelum munculnya tanda-tanda klinis penyakit lainnya. Setelah 5 hari dari awal periode ikterus, aktivitas aldolase berkurang. Peningkatan aktivitas aldolase juga dicatat dalam kasus anicteric hepatitis akut. Pada pasien dengan proses inflamasi kronis di hati, aktivitas aldolase sedikit meningkat, dan dalam jumlah kecil.

Studi tentang aktivitas aldolase dalam serum dilakukan sesuai dengan metode V.I. Tovarnitsky, E.N. Voluyskaya. Pada orang sehat, aktivitas enzim ini tidak melebihi 3-8 unit.

Aminotransferases (transaminase) sering digunakan untuk mendiagnosis penyakit hati inflamasi. Aminotransferase dalam tubuh manusia melakukan proses transaminasi (transfer terbalik gugus amino asam amino menjadi asam keto). Studi tentang aktivitas aspartate aminotransferase (AST) dan alanine aminotransferase (ALT) adalah yang paling penting. Enzim ini didistribusikan secara luas di berbagai organ dan jaringan - hati, miokardium, otot rangka, ginjal, dll. Peningkatan aktivitas aminotransferases memperoleh nilai diagnostik dibandingkan dengan tanda-tanda klinis penyakit.

Penelitian ini dilakukan sesuai dengan metode Reitman dan Fraenkel. Norma untuk AST adalah 0,1-0,45 mmol / (h • l) (8–40 unit), untuk AlT adalah 0,1-0,68 mmol / (h • l) (5-30 unit). Saat ini, jumlah substrat dalam mol dikatalisis oleh 1 l cairan uji per 1 jam inkubasi pada 37 ° C (mmol / (h • l)) diambil sebagai unit aktivitas enzim. Unit aktivitas enzim yang diambil sebelumnya dikonversi menjadi yang ditunjukkan menggunakan rumus berikut: untuk AsT - D / 88, untuk AlT - D2 / 88, di mana D adalah indikator aktivitas enzim, dinyatakan dalam dimensi lama (unit), 88 adalah faktor konversi, secara numerik sama dengan berat molekul asam piruvat.

Pada hepatitis epidemi, aktivitas aminotransferase meningkat dengan konsistensi yang tinggi dan pada tahap awal, bahkan sebelum munculnya penyakit kuning. Dengan hepatitis toksik dan eksaserbasi, aktivitas kronis aminotransferase meningkat 3-5 kali lipat. Perubahan sirosis hati tidak begitu teratur.

Lactate dehydrogenase (LDH) adalah enzim glikolitik yang secara reversal mengkatalisasi oksidasi 1-laktat menjadi asam piruvat. Untuk LDH, nikotinamid dinukleotida diperlukan sebagai akseptor antara hidrogen. Lima isoenzim LDH terdeteksi dalam serum. LDH, ditemukan dalam miokardium, LDH5 - di hati. Fraksi kelima dari enzim dihambat oleh urea, dan sifat enzim ini memudahkan penentuannya.

LDH serum ditentukan oleh metode Sevel dan Tovarek. Nilai normal total aktivitas LDH serum adalah 0,8-4,0 mmol asam piruvat per liter serum per 1 jam inkubasi pada 37 ° C. Urea-LDH membentuk 54-75% dari total LDH.

Ini juga digunakan di laboratorium klinis untuk penentuan LDH dengan metode elektroforesis serum darah dalam gel poliakrilamid. Metode penentuan LDH dapat ditemukan dalam buku referensi V. G. Kolb, V. S. Kamyshnikov. Pada virus hepatitis, aktivitas LDH4 dan LDH5 meningkat dalam 10 hari pertama pada semua pasien, tingkat peningkatannya tergantung pada tingkat keparahan penyakit.

