Diagnosis PCR untuk hepatitis C

Hepatitis C adalah peradangan sel-sel hati yang terjadi sebagai akibat dari infeksi virus HCV (hepatitis C) melalui kontak dengan darah orang yang terinfeksi. Kode genetik flavivirus HCV dilakukan oleh molekul RNA (ribonuclenic acid) yang terkandung dalam struktur virus. Fenomena yang mengancam jiwa ini dibedakan oleh kerahasiaan pada tahap awal patologi. Interval waktu antara infeksi dan timbulnya gejala (respons sistem kekebalan) dapat dari satu bulan hingga enam bulan. Sebagai aturan, penyakit ini mengambil bentuk kronis dan sulit disembuhkan.

Pengobatan modern memungkinkan Anda mendiagnosis patologi dengan kerusakan hati ringan. Metode diagnostik yang paling umum dan efektif termasuk analisis PCR. Pertimbangkan dalam artikel ini apa itu dan jenis apa yang ada.

Apa penelitiannya?

Analisis PCR untuk hepatitis C adalah pemeriksaan laboratorium yang mendeteksi flavirus, bahan genetik asam ribonuclelenic (RNA). Ini menentukan jumlah molekul RNA dalam darah, kualitas bahan biologis, jenis genetik flavirus HCV.

Metode PCR untuk hepatitis C memungkinkan untuk mendeteksi jumlah minimum flavirus sebelum pembentukan antibodi, sebagai aturan, segera setelah infeksi.

Penelitian ini sering disebut sebagai analisis RNA, karena mendeteksi partikel asam ribonukleat memiliki ukuran 30-60 nm yang terkandung dalam flavavirus.

Penelitian dilakukan sebagai berikut: pada perut kosong, pasien memberikan darah dari vena, yang kemudian diuji dengan berbagai metode:

• PCR Real-Time dilakukan dengan cara otomatis tertutup dan memiliki batas lebih rendah untuk deteksi virus RNA, sama dengan 15 IU / ml;
• COBAS AMPLICOR dengan sensitivitas 50-100 IU / ml.

Semakin tinggi ambang sensitivitas teknik diagnostik, semakin besar peluang untuk menemukan konten virus terendah dalam bahan biologis yang sedang diselidiki.

Apa jenis analisis yang digunakan

Analisis yang telah berhasil digunakan selama beberapa dekade disebut hepatitis PCR, dan dapat dideteksi dengan mudah dan cepat. Dalam kedokteran, ada dua metode reaksi, yang pada dasarnya berbeda satu sama lain:

• Metode kualitatif mengungkapkan keberadaan bahan biologis dari sumber genetik virus tertentu;
• Analisis kuantitatif mengukur jumlah materi genetik, yang memungkinkan untuk menentukan tahap patologi atau menilai efektivitas kursus terapi;
• genotyping menentukan jenis virus yang ada dalam tubuh.

Secara umum, tes darah membantu mengidentifikasi sifat viremia dan tipe genetik patogen. Sebagai aturan, penelitian dilakukan 1 kali tergantung pada tingkat sensitivitas sistem diagnostik. Jika perlu, pengujian ulang dilakukan menggunakan reagen ultrasensitif.

PCR berkualitas tinggi

Apakah RNA PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C? Inti dari reaksi terletak pada keberadaan urutan RNA hepatitis, dan reaksi hanya mungkin terjadi dengan adanya protein virus dari etimologi yang serupa dalam ELISA. Dalam proses perbandingan, beban dan kemungkinan kerusakan pada daerah hati terdeteksi.

Ciri khas dari metode ini adalah kemampuan untuk mendeteksi keberadaan gen yang terpisah.

Perlu dicatat bahwa setelah menerima hasil tes PCR dan ELISA, pasien memerlukan perawatan yang tepat, terlepas dari apa hasil akhir immunoassay. Positif menunjukkan infeksi, dan PCR negatif menunjukkan berkurangnya jumlah partikel virus relatif terhadap tingkat sensitivitas.

Ada beberapa kondisi yang mempengaruhi produksi PCR dan ELISA negatif:

• kurangnya kondisi pengumpulan material yang tepat;
• analisis yang dihasilkan mengandung kontaminasi;
• dalam kasus injeksi heparin awal kepada pasien.

Pasien tidak perlu mengikuti aturan tertentu untuk pengambilan sampel darah untuk analisis PCR, dalam hal ini kualitas analisis ini tergantung pada profesional medis yang melakukan prosedur. Kemampuan untuk mengetahui keberadaan penyakit (terutama dalam bentuk akut) muncul dalam beberapa minggu setelah infeksi.

Analisis kuantitatif

Tes kuantitatif direkomendasikan untuk mendeteksi viral load segera sebelum pembentukan terapi lebih lanjut dan reaksi tubuh. Proses pengambilan sampel darah dilakukan dengan cara yang sama bahwa dengan PCR dan ELISA berkualitas tinggi, satu-satunya kondisi adalah tidak adanya kemungkinan merokok pasien sebelum prosedur.

Berkenaan dengan karakteristik yang diperoleh dari studi data, peningkatan beban ditandai dengan indikator dari 800000 IU / ml, rendah - 400000 IU / ml. Kehadiran virus dalam tubuh pasien diindikasikan oleh PCR karena hepatitis bukan tes kualitatif negatif.

Penelitian semacam ini memungkinkan untuk menentukan seberapa berbahaya pasien bagi orang-orang di sekitarnya. Misalnya, mengidentifikasi tingkat tinggi menunjukkan peningkatan infektivitas pasien. Selain itu, hasil analisis membantu merumuskan pengobatan lebih lanjut yang paling efektif dan menentukan seberapa banyak terapi yang ada dianggap efektif.

Respon negatif cepat dari tes menunjukkan keberhasilan teknik yang dipilih, dan yang lambat menunjukkan perlunya penyesuaian dan penggunaan perawatan multi-faceted.

Proses mengambil prosedur analisis tergantung pada hari tertentu dari perjalanan penyakit. Penentuan pertama dilakukan pada hari pertama setelah pasien dirawat di rumah sakit, kemudian prosedur diulang pada 4, 12 dan 24 minggu setelah minum obat.

Dengan demikian, analisis kuantitatif menunjukkan pengobatan mana yang paling efektif, durasi terapi yang tersedia dan bahaya pasien dalam kaitannya dengan orang lain.

Genotipe

Dalam studi analisis bahan, penting untuk menentukan keakuratan genotipe virus, yang terjadi. Saat ini, ada 11 varietas virus hepatitis C, yang pada gilirannya termasuk subspesies tertentu.

Semua spesies ini merespon secara berbeda terhadap perawatan yang berbeda, dengan varietas individu benar-benar resisten terhadap banyak obat.

Genotipe memungkinkan untuk menentukan dan menunjukkan keadaan hati. Tidak jarang hasilnya “tidak diketik” dalam hasil, yang berarti bahwa virus dalam darah pasien tidak terdeteksi oleh sistem tes ini. Ini dapat dideteksi jika genotipe tertentu tidak cocok dengan zona ini. Dalam situasi seperti itu, analisis dilakukan berulang kali, dan sistem yang lebih sensitif digunakan untuk mempelajari materi.

