Prinsip Penghitungan leukosit selama mikroskopi dalam jumlah tertentu dari kotak penghitungan dan penghitungan jumlah mereka dalam 1 liter darah, dengan mempertimbangkan pengenceran darah dan volume kamar penghitungan.
Reagen: larutan 3-5% asam asetat, diwarnai untuk menodai inti leukosit dengan beberapa tetes larutan metilen biru. Solusinya memiliki warna biru, dapat disimpan untuk waktu yang lama.
Jalannya tekad. Dalam tabung reaksi kering tuangkan 0,4 ml larutan asam asetat. 0,02 ml darah dikumpulkan dari jari (Anda dapat menggunakan darah vena yang distabilkan dengan antikoagulan). Usap ujung pipet, lalu tiup darah dari itu ke bagian bawah tabung, campur, putar ulang dan tiup campuran darah dan reagen (pipetting). Labeli tabung dan biarkan sampai menghitung. Menyimpan campuran darah dengan larutan asam asetat disarankan tidak lebih dari 2-4 jam.
Darah diencerkan dalam tabung reaksi dengan asam asetat, aduk hingga rata dan isi dengan ruang penghitungan. Ruang diisi dibiarkan dalam posisi horizontal selama 1 menit untuk menyelesaikan sel darah putih. Tanpa mengubah posisi horizontal kamera, mereka menempatkannya di atas meja mikroskop dan pada perbesaran rendah (lensa 10x, lensa 8x) menghitung sel darah putih dalam 100 kotak besar, yang sesuai dengan 1600 kecil.
Untuk akurasi yang lebih besar, leukosit dihitung di seluruh grid dalam kotak besar, tidak dibagi menjadi kotak kecil dan garis-garis, mulai dari sudut kiri atas grid. Untuk kontras yang lebih baik, gelapkan bidang tampilan, jatuhkan kondensor dan tutup apertur. Sel-sel yang terletak di dalam kuadrat dan berbaring pada dua garis dihitung agar tidak menghitung sel yang sama dua kali.
Perhitungan jumlah leukosit dilakukan sesuai dengan rumus:
di mana X adalah jumlah leukosit dalam 1 μl darah; dan - jumlah leukosit dalam 100 kotak besar; 20 - pengenceran darah; 100 adalah jumlah kotak besar; 250 adalah faktor konversi per 1 μl, karena volume satu kotak besar adalah 1/250 μl (sisi kotak adalah 1/5 mm, tingginya 1/10 mm).
Dalam praktiknya, untuk menghitung jumlah leukosit dalam 1 μl darah, jumlahnya dalam 100 kotak besar dikalikan dengan 50, dan dalam 1 liter - nilai yang dihasilkan dikalikan 106.
Catatan Saat menghitung leukosit, kesalahan tidak bisa dihindari pada 6-8% kasus.
- Dengan sejumlah besar normosit dalam darah tepi, mereka dihitung dalam jumlah leukosit (baik leukosit dan normosit - sel berinti). Untuk menetapkan jumlah leukosit dengan benar, dari jumlah total sel darah berinti harus mengurangi jumlah normosit.
- Kesalahan yang tersisa mirip dengan yang muncul saat menghitung jumlah sel darah merah di ruang hitung.
Jumlah leukosit
Untuk mengumpulkan darah dalam mixer leukosit sampai tanda 0,5. Segera tambahkan ke dalam darah larutan encer dari asam asetat 3% untuk menandai 11. Campur secara menyeluruh isi kapiler dan isi ulang ruang Goryaev dengannya. Penghitungan dilakukan dalam setidaknya 100 kotak besar. Ini adalah garis-garis besar yang tidak bergaris, yang dikelompokkan menjadi empat di kisi-kisi kamera Goryaev. Hitung jumlah leukosit dalam 1 l darah dengan rumus:
L = N x 4000 x 20 x 10 6
di mana: N adalah jumlah leukosit dalam seratus kotak besar; 4000 adalah pengganda yang mengurangi volume kotak kecil ke volume 1 μl darah; 20 - koreksi untuk tingkat pengenceran darah; 1600 - jumlah leukosit dalam kotak kecil; 10 6 - jumlah mikrolit dalam 1 l.
Rekomendasi untuk pendaftaran
Sebagai kesimpulan, bandingkan hasil yang diperoleh dengan nilai normal.
Lab № 7.3
Menentukan jumlah hemoglobin dalam darah
194.48.155.245 © studopedia.ru bukan penulis materi yang diposting. Tetapi memberikan kemungkinan penggunaan gratis. Apakah ada pelanggaran hak cipta? Kirimkan kepada kami | Umpan balik.
Nonaktifkan adBlock!
dan menyegarkan halaman (F5)
sangat diperlukan
Menghitung Jumlah Sel Darah Putih
Leukositosis dapat bersifat absolut (benar) dan relatif (redistributif).