Cholinesterase terkandung dalam eritrosit (asetilkolinesterase) dan serum (asil hidrolase asilkolin). Kedua enzim memecah ester kolin menjadi kolin dan asam yang sesuai dan dibedakan berdasarkan spesifisitasnya. Acetylcholinesterase hanya menghidrolisis asetilkolin (sebelumnya disebut true cholinesterase). Serum cholinesterase dapat terurai bersama dengan asetilkolin dan butyrylcholine (dan 2 kali lebih cepat dari asetilkolin). Oleh karena itu, ini juga dikenal sebagai butyrylcholinesterase, atau serum cholinesterase palsu. Disintesis di hati, aktivitasnya digunakan sebagai tanda kemampuan fungsional hati.

Aktivitas serum cholinesterase ditentukan oleh derajat hidrolisis asetilkolin klorida menjadi asam asetat dan kolin. Jumlah asam asetat yang dilepaskan ditentukan oleh perubahan warna larutan buffer dengan adanya indikator keasaman pada FEC. Standar adalah 160–340 mmol / (h • l). Dalam kasus penyakit hati (hepatitis, sirosis), sintesis serum cholinesterase menurun. Pada pasien dengan penyakit kuning obstruktif, penurunan aktivitas cholinesterase hanya terjadi ketika tanda-tanda kerusakan hati yang parah muncul. Penurunan aktivitasnya diamati pada hipoproteinemia, cachexia, keracunan dengan racun organofosfat, pelemas otot. Dalam beberapa kasus (hipertensi, fibroid uterus, ulkus peptikum, dll.) Peningkatan aktivitas cholinesterase diamati.

Gamma-glutamyltranspeptidase (G-GTP) membelah substrat kromogenik gamma-glutamyl-4-nitronylide dan memfasilitasi transfer residu gamma-glutamyl ke akseptor dipeptida glisilglisin. 4-nitroanilin yang dibebaskan ditentukan dengan metode foto kalorimetri pada 410 nm setelah menghentikan reaksi enzimatik dengan asam asetat.

GGTG ditemukan di semua organ dan jaringan manusia. Aktivitas enzim ini di ginjal, hati, pankreas, limpa, otak adalah yang tertinggi (sekitar 220 mmol / jam • l), di organ lain (jantung, otot rangka, paru-paru, usus) - jauh lebih rendah (0,1 —18 mmol / (h • l). Aktivitas G-GTP tertinggi diamati dalam empedu dan urin. Aktivitas serumnya 4-6 kali lebih rendah daripada dalam urin. Dalam sel darah merah enzim ini tidak ada. Aktivitas G-GTP dalam serum pria sehat adalah 0,9–6,3 mmol / (h • l), untuk wanita - 0,6–3,96 mmol / (h • l). Aktivitas G-GTP meningkat pada sirosis hati pada 90% pasien dengan PEMERINTAHAN, pada hepatitis kronis - 75% di cholangiohepatitis kronis -. Hampir semua pasien enzim yang diaktifkan etanol Penentuan T-GTP adalah tes sensitif dalam diagnosis penyakit hati alkohol beracun..

Alkaline phosphatase adalah salah satu hidrolase yang memfermentasi senyawa organik, ester fosfat dengan menghilangkan residunya. Ini aktif dalam media dengan pH 8,6-10,1 dan sangat aktif di bawah pengaruh ion magnesium. Alkaline phosphatase ditemukan di semua jaringan dan organ manusia. Terutama banyak di jaringan tulang, parenkim hati, ginjal, kelenjar prostat, kelenjar lain, mukosa usus. Kandungan alkali fosfatase pada anak-anak 1,5-3 kali lebih tinggi daripada orang dewasa.

Dalam gel agar, elektroforesis digunakan untuk mengisolasi lima isoenzim alkali fosfatase. Yang pertama dianggap spesifik untuk hati, yang kedua untuk jaringan tulang, yang kelima untuk saluran empedu. Enzim ini dikeluarkan dari hati dengan empedu.