Metode Ultra Sensitif

Metode ultrasensitif diperlukan dalam kasus-kasus tertentu ketika diagnosis hepatitis tidak dapat dilakukan dengan metode lain, dan kapan untuk mengambil analisis ditentukan oleh dokter yang hadir:

• jika Anda mencurigai adanya virus hepatitis C pada pasien dengan beragam penyakit yang tersembunyi;
• adanya antibodi terhadap virus hepatitis C, tidak dikonfirmasi oleh diagnosa PCR;
• untuk menentukan kualitas efektivitas metode perawatan yang dipilih, dan mengkonfirmasi eliminasi penyakit.

Sensitivitas metode ini jauh lebih tinggi daripada yang biasa digunakan, namun metode ini tidak mengecualikan memperoleh hasil yang salah, baik positif maupun negatif. Dalam situasi seperti itu, penting untuk mengontrol kualitas prosedur dan kemungkinan kontaminasi bahan itu sendiri.

Penjelasan analisis PCR

Penguraian analisis dilakukan berdasarkan bahan yang disajikan, sedangkan hasil penelitian laboratorium mencakup data tertentu yang dijelaskan di atas.

Transkrip dapat mencakup reaksi berantai PCR polimerase positif dan ELISA negatif dalam pengujian, yang berarti bahwa pasien tidak memiliki tanda-tanda hepatitis C dalam darah, tetapi di masa lalu ia telah mentransfer bentuk akut penyakit. Sebagai aturan, saat mendiagnosis, spesialis menggunakan indikator tes PCR.

Meringkas semua hal di atas, dapat disimpulkan bahwa selama analisis adalah penting untuk mengamati semua aturan dan rekomendasi sehingga hasil yang diperoleh seakurat mungkin, dan berdasarkan data yang diperoleh dimungkinkan untuk menentukan efektivitas terapi yang digunakan dan peluang selanjutnya untuk pemulihan penuh.

Analisis kualitatif untuk hepatitis C

8 Maret 2017, 12:29 Artikel pakar: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547

Analisis kualitatif reaksi rantai polimerase - PCR untuk hepatitis C menentukan ada atau tidaknya HCV dalam tubuh. Dalam kondisi laboratorium, struktur RNA diselidiki, yang akan mencakup virus. Dalam hal deteksi virus C, perlu menjalani pengobatan, karena keadaan hati yang terabaikan akan mengakibatkan konsekuensi yang serius. PCR berkualitas tinggi dilakukan setelah pemulihan untuk memastikan tidak adanya antibodi. Diangkat dan untuk inspeksi rutin. Dengan konsentrasi rendah agen penyebab dalam darah, PCR (kualitatif) tidak dapat mendeteksi apa pun, karena sistem diagnostik memiliki ambang sensitivitasnya sendiri. Dalam kasus tahap awal penyakit atau bentuk ringan, PCR dilakukan oleh ultradiagnostik pada peralatan ultra-sensitif.

Apa itu virus RNA?

Istilah RNA dari virus hepatitis C (atau RNA virus hepatitis C) adalah penyakit hati itu sendiri. Virus C berikatan dengan sel tubuh yang sehat dengan cara menembus ke dalam. Seiring waktu, menyebar ke seluruh tubuh, perlu hanya untuk masuk ke dalam darah. Akibatnya, patogen menembus hati, menyatu dengan sel-selnya dan bekerja keras. Sel-sel hati (hepatosit) bekerja di bawah pengaruhnya, mengalami perubahan, dan dari sini mereka mati. Semakin lama virus C ada di hati, semakin besar jumlah sel yang mati. Seiring waktu, penyakit berbahaya berkembang, yang mengarah ke degenerasi dan kematian ganas.

Infeksi hati dengan jenis virus ini mungkin tidak memanifestasikan dirinya secara eksternal. Selama bertahun-tahun atau beberapa dekade, orang yang terinfeksi merasa benar-benar sehat, dan hanya pemeriksaan acak yang paling sering mengungkapkan patologi. Ketika mendonorkan darah untuk hepatitis, sebagian dari rantai RNA (asam ribonukleat), yang merupakan bagian dari gen manusia (DNA), diperiksa. Hasil tes laboratorium tidak boleh digunakan untuk pengobatan sendiri, karena ini hanya indikator. Gambaran yang tepat dan diagnosis lebih lanjut lebih baik ditentukan oleh dokter.

Ketika dilakukan: indikasi untuk penelitian

Dalam konfirmasi HCV, analisis PCR dilakukan (reaksi berantai polimerase). Studi PCR membantu menemukan agen penyebab dalam struktur RNA dan meresepkan terapi yang efektif. Diangkat dalam kasus berikut:

• deteksi tanda-tanda peradangan hati;
• studi penyaringan untuk pencegahan;
• pemeriksaan orang yang berhubungan;
• diagnosis hepatitis asal campuran (penentuan patogen utama);
• menentukan tingkat aktivitas reproduksi virus dalam bentuk kronis;
• sirosis hati;
• untuk menentukan efektivitas pengobatan yang ditentukan.

Penelitian PCR meresepkan dokter untuk menentukan efektivitas program pengobatan hepatitis.

Ada analisis kualitatif dan kuantitatif PCR. PCR kuantitatif menunjukkan persentase RNA dengan pembawa virus dalam darah, dan kualitatif menunjukkan ada atau tidaknya virus. Indikator kualitas yang positif (adanya RNA Hepatitis C) juga perlu penelitian kuantitatif. Tingkat konsentrasi tinggi dari agen penyebab hepatitis C dikaitkan dengan risiko penularannya, yaitu infeksi orang lain. Angka yang rendah lebih bisa diobati. Jumlah virus RNA dalam darah tidak terkait dengan intensitas penyakit. Analisis PCR juga dilakukan dalam kasus terapi interferon untuk menentukan durasi dan kompleksitas kursus pengobatan.

Fitur analisis PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C

Analisis kualitatif ditugaskan dengan indikator reaksi berantai polimerase untuk semua pasien yang memiliki antibodi terhadap hepatitis C dalam darah mereka. Mereka yang sakit dan pulih harus mengikuti tes ulang. Dianjurkan untuk mengambil analisis untuk hepatitis B, kemudian, dalam hal kesimpulan positif, dan untuk hepatitis D. Juga, reaksi yang dianalisis secara kualitatif harus dilakukan bersamaan dengan tes darah lainnya. Analisis akan menampilkan gambaran lengkap penyebaran virus.

Dari hasil tes, hanya tes positif untuk hepatitis C yang akan terlihat atau negatif, yaitu ada atau tidak adanya virus. Jika outputnya "terdeteksi", maka virusnya dan terus menjadi aktif. Penunjukan "tidak terdeteksi" menunjukkan tidak adanya virus atau jumlahnya kecil. Dengan indikator ini, harus diingat bahwa sensitivitas analitis sistem diagnostik berbeda dan RNA hepatitis C mungkin masih ada dalam darah, tetapi tidak termanifestasi dalam analisis.

Metode PCR yang sangat sensitif mengungkapkan ultra hepatitis C bahkan dalam jumlah sedikit. Penelitian hibridisasi fluoresensi digunakan, yang berkali-kali lebih tinggi dari sistem PCR standar. Metode ini digunakan dalam beberapa kasus:

• diduga bentuk tersembunyi hepatitis C;
• Diagnosis PCR tidak mengkonfirmasi patogen, tetapi ada antibodi;
• dalam hal pemulihan;
• untuk mendeteksi infeksi dini.