Leukositosis absolut diamati dalam proses inflamasi akut, nekrosis jaringan, infeksi bakteri akut (dengan pengecualian demam tifoid, brucellosis, tularemia, dll.), Kondisi alergi, tumor ganas (dengan kerusakan jaringan), cedera kepala tertutup dan pendarahan di otak, diabetes. koma uremik, syok, kehilangan darah akut, sebagai reaksi utama - dengan penyakit radiasi. Peningkatan jumlah leukosit yang signifikan terjadi dengan leukemia.
Relatif (redistributif) adalah konsekuensi dari penerimaan leukosit dalam aliran darah dari organ yang berfungsi untuk depotnya. Ini terjadi setelah makan (leukositosis makanan), mandi air panas dan dingin, emosi yang kuat (leukositosis vegetovaskular), kerja otot yang intens (leukositosis miogenik), dll.
Leukopenia Leukopenia dianggap sebagai indikator penghambatan kemampuan fungsional sumsum tulang sebagai akibat dari paparan zat beracun (arsenik, benzena, dll.), Beberapa obat (sulfanilamida, kloramfenikol, butadione, immuno, siklofosfamid, dll.), Virus (influenza, virus hepatitis), campak, dll.), mikroba (tipus, brucellosis, dll.), radiasi pengion, sinar-X dan hipersplenisme (peningkatan fungsi limpa).
Leukositosis dan leukopenia jarang ditandai dengan peningkatan (penurunan) proporsional dalam jumlah total leukosit dari semua jenis (misalnya, leukositosis dengan penebalan darah); dalam kebanyakan kasus ada peningkatan (penurunan) dalam jumlah jenis sel apa saja, oleh karena itu istilah "neutrofilia", "neutropenia", "limfositosis", "limfopenia", "eosinofilia", "eosinopia", "eosinopia", "monositosis", "monocytopenia" digunakan, "Basofilia."
Dalam evaluasi klinis perubahan jumlah leukosit, sangat penting melekat pada rasio persentase bentuk individu leukosit, yaitu, formula leukosit.
Jumlah darah leukosit orang sehat:
Jumlah relatif Jumlah absolut
Basofil ……………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l
Eosinofil …………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l
Neutrofil: - myelocytes............ 0% tidak ada
- ditikam... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l
- tersegmentasi….47-72% 2.0-5.5 x 10 9 / l
Limfosit …………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L
Monosit ………………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L
Penghitungan leukosit dilakukan pada apusan darah tepi bernoda. Untuk interpretasi yang benar dari hasil studi formula leukosit, disarankan untuk menghitung dalam jumlah absolut, tetapi tidak dalam jumlah relatif. Metode yang paling umum melukis noda oleh Romanovsky-Giemsa, Pappenheim. Di bawah pencelupan, sedikitnya 200 sel dihitung, dan kemudian rasio persentase jenis leukosit tertentu diturunkan. Analisis leukogram dengan mempertimbangkan parameter darah lainnya dan gambaran klinis adalah metode pemeriksaan yang berharga, membantu dalam diagnosis dan penentuan prognosis penyakit.
Penyebab utama neutrofilia.
Infeksi bakteri akut - terlokalisasi dan menyeluruh.
Peradangan atau nekrosis jaringan.
Efek obat (kortikosteroid).
Penyebab utama neutropenia.
Infeksi - bakteri (demam tifoid, brucellosis, tularemia, demam paratifoid) dan virus (infeksi hepatitis, campak, influenza, rubella dan lain-lain).
Efek myelotoxic dan penekanan granulocytopoiesis (radiasi pengion; agen kimia - benzena, anilin, DDT; efek obat - sitostatik dan imunosupresan; vitamin-B12-anemia defisiensi asam folat, leukemia aleukemik akut, anemia aplastik).
Paparan antibodi (bentuk imun) - hipersensitif terhadap obat, penyakit autoimun (SLE, rheumatoid arthritis, leukemia limfatik kronis), manifestasi isoimun (penyakit hemolitik pada bayi baru lahir).
Redistribusi dan deposisi pada organ - kondisi syok, penyakit dengan splenomegali dan hipersplenisme.
Bentuk herediter (neutropenia kronis jinak familial).
Penyebab utama eosinofilia.
Invasi parasit (trikinosis).
Lesi kulit kronis - psoriasis, pemfigus, eksim.
Tumor (varian leukemia eosinofilik).
Penyakit lain - fibroplastik endokarditis Lefflera, demam berdarah.
Pada fase pemulihan infeksi dan penyakit radang (tanda prognostik yang menguntungkan).
Penyebab eosinopenia (aneosinofilia).
Peningkatan aktivitas adrenokortikosteroid dalam tubuh.
Penyebab utama basofilia:
Leukemia mieloid kronis dan eritremia.
Penyebab utama monositosis.
Infeksi bakteri subakut dan kronis.
Infeksi parasit - leishmaniasis, malaria.
Hemoblastosis - leukemia monosit, limfogranulomatosis, limfoma.
Kondisi lain adalah SLE, sarkoidosis, rheumatoid arthritis, monositosis infeksi; dalam periode pemulihan dari infeksi, ketika meninggalkan agranulositosis, setelah splenektomi.