Aktivitas alkali fosfatase dideteksi menggunakan natrium beta-gliserofosfat, yang mengalami hidrolisis dengan pelepasan fosfor anorganik. Yang terakhir adalah kriteria aktivitas enzim. Enzim ditentukan dalam serum sesuai dengan metode Bodansky. Biasanya, aktivitas alkali fosfatase adalah 0,5-1,3 mmol fosfor anorganik per 1 liter serum selama 1 jam inkubasi pada 37 ° C.

Peningkatan aktivitas alkali fosfatase terjadi terutama di dua negara: penyakit tulang dengan proliferasi osteoblas dan penyakit yang melibatkan kolestasis. Peningkatan aktivitas alkali fosfatase diamati pada penyakit tulang berikut: hiperparatiroidisme (penyakit Recklinghausen), sarkoma tulang, deformasi osteosis atau osteodistrofi berserat (penyakit Paget) dan bentuk-bentuk osteoporosis lainnya. batu, tumor, kelenjar getah bening pada kanker saluran empedu, lambung, pada orang dengan penyakit radang hati dan saluran empedu, pankreas, limfogranulomatosis, dll. Dia meninggal peningkatan yang stabil dalam aktivitas alkali fosfatase diamati pada tumor hati, hepatitis kronis dan sirosis, hepatitis akut, penyakit kuning keduanya tanpa dan dengan penyakit kuning. Aktivitas enzim meningkat jika komponen mekanis penyakit kuning bergabung (kolangitis, kompresi duktus hepatika umum oleh kelenjar getah bening regional, kelenjar hati yang beregenerasi di area gerbangnya). Dengan demikian, peningkatan aktivitas alkali fosfatase dalam darah pasien dengan penyakit kuning menunjukkan sifat mekanisnya.

Tes fungsi hati

Dengan kekalahan hati tidak semua fungsinya terganggu, tidak pada saat yang sama dan tidak sama. Selain itu, hati memiliki kemampuan cadangan yang signifikan: cukup untuk menghemat 20% dari parenkim hati yang berfungsi untuk mempertahankan aktivitas tubuh. Kapasitas regeneratif hati sama besarnya. Oleh karena itu, penurunan fungsi hati tertentu mungkin tidak mempengaruhi kondisi pasien, karena hati bahkan dalam kondisi ini menyediakan tingkat proses vital yang diperlukan.

Inti dari sebagian besar tes fungsional (tidak hanya hati, tetapi juga organ-organ lain) adalah bahwa organ uji dibuat sangat menuntut sehingga organ yang sakit tidak dapat mengatasinya (metode beban). Di antara sampel yang digunakan fungsi hati diperiksa, beberapa mencerminkan aktivitas spesifik organ ini, misalnya, pigmen, penetral, fungsi pembentuk protein; sampel lain hanya sebagian mengungkap fungsi hati, karena keikutsertaannya dalam metabolisme jenis ini tidak diisolasi, tetapi dihubungkan dengan peran organ lain. Ini termasuk, misalnya, sampel yang memeriksa metabolisme karbohidrat, air, lemak.

Fig. 117. Skema isolasi bilirubin dalam norma (/) dan dalam berbagai jenis penyakit kuning: hemolitik (2), parenkim (J) dan mekanis <4).

Studi tentang metabolisme pigmen Refleksi metabolisme pigmen di hati adalah kandungan dalam darah (serta dalam feses dan urin) bilirubin dan produk-produk pemulihannya. Identifikasi kelainan metabolisme pigmen memberikan gambaran tentang keadaan fungsional hepatosit, dan juga membantu membedakan antara berbagai jenis penyakit kuning.