Kembali ke daftar isi

Analisis decoding

Penguraian HCV PCR mempengaruhi keputusan akhir ketika membuat diagnosis, khususnya, dengan metode ultrametod. Kerugian utama dari penelitian ini adalah kepatuhan yang ketat terhadap kondisi steril untuk sampel dan bahan. Sedikit penyimpangan kadang-kadang menunjukkan kesimpulan analitik yang tidak akurat, mempersulit diagnosis dan perawatan selanjutnya. Analisis PCR untuk penentuan hepatitis RNA tidak selalu dengan penuh percaya diri menunjukkan gambaran penyakit, kadang-kadang ketidakakuratan diperbolehkan, dan dari dua arah.

Mendiagnosis virus hepatitis, disarankan untuk menggunakan pemeriksaan komprehensif.

Norma indikator

Tidak adanya antibodi JgM terhadap virus hepatitis C dalam hasil penelitian dianggap sebagai norma dalam analisis reaksi berantai polimerase. Pada saat yang sama, temuan analisis serologis menunjukkan adanya antibodi terhadap virus C dan ini juga dalam kisaran normal. Definisi kualitatif tidak menunjukkan intensitas penyakit, hanya mengungkapkan agen penyebab hepatitis C dalam RNA. Analisis ini diulang setelah perawatan untuk mengkonfirmasi pemulihan yang sebenarnya.

Penyimpangan

Jika terdapat antibodi JgM terhadap RNA HCV, ini menunjukkan infeksi yang berkembang. Penyakit pada saat yang sama terjadi secara akut atau kronis, dimanifestasikan dalam berbagai tahap. Jika penurunan jumlah antibodi dicatat, analisis akan menunjukkan bahwa hasil pengobatan dicapai selama pemulihan. Ada kasus yang sangat jarang dari temuan positif palsu dalam diagnosa. Mereka ditemukan pada wanita selama kehamilan dan pada orang dengan penyakit menular lainnya.

Diagnosis dengan PCR untuk Hepatitis C

Tidak semua orang tahu mengapa mereka menggunakan metode diagnostik PCR untuk hepatitis C. Salah satu kelompok penyakit yang paling umum adalah penyakit menular pada saluran pencernaan. Perut (borok), usus (radang usus besar, radang usus besar) dan hati (hepatitis) paling sering terkena.

Di antara semua organ yang tercantum di atas, beban terbesar dibebankan pada hati. Dalam tubuh, peran hati sangat penting:

1. Hampir semua reaksi metabolisme terjadi di hati (di sinilah semua jenis komponen vital terbentuk yang memungkinkan tubuh berfungsi penuh).
2. Hati adalah organ detoksifikasi utama. Dengan bantuannya (khususnya, melalui empedu), banyak substrat dihilangkan yang dapat menyebabkan keracunan dan menyebabkan konsekuensi serius.

Sayangnya, banyak orang tidak memantau kesehatan mereka, itulah sebabnya hati mulai menderita. Hepatitis berbagai etiologi (virus, toksik) biasanya berkembang.

Definisi hepatitis

Hepatitis virus menempati tempat penting di antara penyakit hati. Tingkat keparahan perjalanan penyakit, kompleksitas pengobatan menempatkan mereka di tempat pertama di antara patologi sifat lain dari organ ini.

Semua hepatitis dibagi menjadi akut dan kronis. Hepatitis A dan B diklasifikasikan sebagai akut, di antara hepatitis C kronis yang lebih dulu.

Penyakit ini disebabkan oleh virus hepatitis C. Ciri khasnya adalah penyakit ini dapat bertahan lama tanpa manifestasi klinis.

Ini ditularkan terutama melalui darah. Dengan aliran darah, virus memasuki hati, di mana ia mulai berkembang biak di dalam sel-selnya. Sebagai hasil dari akumulasi virion, kerusakan hepatosit yang terinfeksi terjadi. Menanggapi hal ini, antibodi mulai diproduksi, yang mulai menyerang sisa-sisa hepatosit. Karena itu, kolam melawan sel-sel hati dikembangkan dari waktu ke waktu, yang memperburuk perjalanan penyakit.

Karena fakta bahwa penyakit ini ringan tanpa gejala atau tanpa gejala, dan tanda-tanda klinis hanya muncul ketika sel dipengaruhi secara signifikan, penyakit ini membutuhkan penciptaan metode diagnostik untuk mendeteksi keberadaannya dan mengambil tindakan yang tepat.

Diagnosis hepatitis C: analisis kualitatif dan kuantitatif

Saat ini, untuk diagnosis hepatitis C, metode seperti biopsi hati dan imunogram digunakan.

Mereka memungkinkan Anda untuk secara langsung menentukan keberadaan hepatosit yang terinfeksi (biopsi hati) atau antibodi spesifik terhadap sel yang terkena (immunogram). Namun, ada metode yang memungkinkan Anda menentukan keberadaan virus itu sendiri. Ini adalah reaksi berantai PCR - polimerase.

Inti dari metode ini terletak pada kenyataan bahwa dalam kondisi tertentu, produksi rantai RNA terjadi. Ini disebabkan oleh fakta bahwa ada fragmen partikel virus dalam darah atau biopsi yang dipertanyakan. Ketika menghubungkan mereka dengan beberapa molekul dalam medium, sintesis rantai saling melengkapi dengan viral load terjadi. Dalam analisis dan perbandingan selanjutnya dengan urutan nukleotida yang diketahui dari virus hepatitis C, adalah mungkin untuk menentukan apakah virus ada di dalam tubuh dan apakah ada kerusakan hati.

PCR dilakukan setelah deteksi antibodi spesifik terhadap virus hepatitis dalam darah. Setelah tes dilakukan hasilnya - RNA "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi". Kadang-kadang ia mungkin mengatakan "tidak cukup bahan" - dalam kasus ini, tes ulang untuk hepatitis C diperlukan.

Jika jumlah partikel virus kurang dari jumlah minimum yang disyaratkan, maka kita dapat mengatakan bahwa tidak ada hepatitis, dan jumlah minimal materi genetik dapat "bingung" karena meniru materi genetik atau beberapa urutan nukleotida yang dapat bertepatan dengan virus.

1. Dengan PCR, hasil negatif dapat diamati ketika memang ada partikel virus dalam darah, tetapi mereka sangat kecil (infeksi terjadi baru-baru ini atau analisis didahului dengan terapi antivirus jangka panjang dan intensif) sehingga sistem uji tidak dapat menentukan konsentrasi mereka secara normal. RNA - "tidak terdeteksi."
2. Jika PCR memiliki hasil positif, maka ada begitu banyak partikel virus dalam darah sehingga jumlahnya melebihi ambang batas sensitivitas yang lebih rendah dari sistem pengujian. Dalam hal ini, ada risiko tinggi mengembangkan proses infeksi (atau sudah ada pada tahap yang agak lanjut). Biasanya jumlah virus yang tinggi sudah menjadi indikasi untuk perawatan dan transplantasi hati selanjutnya.

Terkadang sebuah tes bisa menjadi false positive atau false negative.