Penurunan jumlah monosit penting terutama dalam menilai rasio limfosit-monosit dalam TB paru.
Penyebab utama limfositosis.
Infeksi - virus akut (infeksi mononukleosis, campak, rubela, cacar air), bakteri kronis (TBC, sifilis, brucellosis), protozoa (toksoplasmosis).
Hemoblastosis (leukemia limfositik, limfoma).
Penyakit lain - hipertiroidisme, penyakit Addison, vitamin B12-anemia defisiensi folat, anemia hipo-dan aplastik.
Limfositopenia diamati pada SLE, penyakit Hodgkin, TBC yang meluas pada kelenjar getah bening, pada tahap akhir gagal ginjal, penyakit radiasi akut, keadaan defisiensi imun, mengonsumsi glukokortikoid.
Peningkatan atau penurunan jumlah jenis leukosit tertentu dalam darah dapat bersifat relatif atau absolut. Jika hanya persentase jenis sel darah putih tertentu yang berubah, maka neutrofilia relatif, eosinopenia relatif, dll. Terjadi. Peningkatan atau penurunan kandungan absolut dari semua jenis leukosit, yaitu, jumlah sel-sel ini per satuan volume darah, disebut neutrofilia absolut, eosinopenia absolut, dll.
Menggeser formula ke kiri (menambah jumlah bentuk muda neutrofil) adalah tanda peradangan atau proses nekrotik dalam tubuh.
Pergeseran formula leukosit ke kanan adalah karakteristik penyakit radiasi dan vitamin B12-anemia defisiensi asam folat.
Tidak adanya atau pengurangan yang signifikan dalam jumlah semua jenis leukosit granular - granulosit (neutrofil, eosinofil, basofil) ditunjuk oleh istilah agranulositosis. Bergantung pada mekanisme kejadiannya, mielotoxic (efek radiasi pengion, asupan sitostatik) dan kekebalan tubuh (agranulositosis autoimun dan hapten) dibedakan.
Jumlah leukosit
Metode penghitungan di kamera. Pengambilan dan pengenceran darah yang diproduksi dengan metode tabung. 0,4 ml cairan pengencer dan 0,02 ml darah kapiler dimasukkan ke dalam tabung (lebih disukai Vidalevskaya). Pengenceran yang dihasilkan secara praktis dianggap 1:20. Suatu larutan asam asetat 3-5% yang diwarnai dengan metilen biru biasanya digunakan sebagai pengencer (asam asetat melisis eritrosit, metilen biru menodai inti leukosit). Sebelum mengisi tabung ruang Goryaeva dengan darah encer terguncang. Ruangan diisi dengan cara yang sama seperti untuk penghitungan sel darah merah.
Leukosit jauh lebih kecil daripada eritrosit (1-2 per persegi besar), oleh karena itu, untuk keakuratannya, jumlah dibuat dalam 100 kotak besar (tidak bertingkat). Perhitungan: 100 kotak besar (1600 kecil) dihitung leukosit.
Mengingat bahwa volume kotak kecil adalah 1/4000 mm3, dan darah diencerkan 20 kali, jumlah leukosit dalam 1 μl darah dihitung: 4000 20 dan dibagi dengan 1600 = a x 1/2. Secara praktis, untuk mendapatkan kandungan leukosit aktual dalam 1 μl darah, cukup untuk membagi dalam setengah jumlah yang diperoleh dalam perhitungan dan menambahkan 2 nol. Kesalahan metode rata-rata adalah ± 7%.
Lebih akurat (2-3% kesalahan) dan sempurna adalah jumlah leukosit yang menggunakan perangkat elektronik. Penghitungan leukosit dalam penghitung partikel dilakukan sesuai dengan prinsip yang sama dengan eritrosit. Pra-darah diencerkan dan dicampur dengan reagen apa pun yang melisiskan sel darah merah. Dalam autoanalyzer "Technicon", larutan asam asetat digunakan, dalam perangkat "Culter" dan "Celloskop" - saponin atau sapoglobin, yang ditambahkan diencerkan (1: 500, 1: 700) dalam larutan natrium klorida isotonik (6 tetes per 20 ml berkembang biak).
Penghitungan leukosit darah dilakukan pada apusan darah tepi bernoda.
Lebih baik menghitung pada titik tertipis di dekat ujung apusan, setidaknya 200 sel (kecuali untuk leukopenia yang diucapkan), dan kemudian memperoleh rasio persentase jenis sel darah putih tertentu. Menghitung direkomendasikan dalam urutan yang sama: setengah dari sel harus dihitung di bagian atas, setengah di bagian bawah stroke, tanpa pergi ke tepi dan tengah, zig-zag (bidang pandang 3-4 sepanjang stroke, 3-4 bidang di sudut kanan ke tengah stroke, kemudian 3-4 bidang ke sisi sejajar dengan tepi, lagi pada sudut kanan ke atas dan seterusnya ke satu sisi).