Pembentukan bilirubin terjadi pada sel retikuloendotelial sumsum tulang, kelenjar getah bening, tetapi terutama limpa, serta di sel retikuloendotelial stellata hati (Gbr. 117). Bilirubin terbentuk dari hemoglobin, yang dilepaskan selama kerusakan fisiologis sel darah merah; pada saat yang sama, hemoglobin terurai menjadi tubuh protein globin dan zat besi yang mengandung heme. Dalam sel-sel sistem retikuloendotelial, bilirubin bebas terbentuk dari heme yang dilepaskan, yang bersirkulasi dalam darah dalam hubungan yang tidak stabil dengan protein albumin. Kandungan bilirubin gratis dalam darah adalah 8,55-20,52 μmol / l (0,5-1,2 mg%). Sebagian besar masuk ke hati, di mana dilepaskan dari hubungannya dengan albumin dan, dengan partisipasi enzim hati, bergabung dengan asam glukuronat untuk membentuk senyawa yang larut dalam air, bily-rubinglucuronide (mono dan diglucuronide, atau bilirubin terikat), yang diekskresikan ke dalam saluran bilier.

Akibatnya, hati terlibat dalam pertukaran bilirubin, melakukan fungsi-fungsi berikut: 1) pembentukan bilirubin dalam sel reticuloendothelial stellate; 2) menjebak bilirubin gratis dari darah; 3) pembentukan senyawa bilirubin dengan asam glukuronat; 4) bilirubing sekresi glukuronida menjadi empedu (bilirubin terikat).

Pada awal abad XX. Van den Berg melihat interaksi yang berbeda dari serum pasien dengan penyakit kuning dengan sulfodiazoreaktivom dengan penyakit kuning dari berbagai etiologi. Sementara serum pasien dengan penyakit kuning obstruktif segera menjadi merah setelah penambahan agen diazoreaktif, perubahan dalam warna serum pasien dengan penyakit kuning hemolitik terjadi hanya setelah penambahan alkohol. Reaksi dalam kasus pertama disebut langsung, yang kedua - tidak langsung. Ternyata reaksi tidak langsung diberikan oleh bilirubin bebas, dan reaksi langsung dengan bilirubing glukuronid (terkonjugasi, yaitu bilirubin terikat). Bergantung pada penambahan satu atau dua molekul asam glukuronat ke dalam molekul bilirubin, mono atau diglucuronide bilirubin terbentuk.

Dalam darah orang sehat hanya pigmen gratis. Pada penyakit yang disertai dengan pelanggaran atau distorsi dari pengeluaran normal bilirubin terkait empedu, ia memasuki aliran darah, dan kemudian kedua pigmen bersirkulasi di dalamnya (mereka dapat ditentukan secara terpisah).

Sampel kualitatif Van den Berg memberikan informasi indikatif: jika ternyata tidak langsung, kita dapat mengasumsikan bahwa hanya ada bilirubin gratis dalam darah; jika ternyata langsung, maka tidak diketahui dalam perbandingan apa kedua pigmen itu - suatu reaksi langsung positif menutupi keberadaan sejumlah bilirubin bebas. Saat ini, mereka terutama menggunakan penentuan kuantitatif terpisah dari fraksi bilirubin. Dalam sebagian besar penelitian yang dilakukan untuk tujuan ini, pereaksi diazo yang sama digunakan untuk sampel kualitatif (pereaksi diazo I: 5 g asam sulfanilat dan 15 ml asam klorida kuat dilarutkan dalam air suling dan volumenya disesuaikan dengan 1 l dengan air suling; diazoreact II: 0,5% larutan natrium nitrit; campuran diazo: 10 ml diazoreaktif I + 0,25 ml diazoreaktif II).