Hasil PCR negatif palsu dari hepatitis diamati dalam kasus ketika beberapa komponen hadir dalam media reaksi yang menghambat pembentukan salinan partikel virus. Karena hal ini, tidak mungkin untuk mendapatkan gambaran yang benar tentang keadaan darah, yang berkontribusi pada perjalanan virus dan perkembangan penyakit. Kehadiran heparin dalam darah juga dapat mempengaruhi reaksi (dengan mengurangi viskositas relatif darah). Interpretasi yang salah dari analisis dimungkinkan bahkan ketika kondisi transportasi dan penyimpanan material yang sedang diselidiki tidak terpenuhi.

Hasil positif palsu, ketika hepatitis C didiagnosis, PCR paling sering terjadi ketika tabung atau lingkungan kerja terkontaminasi. Selain itu, hasil positif dapat diamati dengan adanya virus hepatitis dari kelompok lain (karena reaksi silang).

Analisis kualitatif PCR untuk deteksi hepatitis C

Kehadiran dalam darah sejumlah besar cryoglobulin juga secara langsung mempengaruhi perilaku PCR. Karena itu, sangat penting untuk menentukan konsentrasi mereka dalam darah sebelum menguji hepatitis C untuk mendeteksi distorsi hasil di muka dan mencegahnya.

Setelah tes ini, menjadi jelas apakah ada partikel virus dalam darah. Ketika menentukan mereka, disarankan untuk segera memulai terapi antivirus untuk memperlambat perkembangan proses. Tidak seperti hepatitis B, tidak ada obat lengkap untuk hepatitis C; penyakit hanya masuk ke tahap laten dan mulai berjalan lebih lambat. Kerusakan hati tidak bisa dihindari. Pada tahap terakhir dari proses ini, ketika hati tidak lagi dapat mengatasi fungsinya, mungkin memerlukan transplantasi.

Perawatan ini dilakukan terutama dengan dua obat - interferon dan ribavirin.

Terbukti keefektifannya dalam memperlambat proses kekalahan hepatosit. Sepanjang jalan, terapi infus perlu diresepkan untuk memfasilitasi kerja hati.

Semua pasien yang telah melihat peningkatan jumlah partikel virus dalam darah harus didaftarkan ke hepatologis. Beberapa kali setahun, mereka direkomendasikan untuk menjalani pemeriksaan pencegahan untuk menentukan perkembangan proses dan deteksi indikasi transplantasi yang tepat waktu. Selain itu, dimungkinkan untuk menggunakan hepatoprotektor, meskipun pendapat dokter agak berbeda. Beberapa percaya bahwa obat ini memungkinkan Anda untuk menunda proses dan melindungi hepatosit yang masih tidak terpengaruh; yang lain yakin bahwa tidak ada gunanya meminumnya, dan terapi antivirus intensif harus dilakukan.

Dengan demikian, hepatitis C termasuk dalam kategori penyakit, yang identifikasi menunjukkan beberapa kesulitan. Meningkatkan metode diagnostik, serta pemeriksaan pencegahan yang tepat waktu akan mengurangi kejadian penyakit ini. Yang juga penting adalah pencegahan penyakit ini. Seseorang harus hati-hati menghindari kontak dengan darah, menolak untuk minum obat, hanya kemudian penyakit ini akan diberantas. Hal utama dalam pencegahan dan pengobatan adalah sikap sadar pasien terhadap kesehatannya.

Melakukan analisis PCR untuk hepatitis C dan mendekode hasilnya

Analisis PCR Hepatitis C adalah penelitian yang tujuan utamanya adalah mengidentifikasi bahan genetik agen penyebab. Analisis mengungkapkan agen penyebab penyakit dengan menggunakan reaksi berantai polimerase. Diagnosis ini memiliki tingkat akurasi, spesifisitas yang tinggi untuk mendeteksi tidak adanya atau adanya infeksi virus.

Inti dari diagnosis

Untuk melakukan analisis PCR untuk menentukan virus hepatitis C dari pasien, diambil darah vena, yang berpotensi mengandung RNA (asam ribonukleat) HCV dari virus yang diinginkan.

Tes PCR untuk Hepatitis C menyiratkan prosedur untuk menambah partikel darah pasien:

• primer (wilayah pendek yang disintesis secara artifisial dari gen yang diperlukan);
• enzim khusus (RNA polimerase).

Setelah pengambilan sampel, bahan biologis dikirim untuk penelitian ke laboratorium. Satu porsi darah diperlukan untuk analisis PCR langsung, yang kedua dikirim untuk pengujian oleh ELISA. Enzim ini mampu dalam waktu singkat meningkatkan jumlah materi genetik virus patogen. Dalam peralatan khusus, beberapa siklus proses panas dan pendinginan dilakukan. Pada tahap akhir, materi yang diperoleh dibandingkan dengan gen virus dan kesimpulan dibuat tentang ada atau tidak adanya patologi dalam tubuh pasien.

Esensi dan pelaksanaan analisis PCR di laboratorium. Difilmkan oleh SiberianMedicalLaboratory.

Jenis penelitian

Ada 3 jenis diagnostik, yang memungkinkan untuk menentukan keberadaan virus hepatitis C dalam tubuh manusia:

• genotyping;
• kualitas;
• kuantitatif.

Metode kualitatif

Diagnosis hepatitis C dengan metode kualitatif berlaku untuk pasien yang antibodi terhadap virus terdeteksi dalam tes darah. Dalam kasus keberadaan fase akut RNA HCV, tindakan diagnostik tersebut dapat menentukan keberadaan penyakit dalam 1-2 minggu setelah infeksi. Selama periode ini, antibodi terhadap hepatitis C mungkin belum dikembangkan.

Metode kuantitatif

Metode diagnostik kuantitatif digunakan untuk menentukan konsentrasi virus dalam sampel darah. Tes semacam itu untuk viremia (tingkat konsentrasi) memungkinkan untuk secara akurat menentukan jumlah unit RNA virus. Hasil akhirnya dinyatakan dalam volume yang sesuai. Jika kita berbicara tentang analisis kuantitatif, maka indikator diukur dalam 1 ml (1 cub. Cm).

Parameter viral load berarti tingkat infeksi penyakit, yaitu, mencerminkan tingkat "infeksi" pasien. Dalam praktiknya, ini berarti bahwa semakin tinggi konsentrasi virus dalam darah, semakin besar peluang bagi pasien untuk menginfeksi orang lain dengan hepatitis C. Metode penelitian kuantitatif juga memungkinkan Anda menentukan kualitas dan efektivitas pengobatan.

Genotipe

Genotyping mengungkapkan mutasi agen penyebab penyakit. Sebelum menentukan rencana perawatan, genotipe virus ditentukan: kualitas dan lamanya terapi tergantung padanya. Misalnya, dalam pengobatan penyakit tipe-I, efisiensi adalah 60%, dalam kasus tipe II, tipe III - sekitar 80%.

Manfaat Analisis PCR Hepatitis

Di antara keuntungan utama dari prosedur ini adalah:

1. Kemungkinan diagnosis dini. Analisis PCR mampu mendeteksi keberadaan virus pada tahap awal infeksi.
2. Hasil kesalahan rendah. Sumber daya biologis yang dipelajari memungkinkan Anda untuk mendiagnosis bagian materi genetik yang merupakan karakteristik dari hanya satu jenis infeksi virus. Keadaan ini memungkinkan untuk mencegah hasil diagnostik palsu.
3. Tingkat kepekaan tinggi. Analisis PCR dapat mendeteksi sejumlah kecil virus RNA, yang juga memungkinkan untuk melacak infeksi laten pada waktunya.