Persiapan apus. Kaca yang dicuci dan dihilangkan lemaknya dengan hati-hati menyentuh setetes darah di tempat injeksi. Poleskan kaca gerinda, letakkan pada sudut 45 ° ke slide di depan drop. Setelah membawa gelas ke tetes ini, mereka menunggu sampai darah menyebar sepanjang tepinya, kemudian dengan gerakan cepat mereka membawa gelas gerinda ke depan, tidak mengambilnya dari subjek sebelum mengeringkan seluruh tetesan.
Corengan yang dibuat dengan benar memiliki warna kekuningan (tipis), tidak mencapai tepi kaca dan berakhir dengan jejak (kumis).
Pewarnaan kering pewarnaan diproduksi setelah fiksasi awal. Fiksasi terbaik dicapai dalam alkohol metilen absolut (3-5 menit) atau dalam campuran Nikiforov dari bagian etanol absolut dan eter absolut (30 menit).
Cat hematologi utama meliputi metilen biru dan turunannya - biru tua I (metilen biru) dan biru biru (campuran bagian yang sama dari biru tua I dan biru metilen biru), menjadi eosin kuning yang larut dalam air dan bersifat asam.
● Melukis oleh Romanovsky-Giemsa. Cat Romanovsky-Giemsa (buatan pabrik) memiliki komposisi sebagai berikut: Azur II - 3 g, eosin kuning yang larut dalam air - 0,8 g, metil alkohol - 250 ml, dan gliserin - 250 ml. Larutan cat kerja disiapkan pada laju 1,5-2 tetes cat jadi per 1 ml air suling. Cat dituangkan ke atas noda dengan lapisan yang mungkin lebih tinggi; waktu mewarnai - 30-35 menit Setelah periode ini, apusan dicuci dengan air dan dikeringkan di udara. Dalam metode ini, adalah mungkin untuk membedakan nukleus dengan baik, tetapi granularitas neutrofilik dari sitoplasma jauh lebih buruk, sehingga banyak digunakan untuk pewarnaan apusan darah tepi.
● Kombinasi pewarnaan May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa menurut Pappenheim. Pewarna yang sudah jadi, fiksatif May-Grunwald, yang merupakan larutan eosinmethylene blue dalam alkohol metilen, disalurkan ke noda permanen selama 3 menit. Setelah 3 menit, jumlah air suling yang sama ditambahkan ke cat yang menutupi larutan dan pewarnaan dilanjutkan selama 1 menit lagi. Setelah itu, cat dicuci dan apusan dikeringkan di udara. Kemudian apusan kering dicat ulang dengan larutan air larutan Romanovsky yang baru disiapkan selama 8-15 menit. Metode ini dianggap yang terbaik, terutama untuk apusan punctata sumsum.
Peningkatan jumlah leukosit dalam darah perifer di atas tingkat normal disebut leukositosis, penurunan disebut leukopenia. Leukositosis (leukopenia) jarang ditandai dengan peningkatan (penurunan) proporsional dalam jumlah semua jenis leukosit, misalnya leukositosis dengan penebalan darah. Dalam kebanyakan kasus ada peningkatan jumlah (penurunan) jenis sel apa saja. Peningkatan atau penurunan jumlah jenis leukosit individu dalam darah dapat relatif atau absolut, tergantung pada jumlah leukosit total - normal, meningkat, atau menurun. Perubahan jumlah, rasio bentuk individu dan morfologi leukosit tergantung pada jenis dan virulensi patogen, sifat, perjalanan dan luasnya proses patologis, reaksi individu organisme.
Leukosit (leukositus)
Leukosit. Penentuan leukosit secara kuantitatif. Menghitung leukosit menggunakan kamera Goryaeva. Isi kuantitatif leukosit. Leukositosis.
Sel darah putih
Jumlah leukosit dalam darah tergantung baik pada kecepatan pembentukan mereka, dan pada mobilisasi mereka dari sumsum tulang, serta pada pemanfaatan dan migrasi mereka ke dalam jaringan (ke lesi), ditangkap oleh paru-paru dan limpa. Proses-proses ini, pada gilirannya, dipengaruhi oleh sejumlah faktor fisiologis, dan oleh karena itu jumlah leukosit dalam darah seseorang yang sehat mengalami fluktuasi: proses ini meningkat pada akhir hari, selama aktivitas fisik, stres emosional, asupan makanan protein, dan perubahan mendadak pada suhu lingkungan.
Penentuan leukosit secara kuantitatif
Leukosit dihitung menggunakan kamera Goryaev dan menggunakan penghitung otomatis.