Tes kualitatif: untuk 0,5 ml serum menuangkan 0,25 ml campuran diazo. Dalam kasus serum memerah dalam waktu kurang dari 1 menit, reaksi dianggap cepat langsung dan menunjukkan adanya bilirubin terikat serum. Jika kemerahan terjadi secara perlahan (dalam 1–10 menit), yang terjadi ketika sejumlah kecil bilirubin terikat melekat pada bebas, reaksi dianggap tertunda langsung. Jika tidak ada kemerahan selama lebih dari 10 menit, reaksi langsung dianggap negatif. Jika Anda ingin memastikan bahwa warna kuning dari serum seperti itu tergantung pada bilirubin, gandakan jumlah alkohol yang ditambahkan ke dalamnya, disaring dan campuran diazo ditambahkan ke filtrat, sebagai hasilnya cairan berubah menjadi merah muda (reaksi tidak langsung). Ada banyak metode untuk penentuan kuantitatif fraksi bilirubin. Beberapa dari mereka didasarkan pada kenyataan bahwa bilirubin bebas dipengaruhi oleh zat-zat seperti kafein, yang digunakan dalam metode Endrashik yang paling umum, metil alkohol, dll., Bertindak seperti katalis, akselerator, memperoleh kemampuan untuk bereaksi dengan diazoreaktan. Pada bagian pertama serum yang diobati dengan akselerator, adalah mungkin untuk menentukan kandungan total dari kedua fraksi. Di bagian lain, tanpa menambahkan akselerator, hanya pigmen terikat yang ditentukan. Mengurangi fraksi terikatnya dari jumlah total bilirubin, mereka akan mengenali fraksi bebas. Metode lain untuk penentuan fraksi bilirubin yang terpisah (kimia, kromatografi) lebih kompleks.

Bilirubin bebas, tidak larut dalam air, tidak diekskresikan oleh ginjal; setelah mengikat dengan asam glukuronat, menjadi larut dalam air ketika terakumulasi dalam darah - dengan ikterus subhepatik dan hati, terdeteksi dalam urin. Pada saluran empedu, hanya bilirubin yang terikat (bilirubinglucuronide) yang dilepaskan. Dalam saluran empedu besar dan kantung empedu (terutama selama proses inflamasi di dalamnya) dan lebih jauh di usus, sebagian kecil bilirubin dikembalikan ke urobilinogen, yang diserap di usus kecil bagian atas dan memasuki hati dengan darah dari vena portal. Hati yang sehat benar-benar menangkapnya dan teroksidasi, tetapi organ yang sakit tidak dapat melakukan fungsi ini, urobilinogen masuk ke dalam darah dan diekskresikan dalam urin sebagai urobilin. Urobilinuria adalah tanda gagal hati fungsional yang sangat halus dan awal. Selebihnya, sebagian besar bilirubin di usus dikembalikan hingga stercobilinogen. Bagian utama diekskresikan dalam feses, berubah menjadi dubur dan keluar darinya (dalam cahaya dan udara) menjadi stercobilin, memberikan feses warna normal. Sebagian kecil sterkobilinogen, diserap di bagian bawah usus besar, melalui pembuluh darah hemoroid, melewati hati, memasuki sirkulasi umum dan diekskresikan oleh ginjal. Urin normal selalu mengandung jejak stercobilinogen, yang di bawah aksi cahaya dan udara berubah menjadi sterkobilin.

Sebagian besar reaksi yang mendeteksi produk reduksi bilirubin dalam urin memberikan hasil yang serupa dengan urobilin dan stercobilin, walaupun kedua zat ini berbeda dalam struktur kimia dan sifat fisiknya. Metode untuk pemisahan mereka relatif kompleks. Karena itu, dalam praktik laboratorium, mereka dibuka bersama dan ditunjuk sebagai urobilinoid (badan urobilin).

Kandungan tubuh urobilin dalam urin meningkat tidak hanya ketika fungsi hati tidak mencukupi, tetapi juga ketika hemolisis meningkat. Dalam kasus ini, karena pelepasan sejumlah besar hemoglobin, lebih banyak bilirubin terbentuk dan disekresikan ke usus. Peningkatan produksi sterko-bilin menyebabkan peningkatan ekskresi dalam urin. Dalam kasus ikterus obstruktif, ketika empedu tidak memasuki usus sama sekali, tidak ada sterkobilin dalam tinja, tidak ada tubuh urobilin dalam urin. Ketika ikterus hepatoseluler menurunkan ekskresi bilirubin dalam empedu dan jumlah stercobilin dalam tinja berkurang, dan jumlah badan urobilinik dalam urin meningkat. Rasio mereka, sebesar 10: 1-20: 1, berkurang secara signifikan, mencapai 1: 1 untuk lesi hati yang parah.Dalam penyakit kuning hemolitik, peningkatan stercobilin dalam feses secara signifikan melebihi peningkatan ekskresi urin dari tubuh urobilin. Rasio mereka meningkat menjadi 300: 1–500: 1. Rasio produk pemulihan bilirubin dalam tinja dan urin jauh lebih signifikan dalam membedakan penyakit kuning daripada nilai absolut masing-masing.