Indikasi untuk

Diperlukan tes PCR untuk hepatitis C, jika tersedia:

• memiliki kontak dengan orang sakit, yang dapat menyebabkan infeksi;
• gejala sirosis hati (pembesaran limpa, perubahan yang tidak seperti biasanya dalam ukuran hati, deteksi pleksus vena pada perut di bawah kulit);
• hasil positif ELISA;
• peningkatan aktivitas AST dan ALT (dimanifestasikan dalam analisis biokimia darah);
• kebutuhan untuk mengendalikan pelaksanaan terapi antivirus;
• tahap awal pengobatan untuk kebutuhan untuk menetapkan viral load;
• melaksanakan tahap akhir terapi untuk menyingkirkan kemungkinan kekambuhan;
• pasien memiliki hepatitis B untuk mengesampingkan perkembangan kerusakan hati campuran.

Bagaimana mempersiapkan donor darah untuk penelitian PCR

Persiapan untuk analisis PCR mencakup rekomendasi berikut:

• darah diambil di pagi hari;
• analisis dilakukan pada perut kosong, sehingga disarankan untuk istirahat antara asupan makanan terakhir 8-10 jam;
• beberapa hari sebelum diagnosis harus dikeluarkan makanan berlemak, pedas dan goreng, minuman beralkohol dan merokok;
• satu hari sebelum analisis, seseorang harus menahan diri dari aktivitas fisik yang berat, tidak termasuk kelas di gym atau kolam renang.

Hasil analisis: norma dan penyimpangan

Analisis itu sendiri tidak bersifat jangka panjang, dan spesialis hepatologis atau spesialis penyakit menular yang berkualitas tinggi mendekripsi hasil PCR untuk hepatitis C. Berdasarkan hasil analisis, pasien didiagnosis.

Untuk menguraikan dengan benar hasil survei, indikator berikut diperhitungkan:

• analisis biokimia darah;
• data USG;
• hasil biopsi.

Interpretasi analisis kuantitatif

Ketika memperoleh hasil analisis kuantitatif PCR, indikator berikut ini diperhitungkan:

Metode PCR untuk mendeteksi hepatitis C

PCR adalah reaksi berantai polimerase, yang digunakan untuk menentukan keberadaan hepatitis C dalam serum. Hasilnya dapat positif dan negatif.

Kelebihan metode PCR

Metode diagnostik ini memiliki keuntungan sebagai berikut:

1. Metode PCR memungkinkan untuk menentukan hasil berikut:
   • keberadaan virus RNA;
   • tingkat radiasi;
   • informasi genetik asli;
   • keunikan dan keunikan data genetik.
2. Anda dapat menggunakan materi klinis yang diperlukan:
   • darah;
   • plasma;
   • urin;
   • cairan tubuh dan kotoran;
   • dahak dan lainnya.
3. Memungkinkan Anda menentukan lebih dari satu mikroorganisme dalam darah sekaligus, tidak seperti sampel lainnya.
4. Mendapatkan hasil dalam 24 jam.
5. Metode yang disederhanakan untuk menyimpan dan mengangkut analisis, patogen ditentukan bahkan di lingkungan mati.
6. Keunikan PCR memungkinkan Anda mengidentifikasi mikroorganisme tertentu yang tidak dapat menerima sampel lainnya.
7. Tingkat sensitivitas yang tinggi dari reagen, tes ini adalah yang paling akurat dari jenisnya.

Fitur analisis kualitatif PCR

Tes kualitatif dilakukan untuk menentukan keberadaan virus dalam darah dan untuk mendapatkan hasil negatif atau positif.

Indikasi untuk jenis diagnosis ini adalah deteksi antibodi terhadap hepatitis C dalam tubuh pasien.

Kemungkinan hasil:

• terdeteksi (positif);
• tidak terdeteksi (negatif).

Tes kualitas tidak cocok untuk pasien dengan kandungan virus yang sangat rendah dalam darah, sehingga memiliki sensitivitas tertentu.

Hasil "terdeteksi"

Mendeteksi virus hepatitis C bisa beberapa minggu setelah infeksi tubuh, bahkan tanpa adanya antibodi terhadap patogen ini. Hasil ini menunjukkan keberadaan dalam tubuh dan golongan darah dari fragmen karakteristik RNA hepatitis C.

Pasien dianggap terinfeksi virus ini dan mengalami penyebaran sel patogen lebih lanjut dalam tubuh.

Hasil "tidak terdeteksi"

Pilihan ini menunjukkan bahwa dalam sampel bahan biologis yang diteliti tidak ada fragmen RNA khusus untuk hepatitis C. Ini adalah hasil negatif.

Sensitivitas tes tidak mengungkapkan kandungan fragmen RNA yang rendah, sehingga hasil yang "tidak terdeteksi" tidak selalu masuk akal.

Fitur interpretasi hasil

Fitur utama dari interpretasi hasil adalah sensitivitas ambang batas metode PCR.

Itu tergantung pada indikator berikut:

• keakuratan penelitian;
• jenis dan kualitas peralatan yang digunakan.

Perlu dicatat bahwa sensitivitas dapat bervariasi antara 10-500 IU / ml. Dari sini dapat diketahui bahwa jika ada virus dalam tubuh pasien yang diteliti dengan konsentrasi kurang dari 10 IU / ml, tes akan menunjukkan hasil “tidak terdeteksi”. Tetapi ini tidak berarti bahwa patogen sama sekali tidak ada.

Varian sistem diagnostik

Saat ini, ada opsi berikut untuk sistem diagnostik:

1. Jika darah diambil dari pasien yang menjalani pengobatan antivirus, sistem diagnostik dengan sensitivitas setidaknya 50 IU / ml harus digunakan. Analisis berikut digunakan untuk tujuan ini:
   • Cobas Ampicolor HCV-Test;
   • RNA HCV RealBest.
2. Untuk membuat diagnosis definitif "hepatitis C", perlu untuk mendeteksi virus RNA dalam tiga sampel bahan biologis yang berbeda. Rekomendasi ini dikembangkan oleh Organisasi Kesehatan Dunia. Jika hasilnya tiga kali negatif, diagnosis tidak dikonfirmasi.
3. Saat ini, selain metode PCR, ada tes yang lebih akurat, yang disebut TMA (metode amplifikasi transkripsi). Ambang sensitivitasnya jauh lebih tinggi daripada metode diagnosis lainnya.

Kisaran modifikasi virus yang terdeteksi

Pada tahap pengembangan genetika ini, beberapa jenis dan varian modifikasi virus diketahui.

Diagnostik laboratorium di negara kita dengan akurasi absolut dapat menentukan genotipe berikut:

Fitur analisis kuantitatif PCR

Analisis kuantitatif adalah definisi virus hepatitis C dalam tubuh manusia. Selama penelitian, RNA dan viral load dalam bahan awal ditentukan oleh PCR. Kalau tidak, kita dapat mengatakan bahwa tes ini memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi berapa banyak sel virus dalam cairan biologis. Untuk jenis penelitian ini, hanya darah vena yang digunakan. Tidak ada persiapan ujian khusus.

Analisis kuantitatif memungkinkan Anda untuk memantau pada tahap perawatan yang sudah dimulai dan mengevaluasi efektivitasnya. Untuk evaluasi, data uji diambil sebelum dan selama intervensi terapeutik. Dengan bantuan hasil yang diperoleh dimungkinkan untuk memprediksi perjalanan penyakit.