Menghitung leukosit menggunakan kamera Goryaeva
Dengan metode in vitro mengambil darah untuk menghitung leukosit:
- 0,4 ml larutan asam asetat 3-5% berwarna metilen biru dituangkan ke dalam tabung. Gunakan pipet kapiler untuk mengambil 20 μl darah dari setetes baru (pengenceran 20 kali), tiup dengan hati-hati ke dalam tabung reaksi dengan reagen dan bilas pipet. Aduk rata;
- kaca penutup yang bersih dan kering digosokkan ke ruangan sehingga cincin pelangi terbentuk pada titik kontak;
- Darah diencerkan dalam tabung reaksi, aduk rata. Ujung batang kaca bundar mengambil setetes darah dan membawanya ke tepi kaca ruang yang dipoles;
- setelah mengisi ruang, dibiarkan selama 1 menit saat istirahat untuk sedimentasi leukosit;
- Leukosit dipertimbangkan pada perbesaran rendah (objektif × 8 atau × 9, lensa mata × 10 atau × 15) dengan bidang pandang yang gelap (dengan kondensor rendah atau diafragma menyempit);
- untuk hasil yang memuaskan, leukosit dihitung dalam 100 kotak besar.
Mengetahui volume kuadrat besar dan tingkat pengenceran darah, temukan jumlah leukosit dalam 1 μl dan 1 l darah. Sisi bujur sangkar besar adalah 1/5 mm, luasnya 1/25 mm2, volume ruang di atas bujur sangkar ini adalah 1/250 mm3.
Formula untuk menghitung sel darah putih:
di mana B adalah jumlah leukosit dalam 100 kotak besar;
P - tingkat pengenceran (20).
Jumlah leukosit
Norma: 4.0–9.0 × 10 9 / L
Peningkatan jumlah leukosit di atas 9,0 × 10 9 / l disebut
leukositosis, penurunan jumlah mereka di bawah 4,0x109 / l - leukopenia. Namun, bahkan 3,5 × 109 dalam 1 l leukosit untuk sejumlah individu mungkin menjadi norma. Menurut literatur, orang-orang seperti itu telah meningkatkan resistensi imun dan mereka cenderung sakit, yang tampaknya disebabkan oleh kebutuhan akan respons imun untuk memiliki cadangan leukosit dalam jaringan, di mana ada 50-60 kali lebih banyak daripada dalam aliran darah. Jelas, pada individu sehat dengan jumlah sel darah putih yang rendah dalam darah tepi, cadangan mereka dalam jaringan meningkat. Fenomena ini dijelaskan oleh karakter turun-temurun dan kekeluargaan atau dengan peningkatan pengaruh sistem saraf parasimpatis.
Leukopenia bisa fungsional dan organik.
Leukopenia fungsional dikaitkan dengan disregulasi pembentukan darah dan diamati:
- dengan beberapa infeksi bakteri dan virus (demam tifoid, influenza, cacar, rubela, penyakit Botkin, campak);
- di bawah aksi obat-obatan (sulfonamida, analgesik, antikonvulsan, antitiroid, sitostatik dan obat-obatan lainnya);
- selama kerja otot, pengenalan protein asing, efek saraf dan suhu, kelaparan, keadaan hipotonik;
- leukositopenia palsu dapat dikaitkan dengan agregasi leukosit selama penyimpanan darah jangka panjang pada suhu kamar (lebih dari 4 jam).
Leukopenia organik yang dihasilkan dari aplasia sumsum tulang dan penggantiannya dengan jaringan adiposa, terjadi ketika:
- anemia aplastik;
- agranulositosis;
- leukemia leukopenik;
- beberapa bentuk penyakit Hodgkin;
- radiasi pengion;
- hipersplenisme (primer dan sekunder);
- penyakit kolagen.
Leukositosis
Leukositosis adalah reaksi sistem hematopoietik terhadap efeknya
faktor eksogen dan endogen. Ada leukositosis fisiologis dan patologis.
Leukositosis fisiologis adalah:
- pencernaan - setelah makan, terutama tinggi protein; jumlah leukosit tidak melebihi 10,0-12,0 × 10 9 / l dan setelah 3-4 jam kembali menjadi normal;
- dengan stres emosional (adrenalin), aktivitas fisik yang berat, pendinginan, paparan sinar matahari yang berlebihan (terbakar matahari), pemberian sejumlah hormon (katekolamin, glukokortikosteroid, dll.), pada paruh kedua kehamilan, selama menstruasi dan karena distribusi leukosit yang tidak merata dalam darah arus utama.
Leukositosis patologis dibagi menjadi absolut dan relatif.
Leukositosis absolut - peningkatan jumlah leukosit dalam darah hingga beberapa ratus ribu (100,0-600,0 × 10 9 / l dan lebih banyak).
- Paling sering diamati pada leukemia: pada leukemia kronis - pada 98-100% kasus, pada leukemia akut - pada 50-60%. Mengubah rasio sel leukosit dalam sumsum tulang dan belang darah berfungsi sebagai dasar untuk diagnosis leukemia.
Leukositosis relatif diamati:
- proses inflamasi dan infeksi akut, dengan pengecualian demam tifoid, influenza, cacar, rubela, penyakit Botkin, campak. Leukositosis terbesar (hingga 70,0-80,0 × 10 9 / l) diamati pada sepsis;
- di bawah pengaruh zat beracun (racun serangga, endotoksin), radiasi pengion (segera setelah iradiasi);
- sebagai akibat dari aksi kortikosteroid, adrenalin, histamin, asetilkolin, dan sediaan digitalis;
- dengan disintegrasi jaringan (nekrosis), infark miokard, trombosis arteri perifer dengan perkembangan gangren, luka bakar, radang selaput dada eksudatif, perikarditis, uremia, koma hepatik;
- kehilangan darah yang signifikan pada cedera, pendarahan internal, ginekologi dan lainnya.