Studi tentang metabolisme karbohidrat. Dalam sel hati dengan partisipasi sistem enzim, terjadi sintesis glikogen, deposisi dan glikogenolisis, serta glikoneogenesis. Mempertahankan glukosa dalam darah disediakan, di samping hati, oleh aktivitas organ dan sistem lain - pankreas, sistem hipofisis-adrenal, dll. Dalam hubungan ini, glukosa darah puasa berubah hanya dengan kerusakan hati yang sangat parah, dan mengungkapkan partisipasi yang tidak mencukupi dalam karbohidrat Pertukaran hanya dimungkinkan dengan bantuan sampel fungsional.

Tes beban glukosa tidak efektif, karena kandungan yang terakhir dalam darah, selain organ yang telah disebutkan, juga dipengaruhi oleh keadaan sistem saraf vegetatif, simpanan glikogen di hati dan otot, dll.

Tes dengan muatan galaktosa memiliki nilai yang diketahui (galaktosa tidak diserap oleh jaringan dan organ apa pun, kecuali hati, dan hormon tidak mempengaruhi kandungannya dalam darah). Pasien diizinkan minum larutan 40 g galaktosa dalam 200 ml air dan menentukan ekskresinya dalam urin. Biasanya, itu terjadi tidak lebih dari 4 jam dan tidak melebihi 3 g. Fungsi ginjal dan penyerapan usus dapat mempengaruhi ekskresi galaktosa dalam urin, oleh karena itu, penentuan kandungan galaktosa dalam darah lebih signifikan. Dengan fungsi hati yang baik, peningkatan maksimum kadar galaktosa darah diamati setelah 30-60 menit dan tidak melebihi 15% dari level awal; yang terakhir dicapai lagi dalam 2 jam. Dengan fungsi hati yang buruk, kenaikan tingkat galaktosa lebih tinggi, penurunan tingkat galaktosa dalam darah terjadi lebih lambat.

Studi tentang metabolisme protein Peran hati dalam metabolisme protein sangat tinggi: protein disintesis dan disimpan di dalamnya, asam amino, polipeptida makanan dan produk penguraian protein jaringan memasuki aliran darah.

Di sini mereka dikatabolisme, dinetralkan, dan dihilangkan produk dekomposisi yang tidak digunakan. Beberapa asam amino mengalami deaminasi dan transaminasi. Amonia yang dibebaskan dikonversi oleh hati menjadi urea yang kurang toksik. Dari asam amino yang dibawa dari luar dan disintesis oleh hati, ia kembali membangun protein jaringannya sendiri, serta protein darah; albumin, globulin (a dan p, sampai batas tertentu, y), fibrinogen, protrombin, heparin, beberapa enzim. Di hati, senyawa protein dengan lipid (lipoprotein) dan karbohidrat (glikoprotein) terbentuk.

Pelanggaran fungsi pembentuk protein hati terdeteksi dengan memeriksa protein plasma darah atau serum. Pelanggaran ini tidak mempengaruhi jumlah total protein, seperti rasio fraksinya, perubahan yang - dysproteinemia - diamati di sebagian besar lesi hati.

Metode elektroforesis di atas kertas, yang paling banyak digunakan saat ini dalam praktik klinis, didasarkan pada kenyataan bahwa protein berbeda dalam medan listrik bergantung pada ukuran, bentuk molekul, muatannya, dan faktor lainnya dengan kecepatan berbeda menuju elektroda positif. Selama elektroforesis di atas kertas, fraksi protein yang berbeda terkonsentrasi di berbagai bagian strip kertas, di mana mereka dapat diidentifikasi dengan pewarnaan yang tepat. Ukuran fraksi ditentukan oleh intensitas warna masing-masing. Protein plasma dibagi menjadi lima fraksi utama - albumin; a, -, dan2-, (5-, dan juga globulin y (Tabel 4). Elektroforesis di media lain (agar, gel pati, dll.) Memungkinkan Anda untuk membagi protein menjadi fraksi dalam jumlah yang lebih besar.