Dengan keberhasilan metode pengobatan yang dipilih setelah 3 bulan, jumlah RNA harus berkurang beberapa kali. Menurut rekomendasi, analisis kuantitatif dilakukan setelah satu, kemudian setelah tiga dan enam bulan. Hasil terakhir dengan keberhasilan perawatan harus negatif.

Evaluasi hasil uji PCR kuantitatif

Di negara kami, ada 2 opsi yang memungkinkan untuk menilai hasil tes PCR kuantitatif:

• jumlah salinan per mililiter cairan biologis;
• jumlah unit internasional per mililiter.

Untuk mendapatkan unit internasional, jumlah salinan dibagi 4.

• tinggi dengan PCR di atas 800.000 IU / ml;
• rendah dengan PCR di bawah 400.000 IU / ml.

Hasil tes kuantitatif memberikan 2 opsi:

• "Di bawah rentang pengukuran";
• "Tidak terdeteksi" (negatif).

Peringkat: "di bawah rentang pengukuran"

Kesimpulan seperti itu dibuat ketika tes RNA kuantitatif tidak mendeteksi agen penyebab hepatitis C dalam bahan sumber sel, tetapi virus masih ada dalam darah. Keandalan analisis dikonfirmasi oleh metode kualitatif, karena ambang sensitivitas uji kuantitatif mungkin tidak mendeteksi nilai-nilai dan konsentrasi patogen yang kecil.

Peringkat: "tidak terdeteksi"

Kesimpulan seperti itu dibuat ketika virus RNA hepatitis C tidak terdeteksi dalam bahan sumber selama diagnosis. Ini adalah hasil negatif.

Interpretasi hasil analisis uji PCR kuantitatif

Menggunakan indikator viral load menentukan:

• tingkat pengabaian penyakit;
• seberapa menularnya pasien;
• efektivitas terapi antivirus.

Semakin tinggi tingkat virus hepatitis C dalam tubuh, semakin berbahaya pasien bagi orang lain dan semakin progresif penyakitnya.

Hepatitis C PCR adalah metode diagnostik yang penting, terutama selama intervensi terapeutik. Berkat hasil negatif atau positif yang diperoleh, adalah mungkin untuk mengevaluasi efektivitasnya, sepenuhnya menyembuhkan pasien atau mempersingkat waktu perawatan.

Analisis PCR untuk Hepatitis C

Untuk diagnosis "virus hepatitis C kronis (CVHS)" memerlukan pemeriksaan komprehensif dari orang tersebut, yang meliputi studi klinis, laboratorium dan instrumental. Penting dari sudut pandang diagnosis untuk diagnosis yang benar adalah metode PCR - reaksi berantai polimerase.

Apa yang ditunjukkan oleh analisis ini dan mengapa diperlukan?

Metode laboratorium ini mendeteksi RNA dari virus hepatitis C dalam darah manusia. Bersama dengan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) untuk antibodi terhadap virus, PCR digunakan untuk membuat diagnosis CVHC dan genotipe patogennya. Penelitian ini adalah salah satu metode diagnostik laboratorium terbaru. Keandalannya di CVHS melebihi 97%, yang dianggap sebagai indikator yang sangat baik untuk penelitian.

Ada tiga tes darah PCR untuk CVHS: kualitatif, kuantitatif, dan genotipe virus. Studi pertama (analisis kualitatif) dari virus mendeteksi itu dalam darah, dan karenanya hanya digunakan untuk diagnosis.

Penelitian kedua (kuantitatif) menentukan tingkat viral load pada tubuh, oleh karena itu, digunakan untuk memantau efektivitas terapi.

PCR ketiga (genotip) mengklarifikasi diagnosis, menetapkan genotipe virus, yang sangat penting untuk penunjukan pengobatan antivirus yang tepat.

Inti dari teknik reaksi berantai polimerase adalah penggunaan enzim yang memperbanyak materi genetik patogen dalam biomaterial. Dalam proses replikasi seperti itu, tabung dengan darah dipanaskan beberapa kali dan didinginkan hingga suhu yang dibutuhkan untuk mempercepat reaksi enzimatik. Sebagai hasil dari manipulasi ini, jumlah genom virus meningkat berkali-kali, memungkinkannya untuk dideteksi bahkan dengan jumlah minimal.

Diagnostik PCR memiliki banyak keunggulan dibandingkan tes laboratorium lainnya:

• sensitivitas tinggi - 97-98%;
• spesifisitas analitik terjamin (mengungkapkan patogen yang tepat yang ingin Anda temukan, dan bukan strain yang terkait);
• kecepatan melakukan (dibutuhkan tidak lebih dari 2 hari untuk mendapatkan kesimpulan).

Tiga jenis tes PCR

Analisis PCR berkualitas tinggi ditugaskan untuk semua pasien yang analisis ELISA mendeteksi antibodi terhadap virus HVGS. Setelah melakukan PCR berkualitas tinggi, dua opsi respons dapat diperoleh: "RNA terdeteksi" atau "RNA tidak terdeteksi." Untuk mendeteksi jumlah minimum virus dalam darah, diperlukan sistem uji dengan sensitivitas minimal 50 IU / ml. Jika konsentrasi virus dalam darah pasien kurang dari yang diagnostik dapat tentukan, hasil penelitian mungkin negatif palsu. Untuk menghindari kesalahan diagnostik seperti itu, laboratorium yang melakukan diagnosa PCR harus dilengkapi dengan sistem pengujian yang sangat sensitif. Di laboratorium "Invitro", misalnya, tes dengan sensitivitas 15 IU / ml digunakan. Pekerja laboratorium berkewajiban untuk memberikan informasi tentang sensitivitas tes kepada pasien dan dokter atas permintaan pertama mereka.

Analisis kuantitatif PCR menentukan tingkat viremia, yaitu, konsentrasi patogen dalam darah, viral load. Hasil penelitian ini, berbeda dengan PCR berkualitas tinggi, dinyatakan dalam jumlah, misalnya, 2 × 10 * 6 IU / ml, yang berarti 2 juta unit internasional dalam 1 ml darah. Beberapa laboratorium menggunakan indikator lain - jumlah salinan / ml. Dua indikator ini mudah dikonversi: 1 unit internasional sama dengan 4 salinan RNA. Dengan demikian, 2 × 10 * 6 IU / ml akan berarti bahwa 8 × 10 * 6 salinan viral load dalam 1 ml, yaitu 8 juta kopi dalam 1 ml darah.

Genotipe adalah definisi dari satu dari enam genotipe virus. Gambaran klinis, tingkat perkembangan komplikasi hati dan prognosis untuk kehidupan masa depan pasien tergantung pada genotip agen penyebab. Genotipe virus sudah sangat penting pada tahap diagnosis, karena kombinasi obat dan durasi terapi yang akan diberikan kepada pasien tergantung pada penentuan yang benar.