Peningkatan jumlah leukosit pada penyakit menular dalam banyak kasus disertai dengan pergeseran formula leukosit ke kiri.
Menghitung jumlah leukosit dan trombosit
Faktor-faktor yang mempengaruhi kebenaran studi sel darah putih
- penyimpanan darah yang lama pada suhu kamar
Norma isi leukosit dalam darah
Umur Jumlah leukosit
- 1 hari 11.6 - 22.0
- 1 minggu 8.1.- 14.3
- 1 bulan 7,6 - 12,4
- Dewasa 4,0 - 9,0
Metode untuk menentukan jumlah leukosit dalam darah.
- Menghitung jumlah leukosit di ruang hitung
- Menghitung leukosit dalam analisis hematologi
Menentukan jumlah leukosit dalam ruang hitung.
- Penghitungan leukosit di bawah mikroskop dilakukan setelah melisiskan sel darah merah dalam 100 kotak besar dari kotak penghitungan dan dihitung ulang untuk 1 liter darah, berdasarkan volume kotak dan pengenceran darah. Hitungan leukosit harus dilakukan dalam 2-4 jam setelah pengumpulan darah.
- Jika ada sel darah merah berinti dalam darah tepi, mereka tidak dilisiskan dan dihitung bersama dengan leukosit. Dalam hal ini, untuk menentukan jumlah sebenarnya leukosit, jumlah sel di baris merah dikurangi dari jumlah total sel yang dihitung.
- Sebagai contoh: Jumlah total leukosit dalam perhitungan di dalam bilik (atau analisa) -45x109 / l. Ketika menghitung formula leukosit, ditemukan bahwa 50 eritroblas (normoblas) ada per 100 leukosit.
Kami menghitung jumlah sebenarnya leukosit dalam darah:
150 sel - 45 x 109 / l
100 sel (leukosit) - X
X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 * 10 / l
Dengan demikian, jumlah leukosit sebenarnya dalam darah adalah 30 x 109 / l.
Sumber utama kesalahan dalam perhitungan leukosit di dalam ruangan:
- Rasio volume darah dan asam asetat yang diambil dalam tabung reaksi salah.
- Larutan asam asetat yang dipersiapkan dengan tidak benar (pada konsentrasi lebih dari 5%, beberapa leukosit dapat lisis, yang akan menyebabkan hasil yang terlalu rendah).
- Paparan sampel yang lama pada suhu di atas 28 ° C, yang dapat mempercepat lisis leukosit dalam sampel dan menyebabkan hasil yang terlalu rendah.
- Mengisi ruang Goryaev secara tidak benar. Seperti dengan perhitungan sel darah merah, kamera harus dibiarkan selama 1 menit untuk menyelesaikan sel.
- Kamera Goryaev tidak dicuci dengan cukup baik setelah definisi sebelumnya. Leukosit yang tersisa dalam bilik dapat melebih-lebihkan hasil analisis.
Metode penghitungan trombosit
- di ruang hitung
Setiap kelompok metode memiliki kelebihan dan kekurangan.
- Penghitungan trombosit dalam bilik cukup akurat, tidak perlu menghitung jumlah sel darah merah. Di sisi lain, metode ini lebih melelahkan, karena trombosit dalam bentuk asli diwakili oleh unsur-unsur kecil dan sangat kontras. Kerugian dari metode ini adalah menghitung trombosit dalam beberapa jam mendatang setelah mengambil darah.
- Menentukan jumlah trombosit dalam apusan darah secara signifikan lebih rendah dalam akurasinya terhadap metode ruang atau penghitung otomatis. Kesalahan dalam penghitungan apusan darah dapat disebabkan oleh kualitas apusan yang buruk dan distribusi trombosit yang tidak merata, penentuan jumlah sel darah merah yang tidak akurat. Kerugian yang signifikan dari metode ini adalah perlunya menghitung trombosit dan sel darah merah secara bersamaan dalam darah. Keuntungannya adalah kemampuan untuk mempelajari trombosit kapan saja, terlepas dari waktu pengumpulan darah.
- Metode penentuan trombosit menggunakan penganalisa hematologi memungkinkan Anda untuk secara akurat menentukan jumlah trombosit, volume rata-rata dan distribusi berdasarkan volume.