Pada penyakit hati, penurunan rasio albumin-globulin (A / G) paling umum, terutama karena penurunan

Tabel 4. Proteogram protein normal

Kesehatan, obat-obatan, gaya hidup sehat

Tes fungsi hati kuantitatif

Penyakit hati kronis ditandai dengan adanya periode laten yang panjang dengan gejala klinis minimal non spesifik (tahap kompensasi). Pada tahap akhir penyakit, asites, ikterus, ensefalopati, dan precoma (tahap dekompensasi) berkembang. Tingkat albumin dan protrombin dalam serum memungkinkan untuk mengevaluasi fungsi sintetis hati, yang dalam kebanyakan kasus tetap normal untuk waktu yang lama. Sebuah studi kuantitatif fungsi hati pada tahap awal dinamika memungkinkan pemantauan efektivitas pengobatan dan menilai prognosis, tetapi tidak memiliki nilai diagnostik.

Memuat galactose test

Galaktosa adalah zat yang tidak berbahaya. Ini dapat diberikan secara intravena dengan dosis yang cukup untuk menjenuhkan sistem enzim yang bertanggung jawab untuk eliminasi. Tingkat eliminasi galaktosa tergantung pada fosforilasi oleh galacto kinase. Dalam hal ini, perlu untuk memperhitungkan bagian dari dosis yang diberikan, yang dihilangkan dengan rute ekstrahepatik. Tes ini cukup akurat mencerminkan fungsi sel hati, tetapi membutuhkan penentuan tingkat galaktosa yang diulang selama 2 jam.

Tabel2-2. Tes fungsi hati kuantitatif

Mikrosom (sistem sitokrom P450)

Glikoprotein dengan residu terminal galaktosa

* Dengan dosis rendah, memungkinkan Anda menilai aliran darah hati.

Tes pernapasan

Aminopyrin ditransformasikan oleh N-demethylation oleh cytochrome P450 (terletak di fraksi mikrosom hepatosit) menjadi karbon dioksida. Zat ini dalam sifatnya memenuhi persyaratan untuk uji pernapasan dalam studi fungsi hati. Aminopyrin diberi label dengan isotop radioaktif 14 C dan diberikan secara oral. Sampel udara yang dihembuskan dikumpulkan dengan interval dua jam. Konsentrasi 14 C pada CO yang dihembuskan2 berkorelasi dengan tingkat penurunan radioaktivitas plasma. Sampel mencerminkan massa sisa mikrosom yang berfungsi dan jaringan hati yang layak. Hasil yang diperoleh dalam percobaan pada tikus dengan model sirosis hati, menunjukkan bahwa penurunan demetilasi N terjadi karena hilangnya massa hepatosit yang berfungsi; pada saat yang sama, aktivitas fungsional per hepatosit tetap tidak berubah. Studi ini memiliki nilai prognostik dan memungkinkan Anda untuk memantau efektivitas pengobatan (perannya dalam diagnosis kecil). Tes aminopirin dapat digunakan untuk mempelajari efek obat pada fungsi enzim mikrosomal hati.

Berlabel 14 Dengan kafein dan fenacetin juga dapat digunakan saat melakukan tes pernapasan. Sampel dengan beban 14 C-galaktosa memungkinkan evaluasi enzim terlokalisasi dalam sitosol. Semua tes pernapasan rumit dan mahal, sehingga kecil kemungkinannya akan digunakan secara luas di masa depan.