Namun, bahkan penelitian laboratorium yang tampaknya “sempurna” ini memiliki kelemahan:

• studi ini mereplikasi materi genetik semua patogen, bahkan yang tidak hidup, yang dapat merusak hasilnya. Oleh karena itu, untuk memantau efektivitas dengan bantuan PCR, analisis ulang dilakukan tidak lebih awal dari 2 bulan setelah yang sebelumnya, sehingga virus yang mati dapat "meninggalkan" organisme pasien;
• bagian dari genom virus, yang ditentukan dengan menggunakan sistem uji, secara teoritis dapat hadir dalam virus atau mikroorganisme lain, sehingga ada kemungkinan tanggapan positif palsu;
• virus bermutasi dengan cepat. Terkadang kecepatan dan luasnya mutasi virus sangat tinggi sehingga sistem pengujian berhenti menangkap genomnya. Akibatnya, hasil negatif palsu dimungkinkan.

Untuk menyamakan kekurangan ini, produsen sistem uji laboratorium untuk diagnostik PCR secara konstan melakukan pengujian mereka, termasuk reaksi silang dan sensitivitas terhadap genotipe virus tertentu.

Bagaimana cara mengambil tes PCR untuk hepatitis C?

Agar kesimpulan pemeriksaan PCR dapat diandalkan, perlu untuk benar-benar mematuhi aturan persiapan untuk pelaksanaannya:

• penelitian dilakukan pada perut kosong (glukosa, lemak, mineral yang masuk ke dalam darah dari makanan, dapat mempengaruhi kecepatan dan kualitas reaksi enzim);
• jarak antara waktu makan terakhir dan pengambilan sampel darah untuk analisis minimal 8 jam;
• pada malam studi dilarang minum alkohol dan mengonsumsi makanan berlemak, periode eliminasi yang berlarut-larut;
• sehari sebelum pergi ke laboratorium harus menghindari tekanan fisik dan emosional yang kuat;
• sampai saat pengambilan sampel darah tidak dianjurkan untuk merokok.

Untuk menghindari munculnya kesimpulan yang salah, pasien yang diduga harus datang ke laboratorium sedikit lebih awal dari yang diambil darah. Butuh 15-20 menit bagi seseorang untuk menarik napas, tenang. Adrenalin, yang ada dalam darah setelah berjalan cepat, dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan.

Jika pasien yang dirujuk untuk analisis mengambil obat apa pun, ia harus memberi tahu dokter tentang hal ini. Ada kemungkinan bahwa beberapa dari mereka harus ditolak untuk beberapa waktu (jika mungkin).

Hasil analisis PCR untuk hepatitis C

Menguraikan hasil yang terlibat dalam dokter laboratorium dari laboratorium yang melakukan analisis. Decoding adalah penentuan penyimpangan hasil yang diperoleh dari norma. Tingkat indikator ditetapkan langsung oleh pabrikan sistem uji, yang digunakan oleh laboratorium untuk diagnostik. Oleh karena itu, tidak mengherankan bahwa di beberapa laboratorium viral load ditentukan dalam IU / ml, dan di laboratorium lain dalam salinan / ml.

Setelah menerima kesimpulan, perlu untuk dapat menafsirkannya dengan benar. Perawatan hasil penelitian harus dilakukan oleh dokter yang merawat pasien dengan hepatitis C. Hanya setelah pemeriksaan objektif, instrumental dan laboratorium pasien, dokter dapat memperoleh jumlah data yang cukup untuk interpretasi yang benar dari hasil PCR yang diperoleh.

Evaluasi analisis kualitatif, sebagai suatu peraturan, tidak menyebabkan kesulitan, bahkan pada pasien. Hasilnya hanya ada satu: "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi." Dalam hal ini, yang kedua adalah norma.

Indikator analisis kuantitatif lebih sulit diinterpretasikan. Ini menunjukkan tingkat viral load pada pasien. Bahkan di antara para ahli hepatologi, tidak ada konsensus tentang cara mengobati viremia yang terdeteksi. Kebanyakan dokter cenderung percaya bahwa beban tinggi lebih dari 8 × 10 * 5 IU / ml harus dipertimbangkan. Beban lebih dari 1 × 10 * 7 IU / ml dianggap sangat tinggi, sedangkan beban rendah kurang dari 4 × 10 * 5 IU / ml.

Tingkat viral load menunjukkan virulensi (agresivitas) virus: semakin besar jumlahnya dalam darah, semakin cepat komplikasi hati dapat berkembang. Konsentrasi tinggi virus dalam darah wanita hamil meningkatkan kemungkinan penetrasi melalui penghalang hemato-plasenta ke janin. Viremia juga memengaruhi efektivitas pengobatan: dengan jumlah yang rendah, efektivitas terapi lebih tinggi daripada yang tinggi.

Untuk menjadi percaya diri dalam keakuratan analisis PCR untuk hepatitis C, perlu untuk memberikan preferensi hanya untuk laboratorium yang terbukti baik. Kebijakan penetapan harga dalam hal ini seharusnya tidak memainkan peran utama.

Studi PCR tentang hepatitis C: jenis, indikasi, transkrip

Virus hepatitis C adalah penyakit serius yang terjadi dengan kerusakan hati. Pada delapan puluh persen pasien, itu menjadi kronis. Virus ini berkembang biak di sel-sel hati - hepatosit - dan menyebabkan kematian mereka. Jaringan mati digantikan oleh fokus jaringan ikat, fibrosis berkembang.

Ketika fibrosis berkembang, hati tidak dapat melakukan fungsinya, sirosis hati dimulai, yang berbahaya untuk komplikasinya: peningkatan tekanan dalam sistem vena portal, perdarahan saluran cerna, gangguan pembekuan darah, perubahan mental akibat kerusakan nuklei otak oleh produk-produk beracun.

Penyebab penyakit ini adalah infeksi oleh virus dari keluarga Flaviviridae, yang termasuk dalam jenis virus RNA. Ini berarti bahwa bahan genetik dimana protein dari patogen disintesis dikodekan dalam molekul asam ribonukleat. Infeksi terjadi melalui darah, seksual, dan dari wanita hamil ke janin. Sayangnya, jumlah waktu yang cukup besar dapat melewati antara infeksi dan awal produksi antibodi - dari dua minggu hingga enam bulan. Ini tidak memungkinkan untuk menentukan infeksi oleh ELISA dan memulai pengobatan pada tahap awal.

Apa itu analisis PCR?

PCR adalah metode analisis molekuler, yang memungkinkan untuk mendeteksi bahan genetik patogen yang sudah ada di minggu pertama setelah infeksi dengan bantuan reaksi berantai polimerase. Studi ini memiliki spesifisitas tinggi, akurasi, dan memungkinkan tidak hanya untuk menentukan ada atau tidaknya virus, tetapi juga konsentrasi dan genotipe.

Untuk penelitian ini, diambil darah pasien di mana virus RNA berpotensi berada. Primer ditambahkan ke darah - daerah disintesis secara artifisial dari gen yang diinginkan dengan ukuran kecil, dan RNA polimerase adalah enzim khusus yang berulang kali meningkatkan jumlah bahan genetik patogen. Menggunakan peralatan khusus, beberapa siklus pemanasan dan pendinginan dilakukan. Kemudian bahan tersebut dianalisis dan dibandingkan dengan gen virus yang diketahui, berdasarkan kesimpulan yang dibuat tentang ada atau tidak adanya infeksi.

Jenis analisis PCR untuk hepatitis C

Ada tiga jenis analisis PCR:

Analisis kualitatif PCR. Tahap pertama penelitian. Ini memungkinkan Anda mengidentifikasi materi genetik virus dalam darah.