Jumlah leukosit
Jumlah leukosit dihitung menggunakan penghitung otomatis atau dalam ruang Goryaev. Untuk menghitung leukosit dalam ruang, cairan Turk disiapkan - larutan asam asetat yang diwarnai dengan larutan metilen biru (0,1 ml larutan 0,1% larutan metilen biru ditambahkan ke 9 ml asam asetat 10%). Dalam tabung reaksi tuangkan 0,4 ml Türk cair. Dapatkan persis 0,02 ml darah, tambahkan dengan hati-hati ke cairan encer. Pengenceran darah adalah 1:20. Aduk rata dan biarkan selama 4 menit. Isi ruang Goryaeva, setelah hati-hati mengguncang tabung dengan darah encer. Kamera dibiarkan selama 1 menit pada permukaan yang rata untuk pengendapan leukosit. Kemudian leukosit dihitung pada perbesaran rendah dari mikroskop (lensa 8, lensa mata 10 atau 15) dengan bidang pandang yang gelap (dengan kondensor diturunkan atau diafragma yang menyempit). Leukosit dianggap dalam 100 kotak besar yang dirahasiakan, yang sesuai dengan 1600 kecil. Hasil penghitungan sel dalam kotak besar merangkum dan menghitung jumlahnya dalam 1 μl darah menggunakan rumus:
di mana X adalah jumlah leukosit dalam 1 μl darah; A - jumlah sel dihitung dalam 100 kotak besar; 1600 - jumlah kotak kecil; 20 - pengenceran darah; 4000 adalah pengganda yang menghasilkan volume 1 μl darah, berdasarkan volume kuadrat kecil (1/4000 μl).
Menghitung formula leukosit. Apusan darah tepi bernoda diperiksa. Suatu kondisi yang diperlukan untuk pertimbangan yang benar dari fitur morfologi sel darah adalah apusan darah yang dibuat dengan baik dan bernoda baik. Apusan darah disiapkan pada slide yang kering, bersih, berdegenerasi baik, berumur dalam campuran Nikiforov (etil alkohol 96 º dan dietil eter 1: 1). Mengambil kaca slide untuk tepi panjang, sentuh permukaannya ke setetes darah (tetapi bukan kulit) dilepaskan dari tusukan, atau oleskan setetes darah dengan mikropipet atau kapiler. Geser kaca diadakan di atas meja atau di tangan kiri untuk tepi yang sempit. Menggunakan tangan kanan, oleskan kaca tanah dengan tepi sempit ke kaca dengan darah di sebelah kiri drop pada sudut 45 ° dan dorong ke kanan sampai menyentuh darah. Mereka menunggu sampai darah menyebar ke seluruh tepi kaca tanah, dan kemudian, dengan gerakan cepat, cepat, arahkan dari kanan ke kiri hingga seluruh tetes habis. Setetes darah harus kecil dan proporsional sehingga seluruh apusan ditempatkan pada gelas, tidak mencapai 1-1,5 cm sebelum ujungnya. Corengan yang dibuat dengan baik tipis, memiliki warna kekuningan dan berakhir dengan "sapu." Apusan darah kering-udara ditempatkan di piring khusus untuk fiksasi atau gelas kaca biasa yang diisi dengan cairan pengikat (metil alkohol, waktu fiksasi 3-5 menit; etil alkohol, 30 menit; campuran Nikiforov, 20-30 menit). Persiapan tetap dikeringkan di udara, dan kemudian diwarnai dengan pewarna Romanovsky-Giemsa. Larutan cat akhir Romanovsky-Giemsa (azureosin) diencerkan 1:10 dalam volume yang diperlukan untuk pewarnaan. Apusan fix dituangkan dengan cat encer, yang dituangkan ke apusan dengan lapisan yang mungkin lebih tinggi. Pewarnaan berlangsung tergantung pada suhu udara di ruangan dari 25 hingga 45 menit. Setelah menyelesaikan cat, cuci cat dengan air suling dan letakkan goresan secara vertikal di dudukan kayu untuk dijemur. Mikroskopi apusan darah dilakukan dengan pencelupan pada pembesaran 100 × 10. Penghitungan leukosit dilakukan di sepanjang garis zig-zag ("Garis berliku-liku"). 100-200 sel dihitung, dengan mempertimbangkan jumlah masing-masing bentuk leukosit: menusuk dan membentuk neutrofil, eosinofil, basofil, monosit, limfosit. Hitung persentase masing-masing jenis sel.
Menghitung jumlah absolut fagosit dan limfosit Jumlah absolut fagosit (neutrofil dan monosit) dan limfosit vertebrata yang lebih tinggi dihitung berdasarkan data jumlah leukosit dalam darah tepi dan formula leukosit.