Penghapusan kafein oleh kelenjar ludah

Kafein (1,3,7-trimethylxanthin) hampir sepenuhnya dimetabolisme oleh N-demethylation dalam sistem mikrosomal hati (sitokrom P448). Methylxanthines diekskresikan dalam urin. Tingkat kafein dalam serum dan kelenjar ludah dapat diselidiki oleh enzim immunoassay. Tingkat ekskresi kafein dengan air liur semalaman berkorelasi baik dengan pembersihannya, serta dengan hasil tes pernapasan dengan aminopyrine. Studi tentang ekskresi kafein oleh kelenjar ludah adalah cara sederhana untuk menilai disfungsi hati. Berbagai faktor dapat memengaruhi pembersihan kafein: merokok mempercepat metabolisme kafein dengan menginduksi enzim, beberapa obat, seperti simetidin, menghambat pemecahan kafein; pembersihan kafein berkurang dengan bertambahnya usia. Dengan penentuan berulang pembersihan kafein pada pasien yang sama, dosis kafein harus sama, karena pembersihannya tergantung pada dosis.

Tes dengan lidokain

Lidocaine dimetabolisme oleh N-deetilasi oksidatif oleh sitokrom P450; pada saat yang sama, monoethylglycene-cenexylidide (MEGE) terbentuk, tingkat yang berkorelasi dengan tingkat pembersihan lidokain. Penentuan konsentrasi serum MEGE setelah pemberian lidokain secara intravena memungkinkan Anda mengukur fungsi hati. Konsentrasi MEGE tunduk pada fluktuasi yang signifikan pada orang dengan hati yang sehat dan pada pasien dengan sedikit pelanggaran fungsinya. Penurunan yang signifikan dalam indikator ini diamati pada sirosis hati, dan tingkat penurunan berkorelasi dengan prognosis penyakit. Ketika melakukan diagnosis banding antara sirosis dan kerusakan hati minor, studi tentang eliminasi galaktosa dan tes pernapasan aminoprin lebih informatif.

Tes dengan antipyrine

Antipyrine memiliki waktu paruh yang panjang, yang pada pasien dengan kerusakan hati parah dapat melebihi 30 jam, sehingga sampel darah dan air liur untuk penelitian harus diambil untuk waktu yang lama, yang membatasi penggunaan sampel ini untuk tujuan diagnostik.

Penentuan reseptor asialoglycoprotein

Hepatosit menyimpulkan asialoglikoprotein (dengan residu terminal galaktosa) dari unggun vaskular karena adanya reseptor spesifik pada membran sinusoidal hepatosit. Ketika lesi parenkim hati, jumlah reseptor ini berkurang. Hal ini dinilai berdasarkan tingkat penangkapan oleh hati dari 99m Tc galactosyl neoglycalbumin (asialoglycoprotein analog), yang ditentukan menggunakan ruang kilau standar pada pemeriksaan tunggal sampel darah. Hasil penelitian berkorelasi dengan tingkat keparahan penyakit (ditentukan oleh sistem kriteria Anak), hasil tes pernapasan dengan aminopyrin dan pembersihan indosianin. Konsentrasi rata-rata reseptor pada tahap akhir sirosis adalah 0,35 ± 0,07 µmol / L dibandingkan dengan 0,83 ± 0,06 µmol / L pada kelompok kontrol [9]. Hasil yang sama diperoleh saat menggunakan albumin serum manusia berlabel 99m Tc-diethylenetriam dan npenta-asetat galactosyl [5]. Jumlah reseptor berkurang dengan hepatitis akut dan meningkat lagi selama periode pemulihan [12]. Meskipun hasilnya menjanjikan, penelitian ini hanya dilakukan dalam kasus-kasus khusus.

Kapasitas ekskresi hati (uji bromsulfalein)

Metode lama mempelajari tingkat eliminasi BS yang disuntikkan secara intravena dari vaskular memungkinkan untuk mengevaluasi kemampuan penyerapan dan ekskresi hepatosit. Metode ini belum diterapkan di klinik karena kerumitannya, biaya tinggi dan kemungkinan komplikasinya [4].