Analisis kuantitatif PCR. Memungkinkan Anda untuk menentukan viral load - konsentrasi materi genetik patogen dalam satu mililiter darah. Penelitian ini dilakukan sebelum dimulainya terapi, dan kemudian pada minggu pertama, keempat, kedua belas, dan (jika kursus panjang) dua puluh empat minggu pengobatan untuk mengevaluasi efektivitasnya.

Genotipe Agen penyebab hepatitis C sering dan cepat bermutasi. Ada tujuh varian genotipe virus yang ditemukan di planet ini. Di Rusia, jenis pertama, kedua dan ketiga adalah umum. Masing-masing genotipe memiliki resistensi yang berbeda terhadap terapi, misalnya, efektivitas pengobatan tipe pertama adalah enam puluh persen, dan untuk genotipe kedua dan ketiga angka ini mencapai delapan puluh lima. Oleh karena itu, untuk memilih obat yang sesuai dan meresepkan pengobatan dengan durasi yang cukup, perlu untuk menentukan dengan tepat jenis virus apa yang terinfeksi oleh pasien.

Indikasi untuk analisis PCR untuk hepatitis C

Studi PCR ditentukan dalam kasus-kasus berikut:

• kontak dengan orang sakit di mana infeksi dapat terjadi;
• immunoassay enzim positif;
• tanda-tanda sirosis hati: perubahan ukuran hati, pembesaran limpa, penampakan pleksus vena subkutan di perut;
• munculnya gejala kerusakan hati: nyeri di perut kanan, kulit menguning;
• peningkatan aktivitas ALT dan AST dalam analisis biokimia darah;
• sebelum memulai pengobatan untuk menentukan viral load;
• untuk memantau efektivitas terapi antivirus;
• setelah perawatan untuk mengendalikan kekambuhan;
• di hadapan didiagnosis hepatitis B, untuk mengecualikan kerusakan hati campuran.

Penjelasan studi PCR tentang hepatitis C

Penguraian analisis PCR dan enzim immunoassay untuk hepatitis C harus dilakukan oleh spesialis hepatologis atau penyakit menular. Menganalisis hasil PCR diperlukan dalam kombinasi dengan data analisis biokimia darah, biopsi dan USG. Hanya dokter yang memenuhi syarat yang akan dapat menganalisis hasil penelitian dan, berdasarkan pada mereka, meresepkan perawatan yang benar.

Menguraikan analisis kualitatif.

Dalam bahan biologis yang dianalisis ditemukan bahan genetik patogen. Infeksi dikonfirmasi.

Infeksi tidak ada, atau jumlah RNA patogen di bawah batas sensitivitas.

Menguraikan analisis kuantitatif.

Tingkat normal untuk orang sehat. Ini berarti bahwa bahan uji tidak mengandung RNA Hepatitis C, atau konsentrasinya di bawah ambang sensitivitas penelitian.

Konsentrasi RNA di bawah kisaran kuantitasi. Hasil-hasil ini ditafsirkan dengan sangat hati-hati, menghubungkannya dengan data dari penelitian lain, seringkali dipelajari kembali.

Tingkat viral load pada konsentrasi tertentu dianggap rendah. Biasanya, penurunan jumlah virus berarti terapi berhasil.

Lebih dari 8 * 10 ^ 5 IU / ml

Tingkat viral load pada konsentrasi tertentu dianggap tinggi.

Lebih dari 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

Jumlah RNA berada di atas batas atas rentang kuantifikasi. Tidak mungkin untuk menarik kesimpulan tentang tingkat viral load dengan hasil ini. Biasanya dalam kasus seperti itu, tes diulangi dengan pengenceran sampel darah.

Decoding genotyping.

RNA dari genotipe tertentu terdeteksi

Virus hepatitis C dari genotipe dan subtipe tertentu terdeteksi dalam biomaterial. Hasilnya dikodekan dalam angka Romawi dan huruf Latin, misalnya - 1a, 2b. Secara total ada tujuh genotipe dan enam puluh tujuh subtipe, tetapi di Rusia hanya ada tiga jenis pertama.

RNA virus hepatitis C terdeteksi

RNA ditemukan dalam darah genotipe langka untuk Rusia, yang tidak dapat dikaitkan dengan tipe pertama, kedua atau ketiga. Dibutuhkan lebih banyak penelitian.

Hasil ini menunjukkan bahwa pasien sehat, atau bahwa jumlah RNA patogen terlalu kecil.

Ada kemungkinan bahwa analisis PCR untuk hepatitis C adalah negatif, dan uji imunosorben terkait-enzim mengenali antibodi terhadap virus. Ini berarti bahwa pasien memiliki hepatitis C akut dan sembuh sendiri. Sekitar dua puluh kasus infeksi mengakibatkan pemulihan spontan jika tubuh pasien memiliki resistensi yang cukup terhadap infeksi.

Meskipun PCR sangat akurat, hasilnya mungkin terdistorsi dalam situasi berikut:

• darah dipindahkan ke laboratorium dalam kondisi yang tidak pantas, suhunya dilanggar;
• sampel biomaterial terkontaminasi;
• ada sisa jejak heparin dan antikoagulan lain dalam darah;
• Peneliti ditemukan sebagai inhibitor - zat yang memperlambat atau menghentikan reaksi berantai polimerase.

Kelebihan PCR dibandingkan metode lain

Diagnosis pada tahap awal. PCR mendeteksi bahan genetik dari agen penyebab. Dengan menggunakan analisis imunofluoresensi, hanya imunoglobulin yang dapat diidentifikasi - zat yang diproduksi tubuh sebagai respons terhadap infeksi. Dalam kasus infeksi hepatitis C, kesenjangan antara infeksi dan timbulnya respon imun mungkin beberapa minggu dan bulan, pada saat ini ELISA tidak akan efektif. PCR akan memberikan jawaban pada minggu pertama setelah infeksi.

Probabilitas kesalahan rendah. Dalam materi yang diteliti, tentukan area materi genetik, yang merupakan karakteristik dari hanya satu jenis patogen. Ini menghilangkan hasil yang salah. Ketika kesalahan ELISA mungkin terjadi, karena jenis antibodi yang sama dapat dilepaskan terhadap berbagai virus - antibodi semacam itu disebut antibodi silang.

Sensitivitas tinggi. PCR memungkinkan untuk mendeteksi agen penyebab RNA bahkan dalam jumlah minimal. Ini memungkinkan untuk mengidentifikasi infeksi tersembunyi.

Bagaimana mempersiapkan donor darah untuk penelitian PCR

Untuk analisis PCR hepatitis C, darah vena dikumpulkan. Biasanya, dua bagian darah diambil dari vena pasien sekaligus: yang pertama dikirim untuk PCR dan yang kedua oleh ELISA. Hal ini dilakukan untuk menilai secara lebih akurat berapa banyak pasien yang terinfeksi virus, dan bagaimana kekebalan melawannya.

Biasanya pasien diharuskan untuk mematuhi aturan berikut:

• tes darah dilakukan di pagi hari;
• Interval antara makan terakhir dan donor darah harus delapan sampai sepuluh jam;
• dua atau tiga hari sebelum analisis, perlu untuk meninggalkan makanan yang digoreng dan berlemak, dan alkohol;
• selama dua puluh empat jam sebelum analisis, pasien harus menghindari aktivitas fisik: jangan membawa beban, jangan pergi ke gym atau kolam renang.