Tes fungsi fagositosis
Penentuan indeks fagositik dan jumlah fagositosis
Sejumlah besar teknik telah dikembangkan untuk menilai aktivitas penyerapan dan pencernaan leukosit. Semuanya didasarkan pada kemampuan fagosit untuk menyerap partikel asing yang membentuk sistem pengujian (jenis mikroorganisme khusus, zymosan, lateks - objek penyerapan). Wahyu dilakukan secara in vitro atau in vivo. Cara umum penentuan adalah sebagai berikut: Darah segar heparinized atau sitrat (atau suspensi fagosit) dicampur dengan volume yang sama dari suspensi mikroba harian yang ditangguhkan (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) atau objek penyerapan lainnya. Campuran dicampur dengan lembut dan ditempatkan dalam termostat (37-40ºС - untuk berdarah panas tergantung pada suhu normal tubuh, 26 ° C - untuk ikan yang menyukai panas dan lebih rendah untuk yang menyukai dingin). Setelah 15, 30, 45, 60 dan 90 menit, apusan disiapkan pada slide, dikeringkan, difiksasi dengan alkohol metil atau campuran Nikiforov dan diwarnai sesuai dengan Romanovsky-Giemsa. Mereka melihat apusan di bawah perendaman dan menentukan aktivitas fagosit - persentase fagosit yang berpartisipasi dalam fagositosis, indeks fagositosis - jumlah mikroba uji yang ditangkap oleh satu leukosit fagosit, jumlah fagositosis - jumlah rata-rata objek fagosit per 1 neutrofil aktif. Evaluasi indikator pada interval waktu yang berbeda memungkinkan kami untuk memperkirakan dinamika fagositosis. Biasanya, setelah 90 menit, indeks fagositik harus lebih rendah daripada setelah 45 menit dan 60 menit, karena pencernaan mikroba. Dalam kasus pelanggaran pencernaan, itu tidak berubah.
Penilaian aktivitas fungsional fagosit oleh reaksi reduksi nitro-biru tetrazol (uji NBT)
Tes ini merupakan indikator fungsi bakterisida fagosit dan memungkinkan Anda untuk mengevaluasi kemampuan mereka terhadap pembunuhan yang bergantung pada oksigen. Ketika mekanisme pembunuhan ini diaktifkan, enzim NADPH oksidase diaktifkan, yang mengarah pada munculnya spesies oksigen reaktif dalam fagosit. Pelepasan zat seperti itu di dalam sel disebut ledakan oksigen (pernapasan), yang dapat didaftarkan menggunakan tes NBT. Dalam perumusan tes ini, zat nitrosinium tetrazolium ditambahkan ke fagosit, diserap oleh sel dan, dengan adanya spesies oksigen reaktif, berubah menjadi zat berwarna biru tua, diformazan. Semakin banyak butiran biru yang tetap di permukaan atau di dalam fagosit, semakin banyak bentuk oksigen aktif, semakin banyak pembunuhan yang bergantung pada oksigen.
Tes NBT diatur dalam dua versi: spontan dan diinduksi. Ketika membuat tes NBT spontan, fagosit dikultur di hadapan NST tanpa aktivasi awal sel, ketika melakukan tes NBT yang diinduksi, aktivator reaksi fagosit ditambahkan ke media kultur. Pengaturan tes NBT dalam dua varian memungkinkan menghitung cadangan fungsional sel, yang merupakan perbedaan antara jumlah (intensitas) sel positif diformazan yang diinduksi dan jumlah (intensitas) sel positif positif diformazan spontan. Nilai-nilai dari tes NBT yang diinduksi mencirikan aktivitas sel-sel fagosit di hadapan stimulus antigenik dan dianggap sebagai kriteria kesiapan mereka untuk fagositosis lengkap. Tes NBT spontan memungkinkan seseorang untuk memperkirakan tingkat aktivasi mekanisme pembunuhan yang bergantung pada oksigen dari fagosit yang tidak teraktivasi. Ini mencirikan tingkat aktivasi sistem mikrobisidal intraseluler.
Untuk membentuk tes NBT spontan, 0,05 ml larutan 0,2% NBT dalam buffer kalium fosfat (0,1, pH 7,3) dan 0,05 ml buffer yang sama ditambahkan ke 0,1 ml darah. Secara paralel, sampel ditempatkan untuk memperhitungkan uji NBT yang diinduksi, di mana, bukannya 0,05 ml buffer, volume yang sama dari aktivator fagositik ditambahkan (misalnya, pirogenal pada konsentrasi 50 μg / ml). Campuran reaksi dipanaskan dalam penangas air pada suhu 37 ° C (30-60 menit). Apusan dengan kerapatan sedang disiapkan, dikeringkan di udara dan difiksasi dalam etil alkohol atau campuran Nikiforov (20 menit), kemudian dicat dengan larutan encer merah netral (0,1%, 1 menit)
Setelah reaksi, apusan darah dilakukan dengan mikroskop di bawah pencelupan (lensa 100 ×, 10 lensa mata). Di antara 100 sel, proporsi neutrofil teraktivasi (DAN,%) yang mengandung butiran diformazan dihitung. Menurut jumlah dipherformazan yang disimpan dalam sel, aktivitasnya dievaluasi dalam unit acak dan indeks aktivasi neutrofil (IAN, unit bekas) dihitung:
dimana HNeg. - jumlah sel yang tidak mengandung butiran diformazan;
H1 - jumlah sel di mana luas endapan diformazan kurang dari 1/3 dari luas nukleus;
H2 - jumlah sel di mana endapan diformazan mengambil dari 1/3 ke seluruh ukuran inti;
H3 - jumlah sel di mana endapan diformazan menempati area yang lebih luas dari nukleus.
Penurunan koefisien mobilisasi (KM) dilakukan sesuai dengan rumus berikut